计算机辅助设计抗肿瘤凋亡基因livin的反义核酸

目的:研究利用计算机辅助设计抗肿瘤细胞凋亡基因livinmRNA的反义核酸。方法:利用RNAdraw和Sfold两种软件进行livinmRNA反义核酸的二级结构预测,并转染肿瘤细胞HeLa,诱导细胞凋亡。结果:用这种方法设计出5个反义核酸,它们能够有效地抑制肿瘤细胞HeLa的生长,促进其凋亡。结论:利用这两种计算机软件设计livinmRNA反义核酸是可行的,能够有效的促进细胞凋亡。     

Livin基因shRNA对恶性胶质瘤生长和凋亡的影响

目的 研究livin基因短发夹RNA(shRNA)对恶性胶质瘤生长和凋亡的影响.方法 将构建的livinβ基因shRNA真核表达载体以脂质体法转染C6细胞.应用Western blot检测livin表达水平;采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化.结果 Livin基因的shRNA可显著抑制C6细胞livin表达(P<0.01),转染组细胞生长受到显著抑(P<0.01),C6细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 Livin基因的shRNA导入C6胶质瘤细胞后抑制了livin基因在人胶质瘤细胞C6中的表达,并显著地诱导C6细胞发生凋亡.     

多种siRNA的抗肿瘤作用研究

目的研究短干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)的抗肿瘤作用.方法采用MTT法检测siR-NA的生长抑制作用,H&E染色法观察细胞形态变化,TUNEL标记法检测核DNA断裂,Western Blot法分析蛋白表达水平变化和流式细胞法检测细胞周期分布变化.结果siRNA-Bcl2,siRNA-MDM2,siRNA-CDK2和siRNA-HRas可以明显抑制人乳腺癌MCF-7等肿瘤细胞的生长;siRNA-MDM2和siRNA-Bcl2可以引起MCF-7细胞染色质凝集;siRNA-Bcl2,siRNA-MDM2,siRNA-CDK2和siRNA-HRas均可以明显降低靶基因的表达水平,同时诱导MCF-7细胞发生染色体DNA断裂;siRNA-MDM2还可以导致MCF-7细胞发生G1期阻滞.结论siRNA可以明显抑制肿瘤细胞的生长,降低靶基因的表达水平,并诱导肿瘤细胞凋亡和周期阻滞,提示siRNA可能发展成为一类高效特异的新型抗肿瘤药物.     

Bcl-2基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞株药物敏感性的影响

目的:探讨bcl-2基因反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的bcl-2蛋白的表达和药物敏感性的影响.方法:用人工合成bcl-2基因反义寡核苷酸预培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以免疫组化法检测细胞bcl-2蛋白的表达水平;以MTT法检测bcl-2反义寡核苷酸、阿霉素单独及联合应用对MCF-7细胞生长的抑制情况,比较bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞药物敏感性之间的相关性.结果:联合应用bcl-2反义寡核苷酸与阿霉素能够明显增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,细胞存活率明显下降.免疫组化结果显示MCF-7细胞bcl-2表达水平与细胞药物敏感性有相关性.结论:bcl-2反义寡核苷酸能够抑制MCF-7乳腺癌细胞bcl-2基因的表达,提高MCF-7细胞对阿霉素的敏感性.     

姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)PI单染检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期,可以诱导细胞凋亡,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2的表达减少.结论 姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡.其分子作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关.     

Survivin、xiap、apollon和livin反义寡核苷酸对人消化系肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族survivin、xiap、apollon和livin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对人消化系肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法人工合成survivin、xiap、apol-lon、livin的反义核酸和随机序列,经脂质体包裹后作用肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞48 h后,采用WST-8法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 IAPs ASO作用于肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞48 h后,与空白对照组(control)和随机寡核苷酸(random oligodeoxynucleotide,RODN)对照组相比,IAPs ASO能明显抑制肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡(P<0.01)。其中,在作用浓度为0.2μmol.L-1时,survivin ASO对HepG2、Lovo细胞的增殖抑制率最高,分别为84.2%、82.6%。xiap ASO对MGC-803细胞的增殖抑制率最高,为86.56%,并呈时间-剂量依赖效应。survivin ASO诱导Lovo细胞、MGC-803细胞凋亡作用最强,凋亡率为34.95%、27.6%,livin ASO诱导HepG2细胞凋亡作用最强,凋亡率为27.4%。结论针对凋亡抑制蛋白家族survivin、xiap、apollon、livin的反义核酸均能有效抑制消化系肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

