合成生物学的特征及应用

20世纪,人们对生命的认识逐步深入,通过以分子生物学为核心的技术方法诠释如遗传、发育、疾病及进化等生命现象,获得了大量关于基因和蛋白质等生命体基本组成元件的结构和功能信息。扎根在这样的知识土壤中,以天然的生物元件为素材,以分子生物学和遗传工程等现代生物技术为支撑平台,在寻求思维和技术创新的需求下,合成生物学（synthetic biology）研究破土而出。     

全球生物制药产业概况

以基因工程、抗体工程或细胞工程技术生产的,源自生物体内的,用于体内诊断、治疗或预防的生物技术药物,已经成为利用现代生物技术生产的最重要的产品,并成为衡量一个国家现代生物技术发展水平的一个最重要的标志,生物制药已成为制药业中发展最快、活力最强和技术含量最高的领域。从1982年第一个新生物技术药物基因重组人胰岛素上市至今,生物制药产业只有20余年历史,约有100余种产品,但这些产品在治疗肾性贫血、白细胞减少、癌症、器官移植排斥、     

基于CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体的初步研究

目的利用CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体。方法将质粒pcDNA3.1（＋）的CMV启动子下游区域通过PCR技术替换成设计好的多克隆位点区,分别插入PCR合成的HdvRz核心序列和polyA尾片段,形成框架载体pc-H-A,通过瞬时转染HeLa细胞初步鉴定pc-H-A的可用性;用本室保存的CVB3（nancy株）感染HeLa细胞,取感染液上清提取病毒RNA,利用长链RT-PCR和长链PCR技术反复优化条件扩增病毒基因组全长片段,将此全长片段克隆至设计好的框架载体pc-H-A中,筛选阳性克隆,并对其进行测序鉴定。结果与结论构建了带有CMV启动子的框架载体pc-H-A并初步鉴定了该载体可用,利用此框架载体构建了与基因库中序列相似性为99%的CVB3全长cDNA克隆pc-CVB3-H-A。该研究为进一步鉴定所构建的CVB3全长克隆的感染性提供了基础,并为后续在病毒学研究和基因治疗方面的研究提供了手段。     

二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：研究二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞生长的影响,初步探讨二甲双胍抑制Dami细胞增殖的分子机制。方法：将培养的Dami细胞分为空白对照组,1、2、4、8、16和32 mmol?L-1二甲双胍处理组;MTT法检测不同浓度二甲双胍作用后Dami细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹分析Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达以及Cdc2蛋白的磷酸化修饰。结果：MTT检测,与空白对照组比较,32 mmol/L二甲双胍处理组0、24、48、72和96 h Dami细胞增殖抑制率明显升高［（35.1±2.3）%、（49.7±5.1）%、（78.8±0.9）%、（79.1±3.0）%和（85.2±3.2）%］（P<0.01）;在二甲双胍处理72 h后,1、2、4、8、16和32 mmol/L处理组Dami细胞增殖抑制率分别为（33.8±1.3）%、（51.9±2.2）%、（59.4±1.6）%、（65.5±2.0）%、（75.5±0.9%）和（79.1±3.0）%,二甲双胍对Dami细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测,与空白对照组比较,1、2和4 mmol/L二甲双胍处理组G2/M期细胞比例从（26.0±0.5）%升高至（38.5±1.5）%、（48.4±1.1）%和（58.2±2.7）%,4 mmol?L-1二甲双胍处理组G2/M期细胞比例明显高于对照组（P<0.01）。免疫印迹分析,与空白对照组比较,4 mmol/L二甲双胍处理组Cdc2和Cyclin B1的表达水平明显下降,Cdc2在Try15位点磷酸化明显上调,而在Thr161位点的磷酸化明显下调。结论：二甲双胍能抑制Dami细胞增殖并诱导其发生G2/M期阻滞,其机制可能与Cdc2/Cyclin B1复合物的活化受到抑制有关。     

