精原干细胞的生物学特征

哺乳动物生精上皮是由高度复杂而排列有序的细胞群落组成 ,其生殖细胞在有丝分裂、减数分裂及减数分裂后细胞中经历着生成精子的变化过程。目前可利用动物模型研究精原细胞分化的停止和再启动 ,以探讨精原干细胞再生和分化的控制因素。生殖细胞凋亡是精子形成过程中不可避免的环节 ,其调节机制的研究已取得显著的进展。另外 ,精原干细胞的移植今后可能有重要的实际应用。     

肝干细胞研究进展

肝干细胞是具有自我更新能力和分化为成熟肝细胞与胆管上皮细胞的双向分化潜能的原始细胞.肝干细胞不仅参与了肝脏的稳态维持、损伤修复和肝再生,而且在肝脏疾病的细胞治疗、人工生物肝及肝导向基因治疗中有着巨大的应用潜能.本文对几种主要类型的肝干细胞及它们的来源、分子标志物等进行了综述.     

基于pSPORTl质粒的转基因小鼠家系的建立

目的：建立在基因组中整合有ｐＳＰＯＲＴ１质粒的转基因小鼠家系，为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法和结果：将２５９４个经显微注射ｐＳＰＯＲＴ１质粒ＤＮＡ的小鼠受精卵分别移入１０３只受体母鼠的输卵管中，共产下２３７只仔鼠，采用ＰＣＲ、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交三级筛选法鉴定仔鼠。最后选择８只体质健壮，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实在基因组中ｐＳＰＯＲＴ质粒结构完整的小鼠     

转基因动物及其在医学研究中的应用

转基因动物实验技术是近十多年发展起来的四维实验体系。它具有能在个体水平、从时间和空间角度同时观察基因表达功能和表型效应的独特优点，还具有“生物反应器”的功能，可应用于医学科学研究的许多方面，显示出了很好的应用前景。本文简要介绍了转基因动物的基本概念、制备技术，着重介绍了这套体系在发病机理研究，疾病动物模型建立、药物筛选、药用蛋白生产及基因治疗等医学研究中的应用。     

Ehlers—Danlos综合征——附ⅣB型一例报告

Ehlers-Danlos综合征(简称为EDS)是一种全身性结缔组织的遗传疾病。该综合征由Jobvan Meek'ren(1682)最早报告,以后Ehlers(1901)和Danlos(1908)先后作了进一步的临床描述,故由此而得名。 60年代以来,由于生物化学检查和电子显微镜技术的广泛应用,从而对本病的各种表现型的认识及其分子生物学基础等方面有了很大的进展。国内于1964年有两例报告外,至今还未见到关于本病分型的描述。其实本病的发病频率并不一定很低,而     

乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠的建立

目的：建立乙型肝炎病毒核心抗原（ayw亚型）转基因小鼠模型。方法：采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠，以PCR、免疫组化和H－E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合，肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果：得到6只基因组中整合了核心抗原基因的首建者（founder）小鼠，其中1只在肝细胞核和胞浆均有HBcAg的表达。将肝脏中表达的小鼠继续传代，F1代10只小鼠中的4只小鼠肝细胞有HBcAg的表达。结论：建立了乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠，核心抗原基因能够在小鼠肝脏中表达，并且可以遗传。     

HBV表面抗原DNA疫苗对小鼠脏器影响的实验研究

目的：用乙型肝炎病毒（ＨＢＶ,Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ）表面抗原ＤＮＡ疫苗对小鼠进行基因免疫,观察主要脏器病理形态改变,探讨该ＤＮＡ疫苗是否对肝、肾、脾等有损伤作用。方法：用乙型肝炎表面抗原（ＧＢｓＡｇ）ＤＮＡ疫苗经肌肉注射法免疫小鼠;ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清抗ＨＢｓＡｇ抗体水平。免疫１２周后取小鼠肝、肾、脾等组织,观察其病原形态改变情况。结果：ＤＮＡ疫苗接种１周后,免疫组小鼠血清中可检测到抗ＨＢｓＡｇ抗体,１２周后多只小鼠脾脏明显增大,肝、肾组织切片染色观察,可见免疫组小鼠的肝、肾组织均有不同程度的病理改变。结论：ＨＢｓＡｇ ＤＮＡ疫苗可诱导小鼠机体产生特异性抗体（可诱发全面、持久的免疫应答）持续１２周以上,同时伴有脾脏肿大和肝肾损伤提示,该ＤＮＡ疫苗表达产物与免疫小鼠脏器病变有一定的关系,对其临床     

TNF家族的新成员TRAIL cDNA的克隆及其在E.coli中的表达

目的：克隆Ｔｒａｉｌ基因ＣＤＮＡ全长,构建Ｔｒａｉｌ的原核表达载体,从而建立其原核表达体系。方法：通过抽提我周血淋巴细胞总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ克隆ＴｒａｉｌｃＤＮＡ,构建Ｔｒａｉｌ的原核表达载体,用限制性酶切和ＤＮＡ测序进行鉴定,以温度进行诱导表达,通过ＳＤＳ－ｐａｇｅ分析表达产物。结果：（１）克隆了Ｔｒａｉｌ基因ＣＤＮＡ全长,ＤＮＡ测序结果与报道的完全一致;（２）构建了Ｔｒａｉｌ基因核表达载体     

Diethylnitrosamine诱导的小鼠肝细胞癌中存在SP细胞

荧光染料Hoezhst33342可以与DNA结合，—直以来在细胞周期研究中得到广泛应用。1996年，GoDdeu等首次用Hoeehst33342染色的方法，从全骨髓细胞中分离出一小部分不着色的细胞，这类细胞具有很强的排除染料的功能。移植到经致死剂量处理的小鼠体内能够重建造血系统。这引起了人们的广泛兴趣。后来Kim M等通过进一步的深入研究将这种可以排出Hoezhst3334的能力称为SP（side population）表型，将具有这种表型的细胞称为SP细胞。根据SP细胞在不同种类干细胞中广泛存在并具有表型上的保守性，人们开始推测“SP表型”有可能作为潜在的新的干细胞标志，并决定着其功能方面的特性。     

人胆囊类器官培养体系的建立与鉴定

目的 构建人胆囊上皮细胞类器官的培养体系,实现人胆囊类器官体外稳定快速扩增,并鉴定其具有的特性。 方法 分离人来源胆囊组织上皮细胞,运用三维培养体系,将细胞嵌入基质胶中进行3D培养。观察胆囊类器官生长过程中球囊样结构的面积、周长与形态。利用免疫细胞荧光染色技术检测胆囊类器官的干性指标和胆管上皮细胞标志物表达情况。使用BrdU摄入实验,检测小分子CHIR-99021和Blebbistatin对类器官的增殖特性的影响。 结果 胆囊类器官在体外培养过程中,类器官形成的球囊面积逐渐增大,第1天为（1.15±0.12）×10^4μm2,第7天为（18.97±1.64）×10^4μm2,（P<0.01）,第7天时其形状因子增高至（0.83±0.003）,表明类器官在体外稳定生长（P<0.01）,且形状逐渐趋于一个完美的圆。免疫荧光染色可见类器官表达胆管上皮细胞标志物。在培养基中加入小分子CHIR-99021和Blebbistatin后,BrdU检测其增殖特性明显增高（P<0.01）。 结论 在体外能够成功培养获得了具有增殖能力的人胆囊类器官,其具有胆管上皮细胞的特性,可用于胆管疾病的研究与建模。