大鼠microRNA-145慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的构建针对Rno-miR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用。方法人工合成含有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况;实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组);采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22αmRNA表达水平的影响。结果成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL。倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72 h时感染率最高。实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低;miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加。结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC。感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化。     

长链非编码核糖核酸H19通过抑制自噬促进人主动脉平滑肌细胞表型转化

目的:探讨长链非编码核糖核酸H19(IncRNA)对人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMCs)自噬及表型转化的调控作用。方法:药物诱导HA-VSMCs发生表型转化,检测细胞内成骨相关蛋白RUNX2及平滑肌标志物α-SMA的表达水平,通过茜素红s染色及碱性磷酸酶ALP含量测定实验检测钙化水平,通过检测泛素化连接蛋白LC-3、P62观察自噬水平变化。结果:与正常组相比,钙化诱导HA-VSMCs组lncRNA H19表达量明显升高,成骨相关蛋白RUNX2表达水平增加,平滑肌标志物α-SMA表达下调,自噬被抑制。敲低lncRNA H19后,平滑肌细胞表型转化减缓,钙化程度减弱,自噬水平有所回升。结论:lncRNA H19可促进HA-VSMCs的表型转化及动脉钙化的发生,其机制可能与抑制HA-VSMCs的保护性自噬有关。     

转录因子SP1调控血管平滑肌细胞表型转化在主动脉夹层发病中的作用

目的:探讨转录因子SP1在主动脉夹层组织中的表达情况及与主动脉夹层血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的关系。方法:收集人主动脉夹层血管壁组织(n=10)及正常主动脉壁组织(n=4),分别采用RT-PCR和Western blot检测主动脉壁组织中SP1和收缩型VSMC表型标志物SM22α的mRNA和蛋白表达水平;体外培养正常人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC),以转染SP1过表达腺病毒(Ad-SP1)的HA-VSMC为Ad-SP1组,以转染仅表达荧光蛋白腺病毒(Ad-GFP)的HA-VSMC为对照组,分别采用RT-PCR和Western blot检测转染后HA-VSMC中SM22αmRNA和蛋白表达水平。结果:与正常主动脉壁组织相比,人主动脉夹层血管壁组织中SP1 mRNA(3.81±2.84对0.91±0.67,P0.05)和蛋白(2.09±0.32对0.90±0.09,P0.05)表达水平均明显升高,SM22αmRNA(0.39±0.20对1.01±0.51,P0.05)和蛋白(0.75±0.10对1.01±0.09,P0.05)表达水平均明显下降;腺病毒转染HA-VSMC后,与对照组相比,Ad-SP1组中SM22αmRNA(0.36±0.03对0.95±0.11,P0.05)和蛋白(0.84±0.11对1.06±0.06,P0.05)表达水平均明显下降。结论:转录因子SP1在主动脉夹层组织中表达水平升高,与VSMC表型转化密切相关,参与主动脉夹层的发病过程。     

外源性硫化氢对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制

目的探寻外源性硫化氢对人脐静脉平滑肌细胞(HUSMC)钙化的影响及机制。方法在成功复制HUSMC钙化模型基础上,给予硫氢化钠(Na HS)进行培养,实验分为6组(n=6):对照组、钙化组、单纯Na HS组(8.0×10-6mol/L Na HS)、钙化+Na HS高剂量组(4.0×10-5mol/L Na HS)、钙化+Na HS中剂量组(8.0×10-6mol/L Na HS)、钙化+Na HS低剂量组(1.6×10-6mol/L Na HS)。对各组HUSMC进行Von Kossa染色、显微图像分析,并检测各组碱性磷酸酶活性、钙离子含量,荧光定量PCR法检测细胞中骨桥蛋白mRNA的表达,放射免疫法检测培养液中骨桥蛋白含量。结果硫化氢可明显减少HUSMC钙结节的聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻,差异有统计学意义(P0.05);钙化+Na HS高剂量组、钙化+Na HS中剂量组、钙化+Na HS低剂量组钙化细胞百分比、细胞钙含量和碱性磷酸酶活性较钙化组明显降低,差异有统计学意义(P0.05),培养液中骨桥蛋白含量及其细胞内骨桥蛋白mRNA表达均较钙化组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论硫化氢可以减轻HUSMC钙化的程度,其机制可能是通过下调细胞内骨桥蛋白mRNA的表达,进而导致骨桥蛋白生成减少而实现的。     

