乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌发生中的作用

乙型肝炎病毒是引起包括肝细胞癌在内的慢性肝脏疾病的重要致病因素,但HCC的发病机制仍不清楚.最近研究发现,乙型肝炎病毒x基因(HBx)是HBV复制和扩散所必需的基因,在乙肝慢性化和肝细胞癌的发生中具有重要作用.HBx基因是HBVDNA中最小的一个基因,全长465 bp,表达产物为17 kDa的X蛋白.X蛋白具有多种功能:可对多种病毒和细胞的启动子、增强子成分发挥反式激活作用;可与P53蛋白结合;可参与多条信号转导通路;具有抑制DNA切除修复的作用;参与细胞周期调控和细胞凋亡;具有蛋白激酶和蛋白酶抑制剂功能;可与胰岛素样生长因子Ⅱ相互作用.在乙肝慢性化和HCC的发生中,X蛋白参与了多条途径,本文将就X蛋白在肝细胞癌发生中的几种可能作用机制作一综述.     

二乙基亚硝胺诱导转化的肝癌肝组织小鼠中SP细胞的观察

目的：研究小鼠肝癌组织中的SP细胞，从而推测肝癌干细胞（CSC）存在的可能性。方法：首先用致癌剂二乙基亚硝胺（DEN）诱导B6C3F1雄性小鼠发生肝癌，在无菌条件下，将肝癌组织消化成单细胞悬液，然后用荧光染料Hoechst 33342对细胞悬液进行染色分析。结果：在原代分离的小鼠肝癌细胞群中观察到SP细胞的存在。结论：实验结果推测，在药物诱导转化的小鼠肝癌组织中很可能存在CSC。     

胰岛素启动子在肝干细胞分化研究中的应用

目的：利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法：通过PCR从大鼠鼠尾基因组中克隆胰岛素启动子片段,构建大鼠胰岛素Ⅰ启动子调控的红色荧光蛋白报告载体（pRIP Ds Red）,并利用报告载体标记的肝原始细胞系（liver epithelialprogenitor cells,LEPCs）及经逆转录病毒感染后表达MafA的肝原始细胞系（LEPCs-MafA）,观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果：获得胰岛素启动子调控的报告载体、报告载体标记的LEPCs及LEPCs-MafA。结论：pRIP DsRed报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。     

Fah基因剔除小鼠在肝细胞移植中的应用及其病理学变化

目的： 观察外源成体肝细胞在Fah^-/-小鼠肝脏中增殖的微观特性并对该小鼠模型肝脏损伤后的病理学变化进行研究。方法： 野生型小鼠成体肝细胞经脾脏移植到Fah^-/-小鼠后,观察移植Fah^-/-小鼠的体重变化,生存状态及肝组织的Fah免疫组化和电镜观察以评价再殖效率和病理学变化。结果： Fah^-/-小鼠的肝HE染色显示为亚急性损伤的病理特点。电镜观察显示,初期肝细胞坏死,凋亡现象随时间增多,随后有凋亡和坏死并存。而Fah^-/-小鼠在NTBC［2-（2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基）-环己烷-1,3-二酮］药物的治疗后,无明显病理学变化。肝细胞移植后的Fah^-/-小鼠均健康存活,体重稳步上升。8周时可以达到90%以上再殖。肝脏生化指标恢复正常。结论： Fah^-/-小鼠的肝脏损伤可以使移植的肝细胞90%以上的再殖,维持肝脏正常的组织结构,并发挥正常的肝细胞功能。Fah^-/-小鼠作为肝脏再殖模型可用于干细胞肝向分化研究。     

医学细胞生物学实验教学模块教学设计探讨

医学细胞生物学实验课教学的重要地位日益凸显,而实验课教学中课程内容设置的问题不容忽视。常规课程内容多以验证性实验为主,缺乏综合能力和创新能力的培养,也不利于发挥学生的积极性和主观能动性。在教学实践中,以＂模块＂为单位组织教学内容,各模块之间具有相对的独立性,在同一模块中可以进行内容、设备和师资的更新和补充,可针对不同的教学对象和教学层次的需要而选择相应的教学模块进行组合,从而更加强调系统集成的特点,使教学内容更具先进性、针对性、灵活性和可选择性,解决了教学内容陈旧过时和学时分配不合理的问题。     

