用噬菌体展示技术分析G-CSF受体的配体结合位点

目的：分析粒细胞集落刺激因子（G－CSF）受体中参与配体结合的关键性氨基酸残基。方法：以G－CSF为靶分子，对随机噬菌体文库进行筛选，阳性噬菌体克隆进行序列测定并与G－CSF受体进行同源性比较和分析。结果：得到一个保守性的序列模式SXXRVX，其中第4位氨基酸是高度保守的Arg，表明Arg在与G－CSF的结合中可能起重要作用。将此模式与G－CSF受体进行同源性比较和序列分析，发现G－CSF受体中第288位的Arg也是参与配体结合的关键性氨基酸。结论：模拟小肽和G－CSF 体中高度保守的Arg的存在，说明Arg在G－CSF受体与其配体的结合中起重要作用。     

尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定

目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。     

Bax反义硫代脱氧寡核苷酸的体外抗辐射效应研究

目的 :Bcl_2 Bax蛋白比值降低是辐射所致细胞凋亡启动的检查点。本研究拟用Bax反义核酸干预Bax基因的表达 ,提高Bcl_2 Bax蛋白比值 ,抑制辐射所致凋亡 ,促进细胞存活。方法 :人胚肺成纤维细胞 (HELF)和小鼠受γ射线照射后 ,立即用Bax反义脱氧寡核苷酸处理HELF细胞和小鼠骨髓细胞 6h(终浓度均为 10 0nmol L) ,用MTT法、SRB法和小鼠骨髓中性粒细胞_巨噬细胞系祖细胞 (CFU_GM)集落形成法 ,确定细胞的存活状况。用RT_PCR方法和流式细胞仪检测BaxmRNA的表达状况、细胞周期的变化 ,分析其作用机制。结果 :HELF细胞的存活率分别增加 2 4 .4 % (MTT法 ,P <0 .0 1)和 12 .8% (SRB法 ,P <0 .0 1) ;骨髓细胞处理组CFU_GM集落形成数量远高于照射对照(72± 17vs 13± 6 ,P <0 .0 1) ;RT_PCR检测显示 ,处理组的目标条带和内标条带的灰度比值 (Bax β_actin)低于对照组(分别为 4 3.9%和 6 8.6 % ) ;流式细胞仪检测表明 ,处理组总S期细胞的比例高于对照组 ,分别为 2 4 .2 %和 7.7% ,提示处理组细胞内BaxmRNA拷贝数量低于对照组 ,细胞增殖活动较强。结论 :靶向BaxmRNA的反义硫代脱氧寡核苷酸 ,能够促进γ射线辐射后细胞的存活 ,其机制与破坏靶mRNA分子 ,继而造成Bax蛋白表达减少 ,抑制凋亡启动并促进细胞增殖活动有关。     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的影响

目的　了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP1)基因表达的影响。方法　建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型。模型完成后予不同剂量hALR(每天 5 0、10 μg/kg体重 )治疗。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录定量聚合酶链反应 (RT PCR)测定TIMP1的基因表达水平。结果　在两种模型中低剂量hALR治疗组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段与模型组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;高剂量hALR组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平(四氯化碳模型 2 .13± 0 .2 0 ,1.3 6± 0 .13 ;白蛋白模型 3 .0 2± 0 .5 2 ,1.85± 0 .42 )均明显低于模型组(四氯化碳模型 3 .3 1± 0 .2 6,2 .40± 0 .2 3 ;白蛋白模型 4.60± 0 .73 ,3 .61± 0 .62 )。结论　重组人肝再生增强因子可抑制肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子 1的基因表达。     

非霍奇金淋巴瘤的Rituximab治疗

Rituximab是用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)的单抗药物.Rituximab单独使用对B细胞NHL总有效率为40%～50%;和化疗药物联用有效率达90%以上.毒性作用轻微,是临床治疗B细胞NHL的安全有效的新药.现综述Rituximab用于治疗各种类型NHL的临床试验以及与其他药物联用的临床试验.     

rhG─CSF对6．5Gy照射小鼠近期及远期造血恢复作用的影响

为了观察重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对机体长期造血功能恢复的影响，设计了二次照射小鼠模型，即首次γ线照射后给予不同剂量的ｒｈＧ－ＣＦＳ治疗，待外周血细胞恢复正常后（照后４５ｄ），给予等剂量第二次照射，照后不再接受任何治疗，观察前后两次照射后外周血细胞的恢复和活存率的改变。结果发现首次照射后各治疗组小鼠外周血ＷＢＣ、ＲＢＣ及血小板恢复时间提前，恢复速度加快，ＲＢＣ及血小板谷值升高。第二次照射后尽管各观察组小鼠外周血ＷＢＣ、ＲＢＣ及血小板的恢复均较缓慢，但原ｒｈＧ－ＣＳＦ治疗组小鼠外周血恢复速度仍明显快于对照组，恢复时间也明显提前，其中以２．５及５．０μｇ剂量组效果最佳，１．２５、２．５和５．０μｇ组小鼠３０ｄ活存率分别比对照组提高６％、４０．５％和４４．２％，后两组均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５或０．０１）。表明ｒｈＧ－ＣＳＦ不仅能促进受照小鼠近期造血功能的恢复，而且照后早期给药对照射小鼠长期造血功能也有保护作用     

小鼠胎肝造血基质细胞株无血清培养上清中造血负调控物质的初步研究

采用离子交换层析和凝胶过滤层析方法，从小鼠胎肝造血基质细胞株（ＭＦＬＳＣ株）无血清培养上清中纯化出一个对红系及粒系造血祖细胞生长表现抑制作用的组分。此抑制活性组分的分子量约为６０－７０ｋＤａ，高热和蛋白酶处理可使之灭活。文中讨论了该组分的可能本质及与胎肝造血调控的关系．     

反义寡核苷酸的药代动力学研究进展

反义药物在经历了20年后，又迎来了一个蓬勃的发展阶段。研究结果表明，反义药物在抗肿瘤、抗炎和抗病毒等方面展现出令人鼓舞的前景，反义寡核苷酸可能成为新药开发新的生长点。本文调查了近年反义寡核苷酸药代动力学的研究进展，对反义寡核苷酸的吸收、分布、代谢和排泄进行了详细的综述。     

Livin mRNA的反义核酸诱导MCF-7乳癌细胞凋亡作用

目的：以livin mRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸(PS—ODNs)，探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法：设计以livin mRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF-7乳癌细胞，用MTT、RT—PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果：在设计的一些反义核酸中，YMZ05能够有效地抑制livin基因的表达，增加caspase-3的活性，诱导MCF-7细胞凋亡，明显抑制其生长，结论：通过抑制livin基因的表达能够抑制MCF-7乳癌细胞生长、诱导其凋亡，livin可能会成为抗肿瘤的新靶点。