红色糖多孢菌M合成3-脱氧-3-羰基-赤酮酸内酯B的限速因子研究

目的探讨红色糖多孢菌KR6基因突变体生物合成3-脱氧-3羰基-赤酮酸内酯B（DOEB）产量显著降低的原因。方法以KR6基因突变体M菌株为研究对象,采用相对实时荧光定量RT-PCR技术、抗原-抗体检测技术和高分辨LC-MS分析技术等,分别从基因的转录水平、翻译水平以及聚酮化合物水平等层面研究了DOEB的生物合成量。结果红色糖多孢菌M菌株与出发菌株A226相比,两者聚酮合酶（PKS）基因簇在转录水平和翻译水平上的表达差异均非造成DOEB产量降低的限速因子;而DOEB的前体转化能力却大幅度降低,因此,DOEB合酶的活力降低是造成生物合成DOEB产量降低的关键因素。结论 DOEB合酶的活力是生物合成DOEB的限速因子,本研究为进一步探讨利用基因工程途径提高新酮内酯类化合物产量奠定了基础。     

青蒿素衍生物抗癌机制探讨

目的：探讨青蒿素衍生物诱导肿瘤细胞产生自由基,引导肿瘤细胞死亡的机制。方法测定小鼠肿瘤动物模型的瘤体铁含量、观察青蒿素衍生物诱导肿瘤细胞产生自由基、采用单细胞彗星电泳法观察自由基对肿瘤细胞DNA杀伤的效应。结果小鼠的H22瘤体的铁含量显著高于血和肌肉、肺组织铁含量, Lewis肺癌的实验结果相同。K562细胞经青蒿素衍生物作用,能测出微量的自由基。青蒿素衍生物作用K562细胞可引起DNA损伤并溢出细胞。结论青蒿素衍生物可在含铁量较高的肿瘤细胞内产生自由基,导致肿瘤细胞死亡。     

CAR在乳鼠肠、肝、心、脑、肾、肺组织的表达

目的检测柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在乳鼠肠、肝、心、脑、肾、肺组织中的表达变化,为研究CVB感染引发病毒性疾病与组织中CAR表达水平的关联性提供参考。方法采用荧光实时定量PCR和Western blot法测定正常BALB/c乳鼠肠、肝、心、脑、肾、肺组织中CAR受体在核酸水平和蛋白水平的相对表达量。结果定量PCR显示CAR在乳鼠脑、肺、肠组织中表达显著高于肝、肾、心组织,差异均有显著性(P<0.01)。Western blot检测发现与定量PCR结果基本一致。结论 CAR的表达存在组织特异分布的特点。     

计算机辅助设计抗肿瘤凋亡基因livin的反义核酸

目的:研究利用计算机辅助设计抗肿瘤细胞凋亡基因livinmRNA的反义核酸。方法:利用RNAdraw和Sfold两种软件进行livinmRNA反义核酸的二级结构预测,并转染肿瘤细胞HeLa,诱导细胞凋亡。结果:用这种方法设计出5个反义核酸,它们能够有效地抑制肿瘤细胞HeLa的生长,促进其凋亡。结论:利用这两种计算机软件设计livinmRNA反义核酸是可行的,能够有效的促进细胞凋亡。     

重组人G-CSF构象异构体的分离与鉴定

目的：探索原核基因工程产品质量控制的指标。方法：以重组粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）为模型,将其中构象不均一组分进行分离,并对每个成分进行鉴定。结果：重组人Ｇ－ＣＳＦ在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经纯化和复性后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单一蛋白带,但在非变性ＰＡＧＥ中出现３条带,继而采用制备型非变性ＰＡＧＥ成功地将３种成分分离。３种成分在同样的缓冲体系中分别存放３个月,仍未见互变异构现象。经激光解析飞行时间质谱检测,３种成分相对分子质量相同,测序表明,Ｎ端连续的５个氨基酸残基排列安全相同。结论：３种成分为重组蛋白的不均一折叠形成的构象异构体。     

肝细胞生成素通过自分泌循环刺激肝癌细胞系的增殖

目的：证明肝细胞生成素（Hepatopoietin,HPO）是否通过自分泌循环的方式刺激体外培养的肝癌细胞系的自主性增殖。方法：以体外培养的肝癌细胞系为模型,利用RT-PCR,ELISA和Western bolt观察HPO的表达;利用HPO特异性抗体封闭HPO的作用,观察封闭HPO的作用后,细胞增殖的变化。结果：显示了肝癌细胞表达HPO并可分泌到细胞培养液中,分泌的HPO有刺激肝癌细胞增殖的作用,HPO特异性抗体可中和HPO并可部分抑制肝癌细胞的自主性生长。结论：在体外培养的肝癌细胞中存在维持其自主性生长的HPO自分泌循环。     