采用SMART技术克隆HDAC抑制剂抗肿瘤效应核心作用靶点的研究

目的探讨通过自我监测、分析及报告技术（SMART技术）寻找抵抗组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂抗肿瘤的效应基因。方法曲古柳菌素（TSA）诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡30例,收集不同时段凋亡细胞提取信使核糖核酸（mRNA）,构建反义互补脱氧核糖核酸（cDNA）文库,筛选出阳性转染细胞克隆,提取Hirt DNA,转化感受态细菌测序,选择核心靶位基因,探讨作用机制。结果建立反义cDNA文库,Annexin V作用丁酸钠选择性诱导MCF-7不同时间段凋亡率与HEF比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论采用SMART技术克隆HDAC抑制剂抗肿瘤效应核心作用强。     

乳痛方提取物通过蛋白激酶B通路影响人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：研究乳痛方（RTP）提取物对人乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：实验分为空白对照组、阳性对照组（表柔比星）和RTP给药组,噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度方剂（0.5,1,2,4,8,16 mg·mL^-1）分别在24 h、48 h和72 h对MCF-7细胞增殖的抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率;免疫蛋白印记法（Western blot）检测Bcl-2、Bax、总蛋白激酶B（Akt）和p-Akt的表达。结果：与空白组相比,高浓度的RTP能明显抑制MCF-7细胞的生长,且具有时间和剂量的依赖性。RTP可诱导MCF-7细胞凋亡,细胞凋亡率随给药浓度的增加而增强。Western blot表明,RTP可明显上调Bax蛋白表达,而下调Bcl-2和p-Akt蛋白表达水平,具有明显统计学差异（P<0.05或P<0.01）,且具有浓度依赖性,但对总Akt表达却无明显影响。结论： RTP可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达,抑制Akt磷酸化从而阻断P13K/Akt信号通路,启动线粒体凋亡途径有关。     

PPAR-γ的激动剂吡咯列酮抑制肝癌细胞生长和诱导凋亡的实验研究

目的观察PPAR—γ的激动剂吡咯列酮对肝癌细胞的生长抑制作用和诱导凋亡作用。方法吡咯列酮作用于肝癌细胞株SMMC7721。MTT法检测肝癌细胞的生长抑制率：流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率：RT—PCR检测肝癌细胞内PPAR-γmRNA的表达。结果吡咯列酮对肝癌细胞有明显抑制作用和诱导凋亡作用：细胞凋亡率与细胞生长抑制率之间无显著相关性（r=0.639，P=0.361）;肝癌细胞SMMC7721表达PPAR-γmRNA，随吡咯列酮浓度的增加肝癌细胞内PPAR-γmRNA的表达呈下降趋势。结论PPAR—γ的激动剂吡咯列酮可抑制肝癌细胞的生长和诱导其凋亡；但是，细胞凋亡率与生长抑制率之间无显著相关性，提示尚有诱导细胞凋亡以外的途径参与吡咯列酮对肝癌细胞的生长抑制作用;吡咯列酮可下调肝癌细胞内PPAR-γmRNA的转录．具体机制有待研究。     

消瘤1号通过影响bax和bcl-2的表达诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡

目的：探讨中成药消瘤1号诱导MCF-7人乳腺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用细胞培养技术,用不同浓度的含药血清（含药物浓度为1、10、100、1 000μg/ml）处理MCF-7细胞,用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定碘化丙啶染色细胞细胞周期的变化;采用实时-PCR法检测bax mRNA和bcl-2 mRNA表达。结果：消瘤1号处理MCF-7细胞后,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢。流式细胞仪检测结果显示,消瘤1号使MCF-7细胞阻滞于S期,随着药物浓度的增加,细胞凋亡逐渐增加。消瘤1号还能够促进细胞中bax mRNA表达,减少bcl-2 mRNA表达,并呈浓度依赖性。结论：消瘤1号诱导MCF-7细胞凋亡,其机制涉及bax/bcl-2比值升高,引起线粒体释放细胞色素C。消瘤1号有可能开发为治疗乳腺癌的药物。     

Antisense oligonucleotide targeting p53 increased apoptosis of MCF-7 cells induced by ionizing radiation

AIM: To investigate the effect of antisense compounds (AS) targeting human p53 mRNA on radiosensitivity of MCF-7 cells. METHODS: Western blotting and RTPCR were used to analyze the protein content and mRNA level. Additionally, cell proliferation, cell cycle and cell apoptosis were all analyzed in irradiated or sham-irradiated cells. RESULTS: Among the five antisense compounds (AS), AS3 was identified to efficiently inhibit p53 mRNA level and protein content. Interestingly, AS3 transfer has little effect on cell proliferation in DU-145 cells (mutant p53) after ionizing radiation (IR). In contrast, a marked increase of cell apoptosis and growth inhibition were observed in MCF-7 cells (wild-type p53), suggesting that AS3 can increase radiosensitivity of MCF-7 cells. Additionally, it was also observed that the transfection of AS3 decreased the fraction of G1 phase cells, and increased the proportion of S phase cells compared to untreated cells 24 h after IR in MCF-7 cell lines. CONCLUSION: AS3 transfection increases MCF-7 cell apoptosis induced by 5 Gy-radiation, and this mechanism may be closely associated with abrogation of G1 phase arrest.     

