抗肿瘤反义寡核苷酸药物靶标的研究进展

肿瘤是一种多基因相关疾病,反义寡核苷酸药物可以特异性地与靶基因mRNA互补结合,封闭靶基因的表达,在肿瘤的基因治疗中独树一帜。现已发现许多基因在调节细胞增殖和衰老、细胞凋亡、细胞周期、血管生成及信号转导等方面起着重要作用,并证实它们在抗肿瘤反义治疗中可以作为有效的分子靶标。本文综述了近年来发现的抗肿瘤反义寡核苷酸的治疗靶点,并提出了多靶点反义寡核苷酸联合应用治疗肿瘤的新观念。     

反义寡核苷酸类药物的研究进展

反义寡核苷酸类药物通过与靶mRNA的相互作用调节目的基因的表达.它必须具备三个首要条件,即稳定性、选择性和通透靶向性.各种化学修饰包括第二代、第三代寡核苷酸明显增强了反义寡核苷酸的稳定性;靶序列选择方法的改进为其发挥高度选择性提供基础;各种靶向转运技术的应用大大增强了对作用部位的通透性和靶向性.这些方面的研究进展开阔了反义寡核苷酸类药物的应用领域.     

2′-O-甲氧乙基反义寡核苷酸应用于杜兴肌肉萎缩症的体外研究

目的:通过对反义寡核苷酸2′-O-甲氧乙基(2′-O-MOE)化学结构的体外实验,为杜兴肌肉萎缩症基因治疗方法提供一种候选的反义寡核苷酸药物。方法:在杜兴肌肉萎缩症小鼠H2K mdx细胞上转染不同长度和骨架修饰的2′-O-MOE反义寡核苷酸,利用RT-PCR技术检测其诱导外显子跳读的情况。结果:3种2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸体外诱导外显子跳读的效率显著高于目前临床检测的药物2′OmePS,表现出一定的浓度效应和时间效应。并且MOE25(PS)诱导外显子跳读的效率最好。结论:2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸能够有效地诱导H2K mdx细胞外显子跳读。     

反义寡核苷酸治疗的分子影像技术进展

反义寡核苷酸治疗在许多疾病的治疗中具有巨大的潜力。同时,反义寡核苷酸治疗药物在生物体内转运至靶点发挥作用过程中也面临许多障碍,并存在一些不可预期的不良反应。分子影像技术可以对反义寡核苷酸治疗的生物进程进行成像,并对治疗效果进行监测,对于优化反义寡核苷酸治疗至关重要。目前,多种分子影像模式已经应用在反义寡核苷酸治疗相关的研究上,每一个成像方式都有其独特的优势,但同样也有其固有的缺陷,多模态成像成为未来发展的趋势。     

反义，RNA干扰，基因沉默策略用于疾病治疗是否可行

反义寡核苷酸能调节基因表达,调控细胞功能和分化及细胞对于内外刺激的反应。虽然其作为治疗手段在临床前和临床研究中均已取得了令人鼓舞的结果,但实际运用中,仍有几大难点有待解决,包括效价、脱靶效应、转运及不良反应等。从反义寡核苷酸研究中获得的经验有助于其他基于寡核苷酸药物的研发,如CpG寡核苷酸、RNA干扰和微小RNA等。     

反义寡核苷酸作为治疗药物(编译)

反义寡核苷酸与RNA内靶序列互补核酸片段杂交形成DNA—RNA双链,从而阻断信使RNA翻译成蛋白质。化学和分子生物学进展为反义寡核苷酸的发展及改善其选择、稳定和特异的作用提供了基础。反义技术已广泛用于体内、体外实验,成为研究生物过程的调节机制和治疗癌症、病毒感染和遗传紊乱等疾病潜在的药物工具。     

生长因子的寡核苷酸对成纤维细胞增生的影响

目的 :观察一些生长因子有义和反义寡核苷酸对成纤维细胞增生的影响。方法 :采用细胞增生试验。结果 :1酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)的寡核苷酸和表皮生长因子 (EGF)的寡核苷酸以抑制细胞增生为主。2碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的有义寡核苷酸对成纤维细胞增生有抑制作用 ,但其反义寡核苷酸却有促进成纤维细胞增生的倾向。结论 :此实验提示反义寡核苷酸可以作为药物用于某些疾病的治疗 ,但其可能通过多种机理起治疗作用     

乳腺癌反义寡核苷酸治疗的研究进展

反义寡核苷酸技术(ASODN)作为一种新的分子生物学工具及新型药物受到医疗界越来越多的关注.许多反义药物作为抗肿瘤药物已进入临床试验,并取得了令人欣喜的效果.     