用噬菌体展示六肽库筛选与具有结合活性的小分子多肽

目的筛选与人重组G-CSF分子有结合活性的小分子多肽.方法将靶分子G-CSF固定在塑料平皿上,对随机噬菌体六肽库进行3轮筛选.经孵育、洗脱、扩大培养和ELISA分析,随机挑取出第3轮得到的4个阳性克隆测序,然后进行同源性比较.结果找到1个保守性肽段序列模式"SXXRVX”,此模式在人和小鼠的受体中都未见到其同源序列.结论此小肽可与G-CSF结合,故在一定程度上有可能抑制G-CSF与受体的结合,为临床治疗炎症反应和研究G-CSF与受体相互作用的机制提供了一定的帮助.     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠血清透明质酸浓度的影响

目的探讨重组人肝再生增强因子(hALR)对肝纤维化大鼠血清透明质酸浓度的影响.方法建立四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型.模型完成后予不同剂量hALR(50μg·kg-1·d、10μg·kg-1·d)治疗.在不同的时间点留取大鼠血清标本,测定透明质酸浓度.结果在两种模型中hALR治疗组大鼠血清透明质酸浓度在治疗过程中的不同阶段(治疗1、2个月)均明显低于模型组(四氯化碳模型分别为340.7±32.1、234.1±19.5;人血白蛋白模型分别为366.5±32.3、287.3±30.1).高剂量hALR组大鼠血清透明质酸浓度(四氯化碳模型分别为203.3±15.5、134.1±9.8;人血白蛋白模型分别为218.9±15.8、143.1±8.7)均明显低于低剂量组(四氯化碳模型分别为273.3±13.4、186.6±11.3;人血白蛋白模型分别为276.1±23.4、198.7±11.5).结论重组人肝再生增强因子可降低肝纤维化大鼠血清透明质酸含量.     

东莞市放射工作人员健康状况及职业放射暴露水平对健康影响分析

目的 了解东莞市放射工作人员的健康状况及职业放射暴露水平对健康的影响,探讨放射工作人员晶状体浑浊发生的影响因素。方法 选取2018年在东莞市职业病防治中心进行健康体检的663名放射工作人员作为研究对象。其中,研究对象的健康体检根据《放射工作人员职业健康监护技术规范》进行,包括眼部检查、血尿常规、肝肾功能及心电图等;本研究对个人累积放射剂量的评估,采用个体剂量计的连续监测。最后,整合所有数据进行统计分析。结果 本研究放射工作人员的平均年龄为30.0(26.0,35.0)岁。其中,男性占74.1%;年均照射剂量为(1.19±0.90)mSv;视力异常发生率为38.5%、晶状体浑浊发生率为3.5%、高尿酸发生率为27.5%,甲状腺功能异常、脂肪肝以及心电图异常的发生率分别为4.8%、17.2%和13.9%;在≥1 mSv组中,晶状体浑浊的发生率为(4.7%)明显高于<1 mSv组(1.5%),差异有统计学意义(χ²=4.82,P=0.03),其它指标间的差异均无统计学意义(均P>0.05)。logistic回归结果表明,年均照射剂量≥1 mSv(OR=3.13,95%CI:1.03~9.51)、工业辐照(OR=3.13,95%CI:1.10~8.90)能显著增加放射工作人员发生晶状体浑浊的风险。结论 低剂量电离辐射暴露是放射工作人员发生晶状体浑浊的危险因素,应加强放射工作过程的眼部防护。     

p185HER-2蛋白胞外区的表达及其结合肽的筛选

目的：构建p185^HER-2蛋白胞外区的原核表达裁体，实现p185^HER-2蛋白胞外区的表达。以纯化p185^HER-2蛋白胞外区为靶，从噬菌体肽库中筛选其结合肽，用于肿瘤导向治疗。方法：从含有HER-2全长cDNA的质粒psv^2-cerbB-2中克隆了人p185^HER-2蛋白胞外区cDNA，将此cDNA克隆到pET-30a 表达栽体中，构建p185蛋白胞外区的表达栽体。表达的p185^HER-2蛋白胞外区通过Zn^2 螯合层析柱进行纯化。以纯化的p185^HER-2蛋白胞外区为靶，通过淘洗方法进行噬茵体肽库筛选。结果与结论：构建了p185^HER-2蛋白胞外区的原核表达栽体，实现了p185^HER-2蛋白胞外区的高表达。通过Zn^2 螯合层析柱实现一步纯化，p185^HER-2蛋白胞外区的纯度达到95％。从噬菌体随机环七肽库中找到了一组具有核心序列p185^HER-2蛋白胞外区结合肽。这些p185^HER-2蛋白胞外区结合肽有可能成为肿瘤治疗的新的候选分子。