糖基化终末产物促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 观察糖基化终末产物对体外培养的血管平滑肌细胞钙化的影响.方法 在含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养液中加入不同浓度(0、50、100、200 mg/L和400 mg/L)的糖基化终末产物与大鼠血管平滑肌细胞孵育不同时间.采用磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶活性,甲-酚酞络合酮方法测定钙含量,实时定量逆转录聚合酶链反应检测成骨细胞特异性核心结合因子、碱性磷酸酶以及骨桥蛋白基因表达,蛋白免疫印迹检测成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白蛋白表达.结果 与对照组相比,糖基化终末产物随作用时间延长和浓度增加,细胞钙含量增加(P<0.05),升高碱性磷酸酶活性和基因表达(P<0.05),促进成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白基因及蛋白表达(P<0.01).结论 糖基化终末产物可促进体外培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化.     

维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系

目的 探讨维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系.方法 选择慢性肾脏疾病5期维持性血液透析患者17例(透析时间在1年以上),均为自体桡动脉-头静脉内瘘作为透析通路的患者,因自体动静脉内瘘失功拟重建血管通路.在动静脉内瘘重建过程中,取失功动静脉内瘘动脉段作为实验组标本,同龄人群(取材于尸体肾供者)腹主动脉作为对照组.以von Kossa染色法对血管钙化进行定性检测,甲酚酞络合酮化学法对血管钙化进行定量检测,磷酸苯二钠法测定血管组织碱性磷酸酶活性.Western blotting检测血管组织p53蛋白水平,并对血管钙含量和碱性磷酸酶活性与p53的表达进行相关性分析.结果 维持性血液透析患者桡动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为0.81)显著低于同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为1.72),而血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性分别较同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞增加69%和105%(P均＜0.01).相关性分析发现,p53的表达与血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性均成显著负相关(r=-0.77和r=-0.86,P均＜0.01).结论 在5期慢性肾脏疾病维持性血液透析患者中血管钙化广泛存在,血管钙化伴随着血管平滑肌细胞p53蛋白表达的显著下降,这一现象提示慢性肾脏疾病患者血管平滑肌细胞p53表达的抑制可能参与了血管钙化的发生机制.     

钙调神经磷酸酶对钙化细胞Ⅰ型三磷酸肌醇受体表达的影响

目的探讨大鼠血管平滑肌细胞钙化过程中钙调神经磷酸酶对Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达的影响。方法大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞经传代培养后随机分为对照组、钙化组和环孢素A组,采用磷酸二氢钠诱导大鼠动脉血管平滑肌细胞钙化。应用免疫印迹法及实时荧光定量RT-PCR法测定钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体的表达变化,同时测定Ca2+浓度及碱性磷酸酶、钙调神经磷酸酶活性。结果与对照组比较,钙化组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.01);与钙化组比较,环孢素A组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01)。钙化组Ca2+浓度、钙调神经磷酸酶活性、碱性磷酸酶活性较对照组显著增高(P<0.01);环孢素A组碱性磷酸酶活性、Ca2+浓度较钙化组显著增加(P<0.05或P<0.01),钙调神经磷酸酶活性较钙化组显著降低(P<0.01)。结论钙调神经磷酸酶能够增强钙化细胞中Ⅰ型三磷酸肌醇受体mRNA和蛋白的表达。     

