基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

建立在基因组中整合有ｐＭＴＲ１质粒的Ｃ５７ＢＬ／６转基因小鼠家系,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法：利用分子克隆技术构建ｐＭＴＲ１质粒。将其线性性化后,用显微注射注射入５７２只Ｃ５７ＢＬ／６小鼠受精卵,再将它们分别移入４５只受体母鼠的输卵管中,共产仔４４只,存活３５只,采用ＰＣＲ,ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以４只经基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂     

突变靶基因xylE转基因小鼠

本研究以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒为载体，选用恶臭假单孢杆菌ＴＯＬ质粒上的ｘｙｌＥ基因作为突变靶基因组构建的重组构件，经微注射导入ＩＣＲ小鼠５４９枚受精卵雄原核，将存活的３５２枚卵移入２４只假孕鼠输卵管内，７只妊娠，共产仔４１只，其中７只死胎，出生后死亡４只，３０只存活。注射卵存活率为６４％（３５２／５４９），出生率为１１．６％（４１／３５２）。存活鼠经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，整合率为５７％（１７／３０）。在整合阳性鼠中选择了杂交信号较强的２只当代公鼠，通过回收载体和转化试验，结果表明整合基因完整，具有转化的功能，由此，建立了突变靶基因ｘｙｌＥ转基因小鼠模型。     

携带内皮型一氧化氮合酶基因重组腺病毒载体的构建

目的：构建带有内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因的重组腺病毒载体。方法：将ｅＮＯＳ　ｃＤＮＡ克隆于腺病毒穿梭质粒ｐＣＡ１４，得到重组质粒ｐＣＡ１４－ＣＭＶ－ｅＮＯＳ。采用磷酸钙ＤＮＡ沉淀法将质粒ｐＣＡ１４－ＣＭＶ－ｅＮＯＳ与腺病毒拯救质粒ｐＢＨＧ１０共转染２９３细胞，通过同源重组，生成带有ｅＮＯＳ基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶｅＮＯＳ）。ｅＮＯＳｃＤＮＡ重组进入腺病毒Ｅ１区并受ＣＭＶ启动子控制。结果：经形态学、病毒ＤＮＡ酶切、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法的鉴定，证实了载体构建的正确性。结论：带有ｅＮＯＳ基因的重组腺病毒载体的成功构建，为心血管等疾病的基因治疗打下了基础。     

兔自体移植静脉基因转移模型的建立

兔颈动脉－颈表脉帝路手术后，将阳离子指质体ＤＯＳＰＥＲ介导的ｐ５３腺相关病毒增强型质粒表达载体，经腔内加压灌注转染移植静脉。ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化检测证明，外源性ｐ５３基因在移植血管中表达出相应的ｍＲＮＡ及ｐ５３蛋白。结果提示：腔内加压灌注是移植静脉基因转移的有效方法之一。     

部分肿瘤抑制基因在新建骨肉瘤细胞系SOSP-9607中的表达及意义

目的：探讨骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７的发生发展与部分肿瘤抑制基因及早期生长反应基因表达的关系。方法：采用原位杂交及免疫组织化学ＳＡＢＣ染色方法检测肿瘤抑制基因p５３,ｐ１６,Ｒｂ及早期生长反应基因ｅｇｒ－１在ＳＯＳＰ－９６０７细胞中的表达;用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测肿瘤抑制基因ＤＣＣ在ＳＯＳＰ－９６０７细胞中是否缺失。结果：ＳＯＳＰ－９６０７细胞中ｐ１６,Ｒｂ基因表达未见异常改变,未检测到突变型Ｐ     

