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大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用毕赤酵母表达系统,表达大鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,同时探讨最优表达条件,为规模化发酵生产羧肽酶B奠定基础。方法:以RTPCR法从SD大鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,转入毕赤酵母Gs115细胞,在甲醇的诱导下表达目的蛋白。结果与结论:首次实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达;通过表达条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%(体积比体积)的酪蛋白水解物和3mmol/L的PMSF,于28℃,每隔12h补加0.5%(体积比体积)的甲醇,重组酵母Gs115proCPB表达的重组蛋白可达500mg/L,表达的目的蛋白占总蛋白的94%,活化后的重组CPB相对分子质量为35.1×103,与理论值(35.2×103)极相近。活性测定表明,重组proCPB活化后的CPB的比活力可达110U/mg(CPB参照品为180U/mg)。 相似文献
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神经元特异性烯醇化酶,简称NSE,是肺小细胞癌(SCLC)和儿童神经母细胞瘤高特异性的血清学标志物。NSE可用来鉴别SCLC和非小细胞癌(NSCLC),评价治疗反应,预报复发。做为一个十分有用的肿瘤标志,NSE已被用于临床病例分析。我们自人脑分离纯化出高纯度NSE抗原,免疫BA- 相似文献
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小鼠胎肝基质细胞高活性造血刺激因子的纯化及性能研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对我室克隆的小鼠胎肝基质细胞林(MFLSC株)的无血清培养上清中的造血活性物质进行了初步纯化。通过离子交换层析和凝胶过滤层析两步分离,从中得到一高活性的造血刺激因子,称为基质细胞造血刺激因子-1(SHF-1)。经凝胶过滤及电泳结果估测,此因子是分子量约为70kD的单体蛋白,耐碱,较耐热。在体外它对小鼠骨髓粒系、红系祖细胞、多向祖细胞及多能造血干细胞均有刺激作用。 相似文献
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目的:研究二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞生长的影响,初步探讨二甲双胍抑制Dami细胞增殖的分子机制。方法:将培养的Dami细胞分为空白对照组,1、2、4、8、16和32 mmol?L-1二甲双胍处理组;MTT法检测不同浓度二甲双胍作用后Dami细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹分析Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达以及Cdc2蛋白的磷酸化修饰。结果:MTT检测,与空白对照组比较,32 mmol/L二甲双胍处理组0、24、48、72和96 h Dami细胞增殖抑制率明显升高[(35.1±2.3)%、(49.7±5.1)%、(78.8±0.9)%、(79.1±3.0)%和(85.2±3.2)%](P<0.01);在二甲双胍处理72 h后,1、2、4、8、16和32 mmol/L处理组Dami细胞增殖抑制率分别为(33.8±1.3)%、(51.9±2.2)%、(59.4±1.6)%、(65.5±2.0)%、(75.5±0.9%)和(79.1±3.0)%,二甲双胍对Dami细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测,与空白对照组比较,1、2和4 mmol/L二甲双胍处理组G2/M期细胞比例从(26.0±0.5)%升高至(38.5±1.5)%、(48.4±1.1)%和(58.2±2.7)%,4 mmol?L-1二甲双胍处理组G2/M期细胞比例明显高于对照组(P<0.01)。免疫印迹分析,与空白对照组比较,4 mmol/L二甲双胍处理组Cdc2和Cyclin B1的表达水平明显下降,Cdc2在Try15位点磷酸化明显上调,而在Thr161位点的磷酸化明显下调。结论:二甲双胍能抑制Dami细胞增殖并诱导其发生G2/M期阻滞,其机制可能与Cdc2/Cyclin B1复合物的活化受到抑制有关。 相似文献