内皮祖细胞对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的 观察内皮祖细胞对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化的影响.方法 采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,EGM-2细胞培养基进行培养,诱导单个核细胞贴壁向内皮祖细胞分化.采用荧光显微镜双染色、流式细胞术鉴定内皮祖细胞,间接免疫荧光检测血管平滑肌细胞标志物平滑肌α-肌动蛋白、钙调节蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹检测早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞收缩表型标志基因平滑肌α-肌动蛋白以及合成表型标志基因骨桥蛋白表达变化的影响.结果 与对照组比较,血管紧张素Ⅱ(10-6mmol/L)诱导血管平滑肌细胞增殖48 h后,平滑肌α-肌动蛋白mRNA和蛋白表达明显减少,而骨桥蛋白mRNA和蛋白表达明显增加,提示血管平滑肌细胞从收缩表型向合成表型转化;与血管紧张素Ⅱ组比较,早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液处理后均不同程度抑制血管紧张素Ⅱ诱导的平滑肌α-肌动蛋白表达减少和骨桥蛋白表达增加,其中以早期内皮祖细胞条件培养液的抑制效果最明显.结论 内皮祖细胞能够抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞从收缩表型向合成表型转化.     

AMPKα2在主动脉夹层形成中的作用及机制

目的:研究AMPKα2蛋白在主动脉夹层(AD)形成中的作用。方法:通过临床标本收集和体外实验,检测主动脉组织磷酸化AMPKα(Thr172)表达水平、血管平滑肌细胞表型转化、基质金属蛋白酶及炎症通路激活情况。结果:通过临床标本检测,发现AD患者主动脉组织磷酸化AMPKα(Thr172)表达下调,血管平滑肌细胞发生表型转化,基质金属蛋白酶表达上调及炎症通路激活。体外实验采用AMPKα2质粒和相应突变失活型DN-AMPKα2(T172A)质粒转染原代大鼠主动脉血管平滑肌细胞,予以AngⅡ(10μmol/L)刺激24 h,发现过表达AMPKα2可缓解AngⅡ诱导的磷酸化AMPKα(Thr172)下调,减轻血管平滑肌细胞表型转化、基质金属蛋白酶表达及炎症通路激活。而过表达失活型DN-AMPKα2(T172A)加重上述病理改变。结论:AMPKα2促进磷酸化AMPKα(Thr172)表达,缓解主动脉血管平滑肌细胞表型转化、基质金属蛋白酶表达上调及炎症通路激活。     

高钙血症加重大鼠血管钙化

目的探讨高钙血症对血管钙化的影响。方法用维生素D3加尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,von Kossa染色、钙含量测定、45Ca2 聚集及碱性磷酸酶活性测定判断钙化程度,用竞争性半定量逆转录聚合酶链反应方法测定血管钙化标志分子骨桥蛋白和β-actin mRNA水平。结果钙化组大鼠血压升高,收缩压较对照组高28%(P<0.05);血管von Kossa染色见血管中膜弹性纤维间可见大量棕黑色颗粒沉积。主动脉钙含量、45Ca2 沉积及碱性磷酸酶活性分别较对照高3.7倍、1.3倍和1.4倍(P<0.01)。钙化血管组织骨桥蛋白mRNA表达上调46%(P<0.01)。与对照组比较,高钙摄入增加血钙而降低血磷水平(2.49±0.14比2.20±0.12;1.25±0.05比1.40±0.07,P<0.01),单纯高钙摄入组主动脉钙含量、45Ca2 沉积及碱性磷酸酶活性与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。而诱导钙化后给予高钙饮食可增加血管钙化程度,与单纯钙化组比较,主动脉钙含量、45Ca2 沉积及碱性磷酸酶活性分别升高了12%(P>0.05)、38%(P<0.01)和15%(P<0.01);骨桥蛋白表达上调34%(P<0.01)。结论高钙摄入可以加重大鼠血管钙化。     