VEGF反义寡核苷酸抑制C6胶质瘤细胞VEGF表达的作用和效果

目的:设计了针对VEGF的第Ⅲ外显子(exon,E3)的反义、错义和正义寡核苷酸,观察VEGF反义寡核苷酸抑制C6胶质瘤细胞VEGF表达的作用.方法:免疫细胞化学法观察反义、正义、错义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VE GF表达的影响;观察制备反义、正义、错义寡核苷酸的条件培养液对内皮细胞生长的抑制作用.结果:VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF的表达有明显抑制作用.结论:反义VEGF寡核苷酸通过抑制C6胶质瘤细胞VEGF的表达,进而抑制内皮细胞的生长.     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

Survivin反义核酸影响A549肺癌细胞增殖和凋亡的研究

目的 研究Survivin反义寡核苷酸对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸,转染A549细胞,PT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA含量;Western印迹显示Survivin蛋白水平;以MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 Survivin反义寡核苷酸可明显降低A549细胞中survivin的mRNA和蛋白水平.MTT比色法结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制A549细胞增殖,抑制率远高于无义寡核苷酸组和空白对照组.TUNEL法检测结果显示,反义寡核苷酸还显著增强A549细胞对抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性,在较低高三尖杉酯碱浓度下,反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组.结论 sur-vivin反义寡核苷酸有望应用于肿瘤的辅助治疗之中.     

MMP-9反义寡核苷酸抑制胃癌细胞生长的实验研究

目的探讨MMP-9反义寡核苷酸作为靶基因对胃癌细胞的生长抑制效应,以进一步揭示MMP-9反义寡核苷酸治疗胃癌的可能性和可行性。方法以人胃癌细胞株MGC803为研究对象,应用ASODN技术,将MMP-9ASODN转染到MGC803细胞中,利用MTT法检测不同浓度不同时间MMP-9反义寡核苷酸对MGC803细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析MMP-9反义寡核苷酸对MGC803细胞周期及凋亡的影响。结果MMP-9反义寡核苷酸在体外能够抑制MGC803肿瘤细胞增殖,且这种增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性;MMP-9反义寡核苷酸在体外能够诱导MGC803肿瘤细胞凋亡,作用与浓度和时间有关。结论MMP-9反义寡核苷酸可望成为一种人胃癌临床有效的治疗方法。     

反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞周期的阻滞作用

目的: 观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞周期的影响. 方法: 大鼠气道平滑肌细胞原代培养后,以Lipofectin将反义、正义和错配c-myc寡核苷酸导入平滑肌细胞,流式细胞技术检测细胞周期,免疫组织化学方法检测cyclin D1和cyclin E的表达. 结果: 反义c-myc寡核苷酸可明显抑制大鼠气道平滑肌细胞通过S期,正义及错配c-myc寡核苷酸对细胞周期无明显影响;反义c-myc寡核苷酸抑制了大鼠气道平滑肌细胞cyclin D1和cyclin E的表达. 结论: 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞通过S期,抑制cyclin D1和cyclin E 的表达.     

白介素-1受体相关激酶-2和磷脂酰肌醇 3-激酶协同调控白介素-1诱导的NF-κB 活化

目的研究白介素1受体相关激酶2(IRAK-2)和磷脂酰肌醇 3-激酶(PI 3-激酶)在白介素-1(IL-1)诱导核因子- κB(NF-κB)活化中的作用.方法 Lipofectin介导反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸转染HepG2细胞后,用逆转录PCR法检测IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶 mRNA表达水平,以Sandwich ELISA法检测NF-κB的活化.结果 (1) 反义IRAK-2寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸分别抑制IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶mRNA的表达;(2)反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸部分抑制NF-κB活化;(3)与反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸单独转染HepG2细胞相比,反义IRAK-2 寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸共转染HepG2细胞对NF-κB的抑制作用明显增强.结论在HepG2细胞中,IRAK-2和PI 3-激酶都调控NF-κB活化但都不能完全激活NF-κB,IRAK-2和PI 3-激酶在调控NF-κB 活化时有协同作用.     

