基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用

目的：通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒（CMV）启动子,加入谷氨酰胺合成酶（ GS）基因筛选标志,再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切,插入人巨细胞病毒（hCMV）启动子,构建载体pHGS1．0。将目的基因分别插入载体pHGS1．0和pIRES2-EGFP中,通过比较重组蛋白TEM8（1-227）-VEGFR1domain2-IgG2（TV-IgG2）表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志,并加入hCMV启动子,人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现,重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选,得到高效表达目的蛋白载体系统,为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。     

Alzheimer氏病及其分子基础

Alzheimer氏病(以下缩称AD)是人类淀粉样蛋白变性病(Amyloidosis)的最主要形式,是一种渐进性脑退变的疾患。主要特征是患者的智力、记忆力、感觉、定向能力、推理和判断力产生不可逆退化。目前,美国和英国中5％65岁以上的人和20％80岁以上的人患有这种疾病,迄今还没有有效的诊断和治疗方法,是老年人中引起死亡的重要原因之一。其形态学特征是出现老年斑,神经元纤维性     

东莞市重点职业病监测企业粉尘岗位游离二氧化硅含量调查

  目的  了解东莞市不同行业工作场所涉尘岗位游离二氧化硅质量分数情况。
  方法  对东莞市重点职业病监测企业涉尘岗位的沉降尘进行采样,用焦磷酸质量法测定游离SiO₂质量分数。
  结果  2015—2019年东莞市共监测170家涉尘企业,采集了299个监测岗位的沉降尘。游离SiO₂质量分数最大值为91.5%,最小值为0.00,中位数（P₂₅,P₇₅）为5.00%（2.00%,16.00%）,其中质量分数≥ 10%（矽尘）的中位数（P₂₅,P₇₅）为24.65%（16.50%,40.75%）,检出率为32.1%; < 10%中位数（P₂₅,P₇₅）为3.00%（1.50%,5.30%）,检出率为67.9%。不同行业工作场所游离SiO₂质量分数及矽尘检出率差异均有统计学意义（P < 0.05）,表现为石材行业最高。
  结论  职业卫生监管部门应针对不同行业和不同涉尘岗位进行侧重监管与预防指导。
     

重组人肝细胞生成素的理化性质研究

目的 :研究重组人肝细胞生成素 (hepatopoietin ,HPO)的理化性质。方法 :在大肠杆菌中表达的人HPO ,经凝胶过滤和离子交换柱层析进行纯化 ;通过还原型SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、非还原型SDS PAGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MAIDI TOF MS)等方法分别测定了人HPO的相对分子质量 ;采用等电聚焦电泳测定了人HPO的等电点 ;采用内源荧光光谱和圆二色光谱法研究了人HPO的稳定性。结果与结论 :复性后的重组人HPO主要以双体形式存在 ,其相对分子质量为 30 0 0 0 ,等电点在 5.2～ 6 .0之间。在 70℃以下、pH 2 .6以上 ,人HPO分子内部构象基本不变     

反义寡核苷酸的药代动力学研究进展

反义药物在经历了20年后,又迎来了一个蓬勃的发展阶段。研究结果表明,反义药物在抗肿瘤、抗炎和抗病毒等方面展现出令人鼓舞的前景,反义寡核苷酸可能成为新药开发新的生长点。本文调查了近年反义寡核苷酸药代动力学的研究进展,对反义寡核苷酸的吸收、分布、代谢和排泄进行了详细的综述。     

利用siRNA抑制HER-2表达的研究

目的利用siRNA抑制人乳腺癌MCF-7细胞中HER-2基因的表达。方法针对HER-2mR-NA设计了5条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染MCF-7乳腺癌细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR分析siRNA对细胞中HER-2mRNA的降解作用;利用流式细胞术分析细胞表面HER-2蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,用免疫组化法检测瘤组织中HER-2的表达。结果siRNA3P能明显降低MCF-7细胞中HER-2mRNA的丰度;流式细胞分析表明,其中siRNA2P和3P稳定转染的MCF-7细胞表面HER-2的表达明显降低;五种表达不同siRNA的MCF-7细胞在裸鼠体内的成瘤性均有所降低,并且瘤组织中HER-2蛋白的表达也明显减少。结论靶向HER-2mRNA的siRNA能在体内外有效抑制HER-2的表达,可用于乳腺癌的基因治疗。     

重组人粒细胞集落刺激因子治疗急性放射病的实验研究

为了评价重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)用于治疗骨髓型急性放射病的可能性,我们以~(60)Coγ线6.5Gy及8.0Gy照射小鼠为模型,研究了rhG-CSF的不同给药剂量、给药早晚及治疗持续时间对照射小鼠外周血细胞和活存率的影响。结果表明,6.5Gy照射小鼠给予不同剂量rhG-CSF(1.25—5.0μg/d)治疗后,外周血白细胞、红细胞及血小板的恢复明显加快,其中以5.0μg剂量组效果最佳;在剂量相同的情况下(5.0μg/d)本所制备的rhG-CSF与美国AMGEN公司出售的优保津(rhG-CSF,Filgrastin)效价相当。在同样条件下,rhG-CSF(5μg/d×7d)照后3天和7天开始给药,白细胞及血小板的恢复早于对照组,迟于照后当天给药组,但红细胞水平却比对照组低。8.0Gy照射小鼠于照后当天开始给药(rhG-CSF5.0μg/d),治疗3、7及12天的小鼠30天活存率均高于对照组,其中以治疗7天组效果最佳(P<0.05)。以上结果表明,对于小鼠骨髓型急性放射病,rhG-CSF照后当天给药,剂量5.0μg/d,连续治疗7天为最佳方案。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

合成生物学技术在地雷检测中的应用

近年来,随着合成生物学技术的发展,许多基于合成生物学的生物传感器检测方法应运而生。其中基于合成生物学的地雷检测技术能够提供较高的检测特异性,并且使用安全,价格低廉。本文主要介绍一些利用合成生物学技术的方法,通过检测地雷泄漏物24,,6-三硝基甲苯（TNT）来实现地雷的生物检测。     

高斯多烟团数学模型在职业危害评估中的应用

目的研究应用数学模型计算常见高毒化学品向厂区扩散理论值,并与实际检测值比较,进行职业病危害特征评估。方法以化工槽罐车装车台灌装过程模拟泄漏源,应用高斯变天条件下多烟团数学模型,预测对不利气象条件下泄漏过程中常见苯、甲苯二异氰酸酯（TDI）等高毒化学品向厂区不同距离处扩散理论值,并与实际检测对比,统计分析两者数值离散情况。结果大气F级稳定度情况,在静小风状态下100—1000m范围内,苯的模拟评估浓度和实测浓度范围分别为6069．1—50．8mg／m2、500．6～1．1mg／m2,TDI的模拟评估浓度和实测浓度范围分别为1203．3—9．8mg／m2、48．00—0．05mg／m。;在小风状态下100—1000m范围内,苯的模拟评估浓度和实测浓度范围分别为25．0—0．3mg／m2、23．5～0．2mg／m2,TDI的模拟评估浓度和实测浓度范围分别为5．90—0．04mg／m2、6．80—0．06mg／m2;且均随泄露源距离增加呈依次递减关系。结论在静小风状态下模拟评估扩散浓度和实测浓度数值离散度较大;在小风状态下模拟评估浓度和实测浓度吻合情况较好,该气象条件下模型适用性较好。