临床基因检测报告规范与基因检测行业共识探讨CSCD

二代测序技术（next generation sequencing,NGS）在临床的应用为广泛开展遗传病的基因检测、病因诊断、治疗及预防奠定了基础,但同时也伴随着一系列的问题,其中很重要的一个环节就是基因检测报告缺乏统一或基本的标准。首届“临床基因检测标准与规范专题研讨会”于2017年10月28日在深圳召开,来自全国138家机构的250多位遗传学专家、临床专家及第三方检测机构的代表共同探讨了遗传病基因检测报告的标准和规范问题。本文根据此次研讨会专家的意见和建议,就遗传病基因检测报告的原则、规范以及基因检测行业的发展进行了讨论,并发布了临床基因检测报告规范共识,以促进检测报告的规范化和标准化,推进我国基因检测行业的健康有序地发展。     

丹酚酸 A 通过调节 Wnt/糖原合酶激酶3β/β－连环蛋白通路保护缺血性脑损伤大鼠

目的：探讨丹酚酸 A（salvianolic acid A, SAA）对缺血性脑损伤大鼠的保护作用及其可能机制。方法54只成年雄性 Sprague－Daw ley 大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和 SAA 组,每组18只。采用线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞模型。 SAA 组在模型制作后0 h和6 h腹腔注射 SAA （3 mg/kg）,其余各组注射等体积生理盐水。模型制作后24 h进行神经功能缺损评分,应用2,3,5－氯化二苯四氮唑染色检测脑梗死体积。采用 TUNEL 染色法检测细胞凋亡,免疫组化染色及蛋白质印迹法检测缺血皮质 Wnt3a、β－连环蛋白和磷酸化糖原合酶激酶3β（phospho－glycogen synthase kinase 3β, p－GSK－3β）表达。结果神经功能缺损评分显示,假手术组未见神经功能缺损（评分为0分）,SAA 组神经功能缺损评分（中位数和四分位数间距）较脑缺血组显著降低[（3（2~3）分对4（3~5）分;Z =－2.679,P =0.007]。假手术组无梗死灶, SAA 组梗死体积较脑缺血组显著缩小[（79.038±10.665）mm3对（212.702±8.029）mm3;t =24.525,P <0.001]。假手术组仅见极少数阳性细胞,SAA组和脑缺血组 TUNEL 阳性细胞数量分别为（29.667±1.366）个/HP和（63.333±0.894）个/HP,前者显著少于后者（t =14.115,P <0.001）。免疫组化染色显示,假手术组、脑缺血组和 SAA 组 Wnt3a 阳性细胞数量分别为（35.500±2.572）个/HP、（18.056±3.765）个/HP和（29.000±2.376）个/HP,3组间存在显著性差异（F =115.972,P <0.001）,而且 SAA 组显著多于脑缺血组（P <0.01）;假手术组、脑缺血组和 SAA 组 p－GSK－3β阳性细胞数量分别为（7.944±2.127）个/HP、（37.444±3.434）个/HP和（11.222±1.734）个/HP,3组间存在显著性差异（F =730.580,P <0.001）,而且 SAA 组显著少于脑缺血组（ P <0.01）;假手术组、脑缺血组和 SAA 组β－连环蛋白阳性细胞数量分别为（26.722±26.722）个/HP、（16.556±1.854）个/HP 和（21.333±1.940）个/HP,3组间亦存在显著性差异（ F =33.385,P <0.01）,而且 SAA 组显著多于脑缺血组（P <0.01）。蛋白质印迹分析显示,假手术组、脑缺血组和 SAA 组 Wnt3a 表达水平分别为1.000±0.190、0.800±0.185和1.198±0.262,3组间存在显著性差异（F =9.621,P <0.001）,而且 SAA 组显著高于脑缺血组（P <0.01）;假手术组、脑缺血组和SAA 组 p－GSK－3β表达水平分别为0.650±0.150、1.290±0.250和1.190±0.250,3组间亦存在显著性差异（F =19.668,P <0.001）,而且 SAA 组显著高于脑缺血组（P <0.01）;假手术组、脑缺血组和SAA 组β－连环蛋白表达水平分别为1.200±0.210、0.500±0.120和1.100±0.220,3组间存在显著性差异（F =33.385,P <0.001）（P <0.01）,而且 SAA 组显著高于脑缺血组（P <0.01）。结论 SAA 对缺血脑损伤大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与上调 Wnt3a 和β－连环蛋白表达以及下调 p－GSK－3β表达有关。     

MicroRNA-155对糖尿病大鼠脑缺血损伤血管再生的调控

目的:观察microRNA-155(miRNA-155)表达对糖尿病大鼠脑缺血损伤及CD31、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨miRNA-155对糖尿病加重脑缺血血管再生的调控作用。方法:SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,继而应用栓线法建立永久性局灶性脑缺血模型。随机分为5组:(1)假手术组(sham组);(2)脑缺血组(CI组);(3)糖尿病脑缺血组(DCI组);(4)糖尿病脑缺血+miRNA-155抑制物组(inhibitor组);(5)糖尿病脑缺血+阴性对照组(scramble组)。于缺血后24 h采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miRNA-155的表达水平;参照Zea-Longa 5分制行神经功能缺损评分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测梗死体积;Western blotting检测血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1/CD31)、VEGF的表达水平。结果:糖尿病脑缺血+miRNA-155抑制物组大鼠脑缺血侧皮质区的miRNA-155表达水平显著低于糖尿病脑缺血组(P0.05)。miRNA-155表达下调可显著减少糖尿病脑缺血大鼠的神经功能缺损评分及脑梗死体积,但显著增加CD31表达水平与VEGF表达水平(均P0.05)。结论:miRNA-155对糖尿病加重脑缺血损伤血管再生有重要的调控作用,miRNA-155表达下调可显著减轻糖尿病大鼠脑缺血损伤。