基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用

目的：通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒（CMV）启动子,加入谷氨酰胺合成酶（ GS）基因筛选标志,再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切,插入人巨细胞病毒（hCMV）启动子,构建载体pHGS1．0。将目的基因分别插入载体pHGS1．0和pIRES2-EGFP中,通过比较重组蛋白TEM8（1-227）-VEGFR1domain2-IgG2（TV-IgG2）表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志,并加入hCMV启动子,人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现,重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选,得到高效表达目的蛋白载体系统,为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。