重组人p43蛋白抗血管生成活性及其机制

为了研究重组人p43(YS-1)蛋白对血管生成的影响及其机制,并考察其对肺癌实体瘤的抑制作用。采用内皮细胞增殖实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、大鼠动脉环体外实验、鸡胚尿囊膜体内实验考察YS-1的抗血管生成作用;采用Western印迹法检测细胞内磷酸化MEK1/2、Akt蛋白质的表达;选用人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤模型检测YS-1的体内抗肿瘤活性。结果发现,YS-1能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,可以抑制体外培养的大鼠动脉环微血管样结构及鸡胚尿囊膜血管,YS-1可以明显抑制血管内皮生长因子（VEGF）诱导的内皮细胞中VEGFR2及下游MEK1/2及Akt的磷酸化,YS-1高剂量(10mg/kg)能显著抑制肺癌A549移植瘤的生长。研究结果表明：YS-1能抑制人肺腺癌A-549裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能跟抑制VEGF引起的VEGFR2活化及信号转导而影响血管生成有关。     

重组人proEMAP1I／p43抑制新生血管生成与细胞凋亡关系研究

目的研究p43蛋白抑制新生血管生成是否通过诱导细胞凋亡来实现。方法用不同浓度的p43蛋白（0,10,50,100μg／m1）作用于HUVEC细胞12h,检测细胞体外管腔形成能力的变化,同时检测细胞周期变化,并通过胞内总半肽天冬酶（caspase）活性检测、caspase3和caspase7基因水平的变化及DNA片段化检测等方法,研究p43蛋白对HUVEC细胞凋亡的影响。结果与结论p43蛋白可明显抑制HUVEC细胞体外管腔形成,并随着p43蛋白浓度的升高抑制作用不断增强;不同浓度的I）43蛋白对HUVEC细胞周期没有明显影响,不能诱导HUVEC细胞凋亡。p43蛋白抑制新生血管的生成不是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

地高辛标记探针检测重组人p43蛋白宿主DNA残留量的研究

目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组DNA为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,操作安全简便,可用于重组人p43制备过程中的原液检定及质量监控。     

重组人proEMAPⅡ/p43体外抑制新生血管生成活性方法的建立

目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。