反义寡核苷酸技术的进展及应用

随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗应运而生,得到广泛的肯定,其中包括反义核酸技术,简称反义技术。那些能与特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ以碱基互补配对的方式结合,并阻止其转录和翻译的短核酸片段,称为反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）。研究反义寡核苷酸作用机理和应用的技术叫反义技术。 反义技术概述 早在１９８４年,Ｊｏｈｎａｔｈａｎ Ｇ就报道了用反义ＲＮＡ抑制ＴＫ基因的表达取得了良好的效果~［１］。反义寡核苷酸抑制靶基因的作用途经包括：１．反义寡核苷酸与ＤＮＡ双螺旋形成三螺旋,…     

反义核酸类药物的药理学研究进展

反义核酸技术是 2 0世纪 80年代出现的一种以应用反义核酸类药物来抑制特定基因表达为目的的基因治疗技术。反义核酸类药物包括反义寡核苷酸和核酶。前者是人工设计合成的与特定基因互补的寡核苷酸 ,它能通过Ｗ Ｃ配对与特定基因结合来抑制其表达。核酶是具有ＲＮＡ裂解活性的ＲＮＡ。它能与与其互补的靶基因的ｍＲＮＡ进行反式结合并能对其进行定点切割。应用反义核酸类药物可以特异 ,高效的抑制某种基因的表达 ,有望成为较理想的基因治疗手段。然而反义核酸要想真正成为一种药物用于临床尚存在一些问题 ,如 :他们必须先找到靶细胞 ,然后通…     

核素示踪反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠中的分布及显像研究

目的研究^125I标记反义寡核苷酸在正常小鼠内的生物分布,比较脂质体介导^131I标记正义及反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠体内的显像,以探讨核素标记的AS0N作为反义显像剂及反义治疗药物的可能性。方法通过氯胺-T法进行^125I与^131I标记含酪胺的18聚体寡核苷酸,制作荷瘤裸鼠模型,将148kBq ^125I标记反义寡核苷酸（2μg～3μg）,尾静脉注入正常小鼠,于不同时间处死小鼠,测定不同组织及标准源的放射性计数。荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体介导335MBq^131I标记反义寡核苷酸（7μg～9μg）,分别与注射后不同时间进行SPECT显像,以脂质体介导正义寡核苷酸作为对照,24h显像后处死全部裸鼠,取出血液、重要器官和肿瘤组织,测定各组织的放射性计数,并记算肿瘤与非肿瘤组织（T／NT）比值。结果^125I标记反义寡核苷酸注入正常小鼠体内后1h,各脏器达高峰,24h基本清除。肝、胃和肠放射性分布最高,骨、肌肉、脑中放射性分布较少。荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体介导的^131I标记反义寡核苷酸后立即用SPEcT成像仅见肿瘤部位,1、2h成像可见示踪剂从肿瘤到腹腔,24h仍见肿瘤显像。比较24h正义组与反义组肿瘤的％1D／g、肿瘤／血液、肿瘤／肌肉,差异有统计学意义。结论^131标记AS0N对淋巴瘤肿瘤组织有很强的特异性,可用于淋巴瘤反义显像和反义治疗的研究,但仍需进行大量的临床应用前研究。     

一种新的修饰型反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达bcl-2的初步研究

目的：用新的修饰型吗呆代反义寡核苷酸（M－ODN）抑制肿瘤细胞bcl-2的表达，探讨发展新的抗肿瘤药物的可能性。方法：用吗啉代bcl-2反义寡核苷酸作用于K－562细胞，并与全硫代修饰的bcl-2反义寡核酸（S－ODN）为对比，MTT法观察细胞生长抑制率，流式细胞术观察细胞凋亡率。结果：吗啉代修饰型的bcl-2反义寡核苷酸在作用效率、持久性及低细胞毒性等方面均优于硫代修饰。结论：反义吗啉代寡核有望成为新的肿瘤基因治疗手段。     

医用生物蛋白胶携载反义寡核苷酸的实验研究

血管内膜增生是各类血管手术后造成中远期通畅率较差的一个主要原因 ,临床上应用抗增生药物防治 ,但效果不理想。反义寡核苷酸防治血管内膜增生有良好前景 ,在反义基因防治内膜增生的研究中 ,血管外膜给药已成为一紧密结合临床的方法 ,即将反义寡核苷酸混于各种胶或异分子共聚物中涂于血管外壁 ,缓慢释放反义寡核苷酸以达到持续抑制血管内膜增生的效果 ,但研究和应用较多的是多聚凝胶。医用生物蛋白胶可模拟人体凝血最后阶段 ,形成乳白色蛋白凝胶 ,将其与麻醉药混合应用于患者术后镇痛 ,效果良好。我们设想同样将反义药物溶于生物蛋白胶中 ,…