医学细胞生物学课程体系改革探讨

细胞生物学的理论知识已经渗透到医学科学的各个领域,是医学科学的基本组成部分,也是医学科学高水平发展的重要基础.随着医学科学和细胞生物学本身的快速发展,医学教育对于细胞生物学的需求日益增加,为了使医学细胞生物学教学体系适应我国医学教育的发展,第二军医大学细胞生物学教研室本着培养创新型人才、提高教育质量的思想,建立了一种新的医学细胞生物学课程体系.该教学体系的核心内容是将细胞生物学从内涵上融入医学科学教育,既有利于学生的学,又有利于教师的教,保证了"教"与"学"的有效性.     

医学细胞生物学实验教学改革的探索与实践

突出细胞生物学实验课教学的主体地位,实验课课程设置以验证性实验、综合性实验及创新性实验相结合,激发学生的积极性和主观能动性,培养学生的创新思维和分析问题解决问题的综合实践能力,取得了良好的教学效果.     

成体小鼠肝干细胞的长期体外培养和体内分化研究

目的：从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞，并分析其分化潜能。方法：利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养，通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果：从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长，不仅可稳定传代，而且移植至经致死剂量照射的小鼠体内能够形成脾结节，结节中含有肝细胞和胆管上皮细胞特异性标志的细胞。结论：成体小鼠肝脏中存在具有多潜能性的肝干细胞，该细胞的体外成功培养为肝干细胞生物学特性的研究及干细胞的应用奠定了基础。     

课程考核形式与学生创新能力的培养

本文从改变卷面考试命题形式 ,采用动态的考试形式 ,注重对学生实验能力的考查等方面 ,论述了课程考试形式与学生创新能力培养的关系     

Establishment of transgenic mouse lineages containing copies of an integrated pSPORT1 plasmid

Themutationtestsystemoftransgenicmicehasbecomeoneofthecentersofintensivestudyinthefieldsofgeneticsandgcnotoxicsinrecentyears.ItnotonlyallowstheinductionofDNAdamage,repair,nlutagcncsisandcarcinogenesistobestudiedinoneanlnlalsystenl;butalsoprovidesanefficientanimalmodelforconlparativcstudiesofgenemutationsinvariousorgansandtissuesforthefirsttime.Thelanlhdaphagevector--based-/transgenlcmousellncagcs,suchasBigBI..(y?..dM.,.M....{qjh...beensuccessfullyappliedtothestudyofgenenlutatlonsI)]a)I~oan…     

小鼠胚胎干细胞凝血因子IX基因的定向敲除

目的:将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因定向敲除,为建立血友病B的转基因小鼠模型奠定基础;摸索建立ES细胞基因打靶技术体系.方法:将线性化的针对小鼠mFⅨ基因组的基因打靶置换型载体(pMFⅨDEL)DNA用电穿孔法转入小鼠ES细胞,经过G418和GANC分组药物选择,用PCR和基因组Southern杂交两种方法,鉴定药物抗性细胞中发生同源重组的情况.结果:(1)从药物抗性细胞克隆中鉴定获得了4个发生了按所设计的方式进行了同源重组的ES细胞克隆;(2)观察到在Es细胞中,pMFⅨDEL载体DNA与内源mFⅨ基因发生同源重组的频率平均为1.67×10-6.结论:得到了4个mFⅨ基因已被敲除的ES细胞克隆;建立了ES细胞基因打靶的技术体系.     

视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

目的：从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子（ROP）并建立ROP－绿色荧光蛋白（GFP）融合基因转基因小鼠模型。方法：用PCR法从基因组内扩增ROP，通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体，并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pMOP-EGFP表达质粒经Not I酶切线性化后，用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核，制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建小鼠，基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传化后，取眼球进行冰冻切片，在荧光显微镜下观察视网膜下GFP的表达。结果：从基因组内扩增出了2.1kb的小鼠ROP，成功构建了小鼠ROP－GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建，分别命名为C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU21,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论：成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠，它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制，还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。     

小鼠神经细胞p35nck5a基因 5′非编码区基因表达调控功能初步研究

目的:观察阿尔茨海默病(AD)的相关基因p35nck5a 基因5′侧翼区指导报告基因表达的能力.方法:将对本实验室所克隆的p35nck5a基因5′侧翼片段连接于报告基因β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体,利用体外培养细胞和转基因小鼠实验体系来观察该片段在体内、外基因表达调控的差异.结果:体外培养细胞中p35nck5a基因5′侧翼序列不具有决定报告基因神经特异性表达的能力,但在基因组中整合有相同表达载体的转基因小鼠体内却能够指导报告基因的神经限制性表达.结论:这种差异提示进行体内、外研究是揭示基因的组织特异性表达分子机制的必要手段.     

小鼠肝脏中细胞角蛋白19阳性细胞的肝向分化特性

目的 明确小鼠肝脏中的细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19)阳性(CK19+)细胞是否可分化为成熟肝细胞.方法 利用CK19CreERT小鼠和Rosa26-GFP小鼠杂交得到CK19CreERT/Rosa26-GFP双转基因小鼠,注射他莫昔芬(tamoxifen,TM)后检测小鼠肝脏中CK19+细胞的GFP标记情况.在此基础上分别构建3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝脏损伤模型,采用肝脏组织冰冻切片结合免疫荧光染色检测肝脏中GFP标记的CK19+细胞的分化情况.结果 获得CK 19CreERT/Rosa26-GFP双转基因小鼠,免疫荧光染色结果显示CK19+细胞可被GFP标记.在DDC肝脏损伤模型小鼠中检测到增生性小胆管内有GFP+细胞,这些GFP+细胞表达胆管上皮细胞标志物CK19,且DDC肝损伤模型小鼠中GFP+胆管细胞比例高于未损伤对照组[(63.5±6.3)％ vs (53.6±4.8)％,P＜0.05];在CCl4肝损伤模型组小鼠中检测到肝脏实质细胞中有GFP+细胞,这些GFP+细胞表达成熟肝细胞标志物白蛋白(ALB),且CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏中GFP+细胞比例高于未损伤对照组[(0.15±0.02)％vs (0.008±0.003)％,P＜0.01].结论 小鼠肝脏内的CK19+细胞群体中存在具有肝向分化潜能的前体细胞,可能为真正的肝干细胞的识别鉴定提供一个新线索.