HBV转基因在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU3小鼠基因组中的整合分析

目的:分析HBV转基因在乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系基因组中的整合特征.方法:以F6～F17代乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、Southern印迹和DNA测序的方法,分析HBV转基因在该品系转基因小鼠基因组中的整合特征.结果:PCR分析显示,F6～F17代乙肝转基因小鼠基因组中均已稳定整合了相同拷贝数的HBV转基因,整合的HBV DNA可通过生殖系在世代间稳定遗传.整合在转基因小鼠基因组中的HBV DNA含有HBVpres、s、c、x基因,Southern印迹证实HBV转基因含有全长HBV基因组DNA,DNA测序结果表明,该品系转基因小鼠所整合的转基因为adr亚型的HBV DNA.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系转基因小鼠基因组中均整合有adr亚型的全长HBV基因组DNA,从DNA水平证实该转基因小鼠品系已具备了乙肝实验动物模型的基本条件.     

HBV preS2-S DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答

目的:构建HBV表面抗原preS2-S基因表达质粒,并探讨其在小鼠体内的表达及诱导体液免疫应答的能力.方法:采用PCR方法,以PBR322-HBV2.0(adr亚型)质粒DNA为模板获得HBV preS2-S基因,并将其重组进入pcDNA3.0表达载体中,转染7721细胞系进行稳定表达;以此重组质粒免疫小鼠,ELISA方法检测免疫小鼠抗HBs抗体浓度.结果:构建了HBV preS2-S基因的表达质粒pcDNAS2-S,该表达质粒可在7721细胞中稳定高效表达;免疫接种小鼠2周后抗HBs抗体浓度明显升高,接种后第4周布比卡因处理组小鼠抗HBs抗体的浓度达到峰值161.4 mIU/ml,布比卡因非处理组第5周抗HBs抗体的浓度可达133.7 mIU/ml.结论:所构建的pcDNAS2-S表达质粒能有效表达并诱导小鼠体液免疫应答.     

第二讲分子生物学基本技术

第二讲分子生物学基本技术胡以平在当今医学科学中，涉及“基因”的内容日益增多。作为一名医学科学工作者，了解一些有关的基本实验技术很有必要，它有助于对某些新概念和观点的认识和接受，以及科研的设计和开展。本文介绍几种常用的、与基因结构分析有关的分子生物学技...     

人骨髓间充质干细胞在新生小鼠脑中的植入和分化

背景与目的:探讨人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)在体内向神经细胞分化的可能性.材料与方法:将标记绿色荧光蛋白的人骨髓间充质干细胞植入到新生3 d的小鼠侧脑室中,分别于移植后0 d,9 d和14 d处死受体鼠,取其脑组织,4%多聚甲醛固定后行冠状面冰冻切片,荧光显微镜下观察hMSCs的植入,激光共聚焦显微镜检测植入细胞神经特异性蛋白的表达,定位双重标记的植入细胞.结果:受体小鼠脑中均可检出植入的细胞,此类细胞表达神经元细胞特异的微管相关蛋白β-Ⅲ-Tubulin(Tuj1)、微管相关蛋白2(MAP2),一些细胞表达神经胶质细胞特异的胶质原纤维酸性蛋白(GFAP).结论:hMSCs植入后受到脑组织特定微环境的影响,在体内可以向神经细胞分化并参与到发育的神经系统中.     

pdx-1基因克隆及其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

背景与目的克隆小鼠胰十二指肠同源框-12(PEGFP-C1pdx-1)基因,并构建pdx-1的表达载体。材料与方法通过RT-PCR方法从小鼠胰腺总RNA中克隆pdx-1基因,并将该基因构建到pEGFP-C1和pcDNA3.0中获得pdx-1的表达载体。通过观察荧光和RT-PCR方法检测表达载体转染SMMC-7721后pdx-1基因在细胞中的表达。结果克隆了883bp的pdx-1全长cDNA,成功构建了pEGFP-C1pdx-1和pcDNA3pdx-1两种表达载体。pEGFP-C1pdx-1转染SMMC-7721后,可观察到绿色荧光仅局限于细胞核中;通过RT-PCR方法在转染后的细胞中都检测到了pdx-1基因的转录。结论pdx-1表达载体的构建为进一步研究pdx-1基因在胰腺发育和肝干细胞增殖与分化方面的作用奠定了基础。