4例性畸形病例的遗传学分析

在细胞遗传学核型分析的基础上，利用ＳＲＹ探针对４例性畸形病例进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，同时运用ＳＲＹ编码区的特异性引物对其基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增检测，结果显示：１例４６，ＸＹ女性（Ｓｗｙｅｒ综合征）和１例４５，ＸＯ／４６，ＸＹ女性（Ｔｕｒｎｅｒ综合征）未检出ＳＲＹ特异性杂交带及ＰＣＲ扩增带；１例４６，ＸＸ男性伴性腺发育不良症检测出与正常男性相同的杂交带及ＰＣＲ扩增带；另１例核型为４６，ＸＸ／４７，ＸＸＹ的真两性畸形患者有ＰＣＲ扩增带而ＳＲＹ特异性杂交带未能检出。根据上述结果，本文对４例患者的发病机理进行了分析和讨论，同时对两种检测手段进行了比较。     

PCR－SSCP法检测胃癌p53基因异常

ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测胃癌ｐ５３基因异常李滨，童坦君（北京医科大学生物化学及分子生物学系１０００８３）胃癌是一种常见的发病广泛的人类恶性肿瘤，抗癌基因ｐ５３的夫活在胃癌的发生过程有重要作用。本文首先利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交法检测１１例胃癌标本及１...     

新疆皮肤利什曼病病原体SSU rDNA多变区PCR扩增及克隆

目的 鉴定新疆皮肤利什曼病病原体，方法 用利什曼原虫属特异引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，从皮肤利什曼病患者皮肤病变组织，婴儿利什曼原虫和热带利什曼原虫基因组ＤＮＡ中扩增出一特异ＳＳＵｒＤＮＡ多变区片段，将其克隆到ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙＶｅｃｔｏｒ上，并筛选和鉴定出重组质粒。结果 以ＥｃｏＲＩ酶切，ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实获得的重组质粒包含ＳＳＵｒＤＮＡ多变区片段。结论 皮肤利什曼病病原体，婴儿     

联合应用PCR/SSCP和PCR/SSO提高HLA基因分型的精确性

ＰＣＲ／ＳＳＯ分析７０例无血缘关系湖南汉族正常人ＨＬＡＤＰＡ１位点等位基因多态性，并对全部样本ＨＬＡＤＰＡ１基因第二外显子作银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析。发现ＰＣＲ／ＳＳＯ误将一例ＤＰＡ１＊０１／０２杂合子定为单一的ＤＰＡ１＊０１基因；经ＰＣＲ／ＳＳＣＰ完善获得湖南汉族正常人ＤＰＡ１＊０１，０２基因频率值分别为０．２６３２和０．７３２７；ＰＣＲ／ＳＳＣＰ法显示湖南汉族人ＤＰＡ１＊０２基因由单一亚型构成。结果表明，ＰＣＲ／ＳＳＣＰ可用于进一步分析ＰＣＲ／ＳＳＯ分型中杂交信号不典型或难以准确定型的样本，用于分析ＳＳＯ序列以外的ＨＬＡＤＮＡ多态性，完善分型精确性     

PSP57不是增生和癌变前列腺组织PSP94 mRNA可变剪切特有的产物

目的：比较人正常,增生和癌变前列腺组织中ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｍＲＮＡ的表达情况。方法：提取事故死亡的正常成年人前列腺组织及手术得到的增生和前列腺癌组织总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ,其产物分别以ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７共有的外显子及ＰＳＰ９４外显子Ⅲ作探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析;ＲＴ－ＰＣＲ产物经克隆后进行序列测定。结果：三种前列腺组织中均有ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｍＲＮＡ的表达;人     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。     

断指再植的护理体会

随着医疗水平的提高,显微手外科技术在各基层医院已得到广泛开展,所收治的此类患者在逐年增加.随机统计了近两年我院20份34指的病例,通过观察认为手术的成功与否不但取决于损伤的局部条件、术中的操作和术后的治疗,同时与术前、术后的护理也密不可分.对离断指及伤口的妥善处理,积极的术前准备和术后的精心护理,特别是术后对血运的密切观察,同时通过术前术后的健康教育使患者对该疾病的知识有了一定的掌握,认识了康复训练的重要性从而使功能达到最大限度的恢复.