体外培养高糖、高脂喂养大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的研究

目的 检测高糖、高脂喂养Goto-Kakizaki（GK）糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞（SMCs）的血管钙化指标,探讨糖尿病血管钙化的相关机制.方法 高糖、高脂喂养GK及Wistar大鼠2周,同时分离培养两组大鼠的主动脉SMCs,Wistar大鼠SMCs作为对照.通过细胞计数法观察细胞生长状况,以甲基百里香酚蓝比色法测定两组大鼠细胞层及培养上清中钙的含量,实时定量PCR检测两组细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α-1（Cbfα-1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的基因表达.结果 与Wistar大鼠SMCs相比,GK大鼠SMCs生长速度明显缓慢（F =363.392,P＜0.05）;细胞层钙含量[（0.56±0.22） vs.（0.39±0.09）,t=2.47,P＜0.05]明显增加,培养上清中钙含量[（0.82±0.22）vs.（1.20±0.17）,t=-22.573,P＜0.05]明显减少.GK大鼠SMCs中ALP （t=12.963,P＜0.05）、OPN（t=8.305,P＜0.05）及Cbfα-1（t=10.109,P＜0.05）的基因表达增加,同时α-SMA（t=-8.219,P＜ 0.05）的基因表达减少.结论 高糖、高脂喂养的GK糖尿病大鼠的主动脉平滑肌细胞易发生钙化.     

PFKFB3抑制剂减轻高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 探究果糖-2, 6-二磷酸酶3(6-bisphosphatase 3, PFKFB3）抑制剂3-PO对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）钙化的作用及其潜在机制。 方法 将原代培养的VSMC随机分为:对照(Con)组、高磷诱导（β-GP）组、高磷诱导+ 3-PO（β-GP +3-PO）组、对照+乳酸钠（Con +Lactate）组、对照+乳酸钠+ 3-PO（Con +Lactate+3-PO）组。实验前后用微板法检测细胞内钙和碱性磷酸酶（ALP）含量;茜素红染色检测VSMC钙化程度;CCK 8试剂盒检测细胞活力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测表型转化相关蛋白(RUNX2, BMP-2, SM22a)及糖酵解相关蛋白(PFKFB3, HKⅡ, GLUT1与GLUT4)表达水平,比色法检测乳酸含量及乳酸脱氢酶（LDH）活力。 结果 与Con组比较,β-GP组VSMC钙化程度及成骨蛋白表达显著增加（P<0.01）,细胞活力显著降低（P<0.01）,而给予3-PO可显著逆转β-GP组的VSMC表型转化蛋白的表达变化（P<0.05）,并使细胞活力增加（P<0.01）。进一步的研究证实,β-GP组中PFKFB3表达水平,乳酸含量及LDH活力显著增加（P<0.01）,而在β-GP +3-PO组中显著下调（P<0.01）,其余糖酵解蛋白表达水平未明显改变。另外,乳酸钠也可引起VSMC钙化程度及表型转化蛋白表达的增加（P<0.01）,给予3-PO可逆转乳酸钠引起的VSMC钙化和表型转化（P<0.05）。 结论 PFKFB3抑制剂3-PO可能通过降低PFKFB3表达抑制糖酵解水平,从而抑制了高磷诱导的VSMC的钙化,研究结果为临床治疗血管钙化提供了潜在的药物靶点。     

