囊虫病诊断用抗原核糖体P蛋白的克隆和表达

目的：克隆并表达了囊尾蚴相对分子量为13000D的核糖体P蛋白，期望利用此蛋白用做临床诊断试剂盒。方法：利用总RNA提取试剂盒得到囊尾蚴基因组总RNA，而后采用反转录PCR的方法，从囊尾蚴基因组中扩增得到366bp的DNA片段，将其连接于T载体上，测序正确后克隆到表达载体pUC18上，将pUC18-P重组质粒转入E.coliDH5a，用ITPG诱导表达出目的蛋白。结果：获得分子大小为13000D的蛋白。结论：经克隆和表达的该蛋白可被用作一种诊断性抗原。     

非综合征显性遗传性耳聋家系致病基因排除性定位研究

耳聋是人类最常见的遗传病之一。20世纪80年代以来，对遗传性聋的基因定位和基因克隆的研究发展飞速。目前国际上已定位了143个非综合征型遗传性聋的基因座，并成功克隆了24个显性遗传性耳聋相关基因。在已登录的常染色体显性遗传聋57个基因座（DFNA1～DFNA57）中，有29个位点（DFNA1～DFNA18，DFNA20，DFNA25～DFNA28,DFNA30，DFNA32，DFNA34，DFNA36～DFNA38）被定位于染色体的狭窄区段，提供用于筛查的微卫星标记物。     

新型低基础表达Tet-on基因表达系统的构建与鉴定

目的:构建一种新型的具有更低基础表达的Tet-on调控系统,以用于毒性蛋白及 RNA病毒的真核细胞调控合成.方法:对目前常用的Tet-on系统中的四环素调控蛋白(rtTA、tTS)的表达途径进行改进,使得在非诱导条件下调控蛋白的基础诱导活性进一步降低.结果:相比原有的Tet-on系统,新构建的Tet-on系统非诱导状态下的基础表达值下降了一半以上.结论:成功构建基础表达值更低的Tet-on调控系统,为真核调控表达毒性蛋白或合成 RNA病毒打下了基础.     

TAFI 505A》G基因多态性与VTE易感性之间的相关性研究

目的:探讨TAFI 505A>G基因多态性与VTE易感性之间的相关性.方法:应用扩增阻滞突变系统PCR技术(Amplification refractory mutation system-PCR,ARMS-PCR)检测了349例VTE患者和317例正常对照者的TAFI 505A>G基因分型.结果:TAFI 505A>G基因的3种基因型(GG、GA、AA)频率在VTE患者和正常对照者中分别是48.42%、45.85%、5.73%和56.78%、36.59%、6.62%;等位基因G、A频率在VTE患者和正常对照者中分别是61.35%、38.65%和75.08%、24.92%.VTE组中基因型的分布与对照组中基因型的分布之间的差异存在统计学意义,P值小于0.05.结论:TAFI 505A>G位点的基因多态性与VTE发病有一定联系,携带杂合子基因型TAFI505AG的个体VTE的发病风险增加.     

用Red系统敲除大肠杆菌O157:H7的ecs4553以及ecs4563基因

目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157:H7的突变体.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5'端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除.结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157:H7突变菌株.结论:为进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础.     

中国汉族人群遗传性聋基因座位STR位点的遗传多态性研究

目的 研究中国汉族人群10个遗传性聋基因座位的短串连重复序列(STR)的遗传多态性。方法 应用PCR方法对10个位点进行扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，记录基因型。采用PPAP软件计算正常人各STR位点等位片段频率、基因型频率、预期基因型频率、多态信息量(PIC)和Hardy-Weinberg平衡吻合性检验。结果 中国汉族人群D6S287、D8S1132、D13S1275、D15S130、D1S2726、D4S3038、D2S2380、D22S282、D14S1042、D7S529各位点分别检出10个、9个、8个、7个、7个、7个、6个、6个、6个及5个等位片段，多态性分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。各位点PIC值分别为0．879、0．854、0．864、0．821、0．686、0．794、0．764、0．732、0．773、0．712；杂合度均高于0．7。结论 中国汉族人群10个位点STR均具有较高的杂合度和多态信息量，是较理想的遗传标记。     

海风藤的化学成分研究(Ⅰ)

海风藤Piper kadsura(Choisy)Ohwi主产干福建、浙江、广东等地，主治风寒湿痹、肢节疼痛、筋脉拘挛、脘腹冷痛、水肿等。已经报道从海风藤中分离到多种木脂素类化合物，为了寻找其镇痛活性成分，对该植物进行了系统分离，利用多种柱色谱和制备HPLC，从中分得11个单体化合物，本文报道其中5个化合物的分离、结构鉴定情况。     

EGFR基因突变及HER2/HER3蛋白表达水平与吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效的关系

背景与目的:吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效不一,如何选择对吉非替尼敏感的患者,提高药物的疗效是临床中的难点。本研究探讨了中国人群中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的突变及HER2/HER3蛋白表达与吉非替尼治疗局部晚期或转移性NSCLC疗效的关系。方法:2002年5月至2005年2月,符合入组条件的106例患者每日口服250mg吉非替尼一次,直至疾病进展或出现不可耐受的毒副反应。收集吉非替尼治疗前的肿瘤组织。提取基因组DNA后,采用nest PCR技术扩增EGFR基因的18～24外显子,并从正反两个方向进行DNA测序和分析。同时采用免疫组化法检测84例肿瘤组织中的HER2/HER3蛋白的表达。结果:106例肿瘤标本中32例(30.2%)发生了突变。HER2高表达患者的有效率显著高于低表达的患者(36.8%vs.17.4%,P=0.044)。HER2/HER3的表达水平与疾病进展时间(TTP)及总生存期(OS)无关,但HER2/HER3高表达的患者生存期较低表达组略长(9.1个月vs.6.1个月,P=0.725;9.0个月vs.6.1个...     

抑瘤素M研究新进展

仰瘤素Ｍ（ＯｎｃｏｓｔａｔｉｎＭ，ＯＳＭ）是继白细胞介素６（ＩＬ－６）、白血病抑制因子（ｌｅｕｋｅｍｉａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ，ＬＩＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等抗瘤细胞因子之后发现的又一重要生物反应调节剂。体外实验证明：ＯＳＭ可以通过多种不同途径产生抑瘤或化瘤活性。同时根据ＯＳＭ与其它细胞调节因子如ＬＩＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＣＮＴＦ及ＩＬ－６间相互区别而又相互联系的生物学特点。可以认为：ＧＳＭ在机体免疫应答网络、细胞抗感染免疫及多种细胞因子间的功能协调等方面发挥着广泛而又重要的作用。     

ET重组:Escherichia coli中最新分子克隆方法

功能基因组研究的飞速发展推动了在E .coli中运用体内同源重组的方法进行DNA操作的技术革新步伐 ,ET体内重组方法具有应用范围广、操作灵活简便、重组效率高等优点 ,它可进行常规分子生物学无法实现的操作。这种方法不依赖于合适的限制酶切位点 ,能够在靶分子的任意位置上进行基因的插入、缺失和替换 ;能够直接进行亚克隆并且还可以从细菌人工染色体和基因组DNA片段中克隆所需DNA。本文所阐述的方法可应用于包括长DNA在内的任意大小DNA的修饰 ,并概括描述了基因调控研究的最新策略