Silencing livin gene by siRNA leads to apoptosis induction, cell cycle arrest, and proliferation inhibition in malignant melanoma LiBr cells

Aim： The aim of the present study was to investigate the effects of silencing the livin gene by small interfering RNA （siRNA） on the expression of livin and the effects on apoptosis, cell cycle, and proliferation in human malignant melanoma LiBr cells. Methods： Three chemically-synthetic siRNA duplexes targeting livin were transiently transfected into the LiBr cells, and the effects on livin expression were detected both at the mRNA level by real-time RT-PCR and at the protein level by Western blotting. Apoptosis was evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated digoxigenin-dUTP nick-end labeling assay, flow cytometric analysis, and the expression of procaspase-3 and activated caspase-3 analysis by Western blotting. Cell cycle was analyzed by flow cytometry. Cell proliferation was determined by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide. Results： One of the 3 designed siRNA could effectively knock down the livin expression both at the mRNA and protein levels in dose- and time-dependent manners; 100 nmol/L with maximum downregulation on mRNA at 48 h, and on the protein at 72 h after transfection. Silencing livin could significantly induce apoptosis, arrest cell cycle at the Go/G1 phase, and inhibit proliferation in LiBr cells. Meanwhile, caspase-3 was activated. Conclusion： The livin gene could serve as a potential molecular target for gene therapy by siRNA for malignant melanoma.     

人参皂苷Rg3对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察人参皂苷Rg3对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期分布以及凋亡比率,通过Transwell小室观察细胞侵袭力,RT-PCR法检测细胞中的MMP-9 mRNA的表达。结果 与对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖;G₀/G₁期及S期细胞比例减少,而G₂/M期细胞比例显著增加;同时细胞凋亡比率亦明显提升,而细胞侵袭指数降低,且呈现良好的剂量、时间依赖性。同时人参皂苷Rg3还能显著抑制细胞中MMP-9 mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3能抑制MCF-7细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能与其能降低MMP-9基因的表达有关。     

体外观察雷公藤内酯醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测不同条件下TP对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察TP对MCF-7细胞形态学影响;流式细胞仪检测MCF-7细胞的凋亡情况;Caspase检测试剂盒测定Caspase-3,9的变化。结果:TP以剂量及时间依赖性方式明显抑制MCF-7细胞的增殖;TP作用MCF-7细胞后,细胞出现明显的形态学改变(形态不规则、脱落,细胞碎片等)。流式细胞仪检测5μg/mL的TP明显诱导MCF-7细胞凋亡;Caspase-3,9表达水平明显升高,和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TP可能通过线粒体通路诱导MCF-7细胞凋亡而发挥其抑制作用。     

人参皂苷Rg_3对失巢凋亡耐受乳腺癌细胞MCF-7抑制作用

目的研究人参皂苷Rg3对失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7生长抑制作用。方法应用多聚2-羟乙基甲基丙烯酸酯(poly-hema)覆盖的细胞培养板,筛选出具有失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7,考察失巢凋亡耐受癌细胞的生长速率和侵袭力,并利用流式细胞仪检测人参皂苷Rg3对失巢凋亡耐受癌细胞MCF-7的周期分布和细胞凋亡。结果与阿霉素对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7的生长(P<0.01),并导致失巢凋亡耐受细胞MCF-7的G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3有效抑制失巢凋亡耐受的乳腺癌细胞MCF-7生长,其作用机制可能与人参皂苷Rg3使失巢凋亡耐受乳腺癌细胞MCF-7细胞周期停滞有关。     

槐米中槲皮素提纯、鉴定以及诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用

目的:研究从槐米中槲皮素(Quercetin,Que)提取、鉴定和对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制以及诱导凋亡作用.方法:采用碱溶解酸沉淀法提纯槐米中槲皮素,并进行红外光谱分析;采用体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,用不同浓度槲皮素处理;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率;采用细胞凋亡DNA Lad　der和FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞仪检测,槲皮素作用后MCF-7细胞凋亡情况.结果:不同浓度槲皮素对人乳腺癌MCF 7细胞有生长抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.05);10.0 mmol/L槲皮素作用MCF-7细胞2d,DNA电泳出现特征性的凋亡条带;10.0 mmol/L槲皮素处理MCF-7细胞1d、2d和3d,细胞凋亡率分别为(9.2±1.5)％、(30.0±11.8)％和(60.8±10.6)％.结论:用碱溶解酸沉淀法可从槐米中提纯槲皮素,提取的槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用.