A new rat model of diabetic macrovascular complication

OBJECTIVES: Age-related medial calcification (elastocalcinosis) of large arteries is accelerated in diabetes and appears mainly in distal arteries. The aim was to devise a rat model of elastocalcinosis in association with diabetes to examine the hypothesis that diabetes accelerates vascular calcification experimentally. METHODS: Male Wistar rats received a high fat diet during 2 months followed by a low dose of streptozotocin to induce diabetes (D). Elastocalcinosis was facilitated by 3 weeks of treatment with warfarin and vitamin K (WVK). We started WVK treatment 1 week (D4WVK) and 4 weeks (D7WVK) after the injection of streptozotocin and in age-matched healthy rats. Measurements of hemodynamic and metabolic parameters, aortic and femoral calcium content, and immunohistochemistry for alkaline phosphatase, osteopontin, tumor necrosis factor (TNF)-alpha, and transforming growth factor (TGF)-TGF-beta were performed. RESULTS: Three weeks of WVK treatment alone did not increase the calcium content in the aorta and femoral arteries. However, in the D7WVK group, femoral calcification, but not aortic calcium content, increased significantly as compared to the WVK group. This response was not observed in the D4WVK group. In femoral arteries, strong immunostaining for alkaline phosphatase and osteopontin was observed in the D7WVK group. TNF-alpha and TGF-beta expressions were mainly localized in the adventitia of arteries from diabetic rats. CONCLUSION: We have established a model of accelerated elastocalcinosis in diabetes related to its duration and localized in distal arteries. The modification of local protein expression is also in accordance with clinical data, suggesting that this model could be useful to investigate mechanisms related to this important clinical macrovascular complication of diabetes.     

Vascular calcification in end stage renal disease

Vascular calcification is thought to play a crucial role in the excessive cardiovascular mortality and morbidity in patients with end-stage renal disease (ESRD). Recent evidence suggests that uremic vascular calcification is an active cell-mediated process resembling osteogenesis in bone, rather than passive precipitation of calcium and phosphorus in the setting of deranged mineral metabolism. To date, several bone-associated proteins (osteopontin, bone sialoprotein, alkaline phosphatase, type I collagen) have been demonstrated in histological sections of vessels obtained from patients with ESRD or calcific uremic arteriolopathy. In in vitro experiments, addition of uremic serum upregulates osteopontin expression by cultured vascular smooth muscle cells. We are only beginning to understand the process by which vascular smooth muscle cells transform into osteoblast-like cells, although phosphorus may play a key role. Additional factors mediating or modulating development of vascular calcification in ESRD remain to be identified. Further understanding of the pathophysiology of uremic vascular calcification is needed to design effective therapeutic strategies to intervene with this devastating condition in ESRD population.     

睾酮对维生素D3和尼古丁诱导的主动脉血管钙化的影响

目的建立SD大鼠血管钙化模型,并观察睾酮在主动脉血管钙化中的作用。方法将10周龄SD雄性大鼠分为:对照组、钙化组、钙化+低剂量睾酮组和钙化+高剂量睾酮组,每组8只。除对照组外,其余三组采用维生素D3(300 k U/kg一次肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型;低剂量睾酮组注射1 mg/kg外源性睾酮(隔日注射1次),高剂量睾酮组注射2 mg/kg睾酮(隔日注射1次),持续8周后处死。采用ELISA法测定大鼠血清睾酮和骨形态发生蛋白4(BMP-4)含量,采用试剂盒检测血管组织钙离子及碱性磷酸酶(ALP)含量,蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测主动脉血管组织BMP-4、骨桥蛋白(OPN)的蛋白表达水平,Von Kossa染色法观察血管钙化情况。结果 (1)成功制备了大鼠血管钙化模型:Von Kossa染色可见钙化组大鼠血管中膜大量黑色颗粒样钙盐沉积,而对照组血管结构完好,未见黑色钙盐沉积物。(2)睾酮对血管钙化的影响:睾酮组钙含量、ALP、BMP-4、OPN水平显著低于钙化组(P0.01),且高剂量睾酮组低于低剂量睾酮组,对照组水平最低; Von Kossa染色可见钙化组血管中膜出现大量黑色颗粒样钙盐沉积,而低剂量睾酮组和高剂量睾酮组均见少量钙盐沉积,对照组无钙盐沉积。结论外源性睾酮能一定程度上减轻维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化。     

