红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤保护作用的机制。方法：32只昆明种雄性小鼠按体质量随机分为正常对照组、红景天苷组、运动组及红景天苷＋运动组。红景天苷组及红景天苷牟运动组小鼠予红景天苷180mg／（kg·d）灌胃给药,正常对照组及运动组予相同体积[0．02mL／（g·d）]蒸馏水灌胃,连续灌胃15d。末次给药后30min,运动组及红景天苷＋运动组小鼠无负重游泳120min。游泳后立即取材,全自动生化仪检测血浆乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）及肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase—myocardial band isoenzyme,CK—MB）活性;采用试剂盒检测肝组织匀浆中过氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH—Px）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;电子显微镜观察心肌和骨骼肌超微结构变化。结果：与不运动比较,长时间运动可明显提高小鼠血浆LDH、CK、CK—MB活性（P〈0．01,P〈0．05）,而红景天苷可降低小鼠血浆CK及CK—MB活性（P〈0．05,P〈0．01）;红景天苷与长时间运动有交互作用,红景天苷可拮抗长时间运动导致的血浆LDH、CK及CK—MB活性升高（P〈0．05）。与不运动比较,长时间运动可显著降低小鼠血浆SOD及GSH—Px活性（P〈0．01）,升高小鼠血浆MDA含量（P〈0．01）;红景天苷可明显升高小鼠血浆SOD及GSH—Px活性（P〈0．01,P〈0．05）,显著降低小鼠血浆MDA含量（P〈0．01）;红景天苷可拮抗长时间运动导致的小鼠血浆SOD活性降低（P〈0．05）。电子显微镜结果表明长时间耐力运动后骨骼肌和心肌出现明显的损伤,运动组小鼠骨骼肌及心肌超微结构损伤较红景天苷＋运动组明显。结论：红景天苷对运动所导致的氧化损伤具有一定的保护作用。     

表达ROG的重组腺相关病毒载体的构建及高滴度病毒的制备

目的:观察三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)患者痛支神经的有髓纤维脱髓鞘处是否有河豚毒素不敏感型(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)hNav1.8通道蛋白的异常表达,探讨其与三叉神经痛的关系.方法:以6例原发性TN第三支痛经保守治疗无效行手术治疗患者的下牙槽神经为研究对象,以舌颌颈联合根治术患者的耳大神经、下牙槽神经为阴性和正常对照,以鼠脊神经为阳性对照,运用免疫组化的方法观察hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支神经与对照神经标本超微结构中的表达.结果:hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支神经的有髓纤维脱髓鞘处有大量表达,鼠脊神经轴突内有少量表达,而正常下牙槽神经及耳大神经中无表达.结论:hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支有髓纤维脱髓鞘处的异常表达可能与TN的发病有关.     

phP53-luc质粒的构建及其用于检测化学物质遗传毒性的初步分析

目的:构建2个分别由p53基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性.方法:通过PCR扩增人p53基因启动子片段,然后采用重组DNA技术克隆入pGL3-BASIC的荧光素酶报告基因的上游而获得phP53-luc表达质粒.用脂质体转染法将phP53-luc转染入NIH 3T3细胞并分别用5-氟尿嘧啶(5-FU)处理,最后裂解细胞用Dual-Luciferase Reporter Assay System检测荧光素酶报告基因表达.结果:构建了2个分别由p53基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒,位于这2个质粒上的荧光素酶报告基因在NIH 3T3细胞内的表达显著地受遗传毒性化学物质的诱导,其表达比对照的pGL3-BASIC载体上的荧光素酶报告基因高近240倍.结论:基于人p53基因启动子的荧光素酶报告基因分析系统可以用于快速检测环境毒物的遗传毒性.     

小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建

目的:设计小鼠Retn基因特异性的siRNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些siRNAs的表达质粒,以便为在体外研究Retn基因的功能打下基础.方法:(1)设计并合成小鼠Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilencerEM1.0-Neo载体;(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能稳定表达相应siRNAs的一组3T3-L1细胞克隆;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用RT-PCR分析这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平.结果:设计并构建了4个小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达质粒,并证明其中的2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的siRNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平.结论:本研究设计并构建出的小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达载体,所表达的siRNAs具有较强的RNA干涉功能,为Retn基因的功能研究奠定了实验基础.     

基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立

基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立黎怀星，李建秀，杨桦，胡以平，王肖鹏，傅继粱（上海第二军医大学生物教研室２００４３３华西医科大学分子生物学研究室成都６１００４１）本研究拟建立一个以ＬａｃＩ作为诱变靶基因，ｐＳＰＯＲＴＩ（４．１ｋｂ）作为载体...     

基于pSPORTl质粒的转基因小鼠家系的建立

目的：建立在基因组中整合有ｐＳＰＯＲＴ１质粒的转基因小鼠家系，为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法和结果：将２５９４个经显微注射ｐＳＰＯＲＴ１质粒ＤＮＡ的小鼠受精卵分别移入１０３只受体母鼠的输卵管中，共产下２３７只仔鼠，采用ＰＣＲ、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交三级筛选法鉴定仔鼠。最后选择８只体质健壮，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实在基因组中ｐＳＰＯＲＴ质粒结构完整的小鼠     

含稳定整合pMCLacI／Neo质粒的NIH3T3细胞体外突变研究？…

目的 建立一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的突变机理的实验模型。方法 以脂质体转染法将线性化的ｐＭＣＬａｃＩ／Ｎｅｏ质粒导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,用Ｇ４１８筛选,造反一个药物抗性细胞克隆进行扩增,用基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交进行了分子鉴定。结果 （１）在此细胞克隆的基因组中整合有ｐＭＣＬａｃＩ／Ｎｅｏ质粒;（２）该质粒上的两个ｌａｃＩ靶     

建立高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系的研究

目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系.方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn.(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系.(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用实时荧光RT-PCR法分析这些脂肪细胞内Retn基因mRNA的水平.结果:构建了一个能在真核细胞内表达小鼠Retn基因的表达载体;建立了一个携带有pcDNA3-mRetn载体并组成性地高表达小鼠Retn基因的细胞系.结论:成功地建立了一个组成性地高表达小鼠Retn基因细胞系,为进一步研究Retn基因的功能和小鼠Resistin蛋白的获得奠定了基础.