SARS-CoV-2刺突蛋白抑制剂活性筛选方法研究进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019, COVID-19)对全球公共卫生和经济造成了前所未有的影响。SARSCoV-2通过其表面的刺突蛋白与宿主细胞膜上的血管紧张素转换酶2相结合是入侵宿主细胞的关键步骤,以刺突蛋白为靶标的小分子药物成为抗SARS-CoV-2研究的热点。活性筛选是小分子药物研发的关键步骤。鉴于此,本文综述了SARS-CoV-2刺突蛋白小分子抑制剂的活性筛选方法,以期为靶向刺突蛋白的抗病毒药物研发提供参考。     

重组人proEMAP1I／p43抑制新生血管生成与细胞凋亡关系研究

目的研究p43蛋白抑制新生血管生成是否通过诱导细胞凋亡来实现。方法用不同浓度的p43蛋白（0,10,50,100μg／m1）作用于HUVEC细胞12h,检测细胞体外管腔形成能力的变化,同时检测细胞周期变化,并通过胞内总半肽天冬酶（caspase）活性检测、caspase3和caspase7基因水平的变化及DNA片段化检测等方法,研究p43蛋白对HUVEC细胞凋亡的影响。结果与结论p43蛋白可明显抑制HUVEC细胞体外管腔形成,并随着p43蛋白浓度的升高抑制作用不断增强;不同浓度的I）43蛋白对HUVEC细胞周期没有明显影响,不能诱导HUVEC细胞凋亡。p43蛋白抑制新生血管的生成不是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

地高辛标记探针检测重组人p43蛋白宿主DNA残留量的研究

目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组DNA为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,操作安全简便,可用于重组人p43制备过程中的原液检定及质量监控。     

重组人proEMAPⅡ/p43体外抑制新生血管生成活性方法的建立

目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。