重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化I、Ⅲ型胶原基因表达的影响

目的了解重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响.方法建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性2种大鼠肝纤维化模型,在造模的同时给予不同剂量的重组人肝再生增强因子(hALR).在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平.结果在两种模型中hALR低剂量组大鼠肝组织Ⅰ型胶原(CCl4模型2、4、6、8周分别为1.71±0.26、3.42±0.67、3.76±0.43、3.33±0.69;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为3.86±0.66、2.98±0.40),Ⅲ型胶原(CCl4模型2、4、6、8周分别为0.97±0.16、2.03±0.32、1.86±0.33、1.66±0.23;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为2.63±0 34、2.02±0.32)的基因表达水平在模型形成的不同阶段均明显低于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平均明显低于低剂量组.结论重组人肝再生增强因子可能有抑制大鼠实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的作用.     

羧肽酶A/B亚家族

羧肽酶A/B是一类水解蛋白质或多肽C 端氨基酸残基的外肽酶。众多学者对其特性、结构及功能进行了深入的研究,最近的研究显示羧肽酶A/B具有一些新的功能。此文拟对羧肽酶A/B亚家族成员的特性、结构特征、结构与功能及其与疾病的关系作一简要综述     

水母雪莲细胞培养物调血脂作用的研究

背景:鉴于野生水母雪莲濒临灭绝,军事医学科学院建立了一种人工培养水母雪莲的方法。目的:探讨水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠的调血脂作用。设计:完全随机设计,对照实验研究。单位:由解放军总医院心内科和军事医学科学院生物工程研究所合作。材料:实验于2003-03/06在解放军总医院医学实验动物中心完成。实验动物由解放军总医院实验动物中心提供。雄性SD大鼠64只,体质量200～220g,随机分为4组,每组16只:正常对照组、高脂模型组、高剂量组和低剂量组。干预:正常对照组仅喂基础饲料,高脂模型组喂高脂饲料,高剂量组喂高脂饲料的同时饲以水母雪莲细胞培养物500mg/Kg,低剂量组喂高脂饲料的同时饲以水母雪莲细胞培养物50mg/Kg。给药1次/d,3周后采血,测定血脂水平及肝肾功能。主要观察指标:各组间血脂水平差异及肝肾功能变化。结果:高剂量组胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平低于高脂模型组犤(2.66±0.51)mmol/L,(3.23±0.57)mmol/L,P=0.030;(1.59±0.77)mmol/L,(2.48±0.83)mmol/L,P=0.023;(1.68±0.31)mmol/L,(2.07±0.43)mmol/L,P=0.032犦。高剂量组高密度脂蛋白水平高于高脂模型组犤(0.98±0.29)mmol/L,(0.66±0.37)mmol/L,P=0.045犦。各组间肝肾功能差异无显著性意义(P>0.05)。结论:水母雪莲细胞培养物对     

波形蛋白在细胞凋亡中的变化

波形蛋白(vimentin)是一种中间纤维蛋白，由单一多肽链构成，主要分布在中胚层来源的组织中。在细胞中，波形蛋白主要作为结构蛋白起作用。在细胞凋亡过程中，波形蛋白很快被水解。其主要的裂解位点分别位于Asp85和Asp259位置；波形蛋白的裂解是由半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)或被该酶激活的一组蛋白酶介导的；由caspase介导的波形蛋白在Asp85位的裂解导致产生一个N端小片段，此片段能够诱导依赖于caspase的细胞凋亡。     

大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化

目的:利用毕赤酵母表达系统,表达大鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,同时探讨最优表达条件,为规模化发酵生产羧肽酶B奠定基础。方法:以RTPCR法从SD大鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,转入毕赤酵母Gs115细胞,在甲醇的诱导下表达目的蛋白。结果与结论:首次实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达;通过表达条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%(体积比体积)的酪蛋白水解物和3mmol/L的PMSF,于28℃,每隔12h补加0.5%(体积比体积)的甲醇,重组酵母Gs115proCPB表达的重组蛋白可达500mg/L,表达的目的蛋白占总蛋白的94%,活化后的重组CPB相对分子质量为35.1×103,与理论值(35.2×103)极相近。活性测定表明,重组proCPB活化后的CPB的比活力可达110U/mg(CPB参照品为180U/mg)。