乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育

目的：建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因（adr亚型）转基因小鼠模型，以研究x基因的功能。方法：采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因（adr亚型）开放阅读框（ORF）的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后，琼脂糖电泳回收目的的片段，用原核显微注射法将其注射入雄原核，制备转基因小鼠。复合PCR法在基因组水平筛选HBx基因转基因小鼠founder；免疫组织化学法在蛋白水平检测X蛋白在这些小鼠中的表达情况。结果：成功构建了HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后，出生并存活了11只新生鼠，经PCR检测后获得5只founder转基因小鼠，命名为C57－TgN(HBx)SMMU。免疫组织化学检测发现5只PCR阳性小鼠的肝细胞质中均有X蛋白的表达。将这5只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配，进行传代培育，复合PCR法筛选阳性转基因小鼠，目前已传至F4代。结论：本研究成功地产生了稳定遗传HBx基因并表达X蛋白的转基因小鼠C57－TgN（HBx)SMMU，它将有利于体内研究HBx基因在肝细胞癌发生中的作用。     

Ⅱ型多囊肾致病基因PKD2突变的研究进展

常染色体显性遗传型多囊肾病（ADPKD）是一种十分常见的遗传病，发病率为1‰，我国目前约有150万患者。其临床表现为多发性肾脏囊肿、持续性高血压和泌尿系感染等症状，由于缺乏有效治疗手段，多数患者发展为终末期肾衰而不得不进行肾脏替代治疗或肾移植手术。目前已知ADPKD的主要致病基因有Ⅰ型和Ⅱ型多囊肾致病基因（PKD1和PKD2），分别占ADPKD患者的85％和15％。     

课程教学体系构建与学生自主学习能力培养

学生的自主学习能力是指较少依赖别人的帮助而自己可以进行有效的学习的能力。自主学习能力的培养是一项系统工程，基础教育课程改革所力图实现的“知识与技能、过程与方法以及情感态度价值观”三位一体的课程功能，必须从一门课程的教学体系开始逐步建立和完善。本文通过介绍美国哈佛大学医学院所开设的“分子细胞生物学”课程，讨论了一门课程的教学体系对培养学生自主学习能力的重要性和必要性，同时提出教师首先应该成为一个善于自主学习的人，才能培养出具有自主学习能力的创新型人才。     

含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析

克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体（ＧＲ）基因片段,为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模型奠定基础。和ＰＣＲ扩增小鼠ＧＲ基因第二外显子上５６２ｂｐ的核酸片段作为探针,筛选小鼠基因组文库,共获得６个阳性克隆。对Ｃ１０克隆进行详细的测序和酶切图谱和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析事一６．５ｋｂ的基因片段。该片段含完整的ＧＲ基因第二外显子,基或分别有３．９ｋｂ和１．４ｋｂ的ＤＮＡ片段可作为下一步构     

胚胎干细胞途径获得基因工程小鼠的原理与方法

胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell简称ES细胞)是从早期胚胎的内细胞团(Inner Cell Mass,MIS)分离出来的多潜能细胞系。它具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能。在饲养层上或含有白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)或分化抑因子(Differentiation inhibitory activity DIA)的培养基中培养时保持未分化状态,但在适当条件下被诱导分化。在这种细胞注入受体胚胎时,能参与各种组织器官发育,形成嵌合体。正是由于这些特征,ES细胞在培养的细胞与个体发育之间架起了桥梁,在体细胞与生殖细胞之间架起了桥梁,随着基因工程的发展,现在人工构建基因不成问题,可以用同源重组的方法加一定的选择系统对ES细胞进行基因打靶,把外源基因定点掺入或内源基因定点敲除。     

细胞工程实验教学改革的实践与探讨?

综合性实验教学是细胞工程实验教学改革的重要组成部分。为了提高教学质量,培养学生学习兴趣,以小班化教学为组成形式,开展细胞工程课程综合性实验教学模式改革,在实验教学内容整合、教学与科研相结合的讨论式教学模式及考核形式等方面进行实验教学改革。经过改革实践后,生物技术专业学生的细胞工程课程学习兴趣及综合素质得到明显提升。     

生物技术专业细胞工程实验教学的设计与体会

为了能使学生的专业技术能力得到强化训练、开拓学生视野、提高学生创新能力,按照新修订的<生物技术四年制本科人才培养方案>,结合学员的实际情况,设计并形成了一套开放性自主综合性实验教学体系,介绍了该实验体系的教学目标、教学内容和教学体会.     

一种新型肿瘤干细胞标记物CD133

CD133蛋白是在人类造血干/祖细胞上发现的一种跨膜糖蛋白,最初被认定为造血干细胞的特异性标志,但后来发现CD133蛋白在神经干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞等多种干/祖细胞中都有表达.近年的研究发现,CD133在白血病干细胞以及脑肿瘤干细胞、大肠癌干细胞、前列腺癌干细胞、肝癌干细胞等多种实体肿瘤干细胞中均有表达,提示CD133可能是肿瘤干细胞的一种广谱标志物,在肿瘤干细胞的分选和鉴定中具有一定的参考价值.     

Hes1基因诱导小鼠肝原始细胞分化为胆管上皮细胞

背景与目的： 采用体外获得性表达外源发状分裂相关增强子-1(hairy and enhancer of split 1,Hes1)基因的方法,探讨Hes1在肝干细胞分化以及胆管上皮细胞发育中的作用。 材料与方法： 通过PCR方法从小鼠基因组中克隆Hes1基因片段,构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1- Hes1,将2种表达载体分别转染肝原始细胞系(LEPCs) ,应用RT-PCR和Real-time PCR技术检测胆管细胞分子标志物CK19、GGT,胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β,肝细胞分子标志物GS、BGP和肝卵圆细胞的分子标志物Thy-1的表达,并在荧光显微镜下观察EGFP标记的LEPCs细胞系荧光强度的变化。结果：成功构建表达载体pEGFP-C1- Hes1和pcDNA3.1-Hes1。RT-PCR和Real-time PCR检测均表明胆管细胞分子标志CK19、GGT表达量上调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达上调;肝细胞分子标志GS、BGP表达量下调;卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;LEPCs细胞系绿色荧光增强。 结论： 初步证明小鼠肝原始细胞经Hes1的表达诱导后可向胆管上皮细胞方向分化,推测Hes1为胆管上皮细胞分化的转录调控因子。