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目的 筛选人与重组G-CSF分子有结合活性的小分子多肽。方法 将靶分子G-CSF固定在塑料平皿上,对随机噬菌体六肽库进行3轮筛选。经孵育、洗脱、扩大培养和ELISA分析,随机挑取出第3轮得到的4个阳性克隆测序,然后进行同源性比较。结果 找到1个保守性肽段序列模式“SXXRVX”,此模式在人和小鼠的受体中都未见到其同源序列。结论 此小肽可与G-CSF结合,故有一定程度上有可能抑制G-CSF与受体的结合,为临床治疗炎症反应和研究G-CSF与受体相互作用的机制提供了一定的帮助。 相似文献
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水母雪莲细胞培养物调血脂作用的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
背景:鉴于野生水母雪莲濒临灭绝,军事医学科学院建立了一种人工培养水母雪莲的方法。目的:探讨水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠的调血脂作用。设计:完全随机设计,对照实验研究。单位:由解放军总医院心内科和军事医学科学院生物工程研究所合作。材料:实验于2003-03/06在解放军总医院医学实验动物中心完成。实验动物由解放军总医院实验动物中心提供。雄性SD大鼠64只,体质量200~220g,随机分为4组,每组16只:正常对照组、高脂模型组、高剂量组和低剂量组。干预:正常对照组仅喂基础饲料,高脂模型组喂高脂饲料,高剂量组喂高脂饲料的同时饲以水母雪莲细胞培养物500mg/Kg,低剂量组喂高脂饲料的同时饲以水母雪莲细胞培养物50mg/Kg。给药1次/d,3周后采血,测定血脂水平及肝肾功能。主要观察指标:各组间血脂水平差异及肝肾功能变化。结果:高剂量组胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平低于高脂模型组犤(2.66±0.51)mmol/L,(3.23±0.57)mmol/L,P=0.030;(1.59±0.77)mmol/L,(2.48±0.83)mmol/L,P=0.023;(1.68±0.31)mmol/L,(2.07±0.43)mmol/L,P=0.032犦。高剂量组高密度脂蛋白水平高于高脂模型组犤(0.98±0.29)mmol/L,(0.66±0.37)mmol/L,P=0.045犦。各组间肝肾功能差异无显著性意义(P>0.05)。结论:水母雪莲细胞培养物对 相似文献
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目的构建红色糖多孢菌糖基转移酶EryCⅢ失活突变体,为探索红霉素糖基结构修饰和合成新型红霉素衍生物打下基础。方法通过PCR扩增方法将eryCⅢ基因缺失130bp后,克隆至同源重组型质粒pWHM3上,构建pWHM3-ΔeryCⅢ,将其导入红色糖多孢菌A226中。经过两次同源重组,筛选出1株缺失EryCⅢ酶活性的红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体。使用抑菌实验、薄层层析和质谱对其发酵产物进行分析,并通过回补实验进一步验证。结果与结论对红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ染色体序列测定表明,eryCⅢ基因相应位点缺失130bp,突变菌株发酵产物对枯草芽孢杆菌无抑制作用,薄层和质谱结果表明突变菌株积累3-L-mycarose红霉内酯B(MEB),而并没有发现红霉素产物。回补验证发现eryCⅢ基因导入A226-ΔeryCⅢ使得其恢复了红霉素合成能力。所构建的红色糖多孢菌EryCⅢ失活突变体A226-ΔeryCⅢ,为探讨组合合成红霉素衍生物奠定基础。 相似文献
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目的构建表达重组人proEMAPⅡ蛋白N端(p43N)及C端(p43C)结构域,并进行活性鉴定。方法分别在大肠杆菌中表达p43N及p43C蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用血管内皮细胞管腔形成实验及细胞迁移实验进行活性鉴定,并比较等摩尔浓度下,p43蛋白、p43N、p43C及p43N+p43C的活性差异。结果 p43N及p43C均具有抑制内皮细胞管腔形成和迁移的活性,在等摩尔浓度条件下,p43蛋白的生物活性高于p43N和p43C,p43N活性最弱,但p43N和p43C共同作用时,抑制活性高于单独作用。结论获得具有生物活性的p43N及p43C蛋白,为进一步确定p43N作用机制及其与p43C相互关系奠定了基础。 相似文献
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重组人proEMAPⅡ/p43体外抑制新生血管生成活性方法的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。 相似文献