G-CSF-CRH催化区结合肽的高效表达及生物学活性的研究

粒细胞集落刺激因予（G CSF）是调节粒系造血的特异性生长因子，它不仅能够刺激骨髓前体细胞的增殖，而且能够强有力地诱导骨髓前体细胞分化成熟为中性粒细胞，这些生物学活性都是通过细胞表面特异受体G-CSFR实现的。G-CSFR由胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域三部分组成。胞外结构域又由三部分组成。类Ig区（类免疫球蛋白区），细胞因子受体同源区（CRH区），3个纤连蛋白Ⅲ型区（FnⅢ区）。     

Livin——癌症治疗的新靶点

Livin是IAPs(inhibitorsofapoptosisproteins,IAPs)蛋白家族的新成员 ,有BIR和RING指结构域 ,能够与Caspas es蛋白结合 ,抑制其介导的细胞凋亡。它在大多数正常成人组织中不表达、在一些肿瘤细胞中的高表达 ,与肿瘤的关系为人们所关注 ,是肿瘤治疗的潜在靶点。     

非糖基化尿激酶原的研究

目的：构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体，并观察其表达及活性情况。方法：使用PCR扩增的方法，将302位天冬酰胺（Asn302）突变为丙氨酸（Ala302），去掉糖基化位点；将156位精氨酸（Arg156）突变为赖氨酸（Lys156），去掉凝血酶作用位点。将突变体基因转染到哺乳动物细胞中。收取无血清培养上清．并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性。结果：PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子质量略大于1200bp，与理论分子质量1296bp基本符合。转染成功的细胞株用于扩大培养。纤维蛋白板溶解圈法测定上清活性为295．58IU／mL。结论：非糖基化、抗凝血酶的尿激酶原突变体构建成功。转染后细胞生长良好，表达水平较高。     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠基质分解素—1基因表达的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR）对肝纤维化大鼠基质分解素－1（MMP3）基因表达的影响,建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型,模型完成后予不同剂量hALR治疗,在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用逆转录定量聚合酶链反应（RT－PCR）测定MMP3的基因表达。结果在两种模型中hALR治疗组大鼠肝组织MMP3的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段均明显高于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织基质分解素－1的基因表达水平均明显高于低剂量组,提示hALR可增强肝纤维化大鼠MMP3的基因表达。     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

噬菌体肽库研究进展

噬菌体肽库是将一段编码外源短肽的寡聚核苷酸整合到噬菌体基因中 ,以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达 ,从而构建成序列不同的特定长度的小肽集合。一般采用生物亲合选择系统淘选噬菌体肽库。随着此项技术的不断完善和发展 ,噬菌体肽库已在许多领域得到了广泛的运用     

血管内皮生长因子受体KDR的靶向制剂的制备

目的：研究从噬菌体肽库中筛选到的与血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)有特异结合活性的小肽，做为KDR靶向药物的先导物质的应用。方法：从噬菌体肽库中筛选能特异结合KDR的噬菌体克隆，挑选结合力最强的克隆测序并化学合成小肽P5，梯度ELISA、阻断实验和竞争结合实验测定小肽在体外与KDR的结合活性。将P5与生物素(NHS-d-Biotin)、BSA化学偶联，ELISA法和细胞免疫组化实验检测偶联物与KDR的结合活性。结果：化学合成的小肽P5在体外能特异结合KDR，Kd=168．6nmol／L，约是KDR与配体血管内皮生长因子(VEGF165)亲和力的1／30，P5能阻断VEGF165与KDR的结合活性，但不能竞争VEGF165与KDR的结合活性。将P5作为导向物质化学合成的P5-BSA-Biotin，在体外同样具有与KDR和细胞表面KDR分子结合的特性。结论：化学合成的小肽P5有望作为先导分子，在以KDR为靶点的肿瘤靶向治疗中得到应用。     

抗CD19 CAR-T对K562~(CD19+)肿瘤细胞特异性杀伤作用的研究

目的构建表达抗CD19分子的嵌合抗原受体,制备抗CD19 CAR-T细胞,研究其对CD19表型细胞的特异性识别和杀伤效果。方法通过分子克隆方法,构建能够自剪切EGFP荧光报告的抗CD19 CAR分子,将其重组到慢病毒载体中并包装获得慢病毒。通过慢病毒递送的方式,将抗CD19 CAR过表达于primary-T细胞,流式细胞术分析确认表达后,通过ELISA检测CAR-T细胞IL-2分泌情况,最后用LDH释放法评价靶向杀伤作用。结果成功获得抗CD19 CAR的慢病毒递送载体;流式细胞术表明CAR分子在T细胞表面高效稳定表达;ELISA结果显示CAR-T细胞在靶细胞刺激下IL-2分泌水平显著升高(P0.01);LDH结果显示CAR-T细胞特异性杀伤CD19表型细胞,且杀伤效果在E:T=10:1时达到50%以上,显著高于对照组(P0.05)。结论成功获取了具有靶向CD19表型细胞的CAR-T细胞,能高效特异性杀伤肿瘤细胞。     

重组人粒细胞集落刺激因子治疗急性放射病的实验研究

为了评价重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)用于治疗骨髓型急性放射病的可能性,我们以~(60)Coγ线6.5Gy及8.0Gy照射小鼠为模型,研究了rhG-CSF的不同给药剂量、给药早晚及治疗持续时间对照射小鼠外周血细胞和活存率的影响。结果表明,6.5Gy照射小鼠给予不同剂量rhG-CSF(1.25—5.0μg/d)治疗后,外周血白细胞、红细胞及血小板的恢复明显加快,其中以5.0μg剂量组效果最佳;在剂量相同的情况下(5.0μg/d)本所制备的rhG-CSF与美国AMGEN公司出售的优保津(rhG-CSF,Filgrastin)效价相当。在同样条件下,rhG-CSF(5μg/d×7d)照后3天和7天开始给药,白细胞及血小板的恢复早于对照组,迟于照后当天给药组,但红细胞水平却比对照组低。8.0Gy照射小鼠于照后当天开始给药(rhG-CSF5.0μg/d),治疗3、7及12天的小鼠30天活存率均高于对照组,其中以治疗7天组效果最佳(P<0.05)。以上结果表明,对于小鼠骨髓型急性放射病,rhG-CSF照后当天给药,剂量5.0μg/d,连续治疗7天为最佳方案。     

合成生物学技术在地雷检测中的应用

近年来,随着合成生物学技术的发展,许多基于合成生物学的生物传感器检测方法应运而生。其中基于合成生物学的地雷检测技术能够提供较高的检测特异性,并且使用安全,价格低廉。本文主要介绍一些利用合成生物学技术的方法,通过检测地雷泄漏物24,,6-三硝基甲苯（TNT）来实现地雷的生物检测。