内质网应激PERK途径在高糖诱导血管平滑肌细胞向成骨样细胞转化中的作用

目的：研究高糖刺激SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）向成骨样细胞转分化中内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）途径的作用。方法原代培养VSMCs,分为正常对照组（5mmol/L D-葡萄糖）,甘露醇组（5mmol/L D-葡萄糖＋25mmol/L甘露醇）,高糖组（30mmol/L D-葡萄糖）,高糖＋PERK-小干扰RNA（siRNA）转染组（30mmol/L D-葡萄糖＋PERK-siRNA转染）,高糖＋RNA干扰阴性对照组（30mmol/L D-葡萄糖＋乱序RNA转染）。分别作用48和72h。逆转录-聚合酶链反应及Western blot分别从信使RNA（mRNA）和蛋白质水平检测不同时间点内质网应激相关分子GRP78、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4的改变,以及成骨样细胞标志性分子核心转录因子（Cbfα-1）、骨钙素以及平滑肌细胞标志性分子α-SMA的改变情况。应用碱性磷酸酶（ALP）活性检测试剂盒检测ALP的活性。结果与正常对照组和甘露醇组比较,在mRNA水平,高糖组和高糖＋RNA干扰阴性对照组PERK和eIF2α表达升高（P＜0.05）,PERK-siRNA转染后其表达水平均降低（P＜0.05）,在蛋白质水平,PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α表达升高（P＜0.05）,PERK-siRNA干预后其表达均降低（P＜0.05）。高糖刺激VSMCs后ALP活性升高（P＜0.05）,PERK-siRNA转染后其表达均降低（P＜0.05）。结论内质网应激PERK途径在高糖诱导VSMCs由收缩表型向成骨样细胞表型转化中发挥作用,抑制PERK途径可以部分阻止这一转化过程。     

金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨金钗石斛多糖(DNP)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg/kg),扶正化瘀组(0.415 g/kg),DNP低、中、高剂量组(5、10、20 g/kg),采用50%四氯化碳腹腔注射和30%乙醇灌胃诱导大鼠HF模型,造模8 w后,给予相应药物(10 ml/kg)进行灌胃,每日1次,给药4 w,正常组、模型组灌胃生理盐水。苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察HF程度;免疫组化法检测肝组织TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果与正常组比较,模型组明显纤维化(P<0.01),TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显升高(P<0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达亦明显升高(P<0.01);与模型组比较,DNP各组肝纤维化程度均有所减轻(P<0.01),DNP降低TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达(P<0.01),DNP降低Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达(P<0.01)。结论DNP有抗纤维化作用,其机制可能与下调TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达,降低Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达有关。     

高迁移率族蛋白B1和α平滑肌肌动蛋白在支气管肺发育不良中的表达及意义

目的检测高迁移率族群蛋白B1（HMGB1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在中浓度高氧（60%O2）暴露新生小鼠肺组织损伤模型肺中的表达水平,探讨HMGB1在支气管肺发育不良（BPD）发病机制中的作用。方法新生足月C57BL/6小鼠随机分为氧处理组和空白对照组,制备中浓度高氧致新生鼠BPD模型,应用HE染色、放射性肺泡计数、免疫荧光和实时荧光定量-PCR技术观察生后第3、7、14天肺组织病理改变,HMGB1和α-SMA的蛋白及mRNA表达水平。结果氧处理组随时间推移,出现肺泡上皮肿胀,肺泡壁增厚,间质水肿,炎症细胞浸润,胶原样物质产生,较空白对照组明显发育迟滞。氧处理组HMGB1蛋白和mRNA在第7、14天时表达均强于相应空白对照组（P〈0.05）。氧处理组α-SMA蛋白和mRNA在第3、7、14天表达均强于相应空白对照组（P〈0.05）。HMGB1与α-SMA表达呈线性关系（P〈0.05）。结论在600 ml/L氧暴露所致BPD中,HMGB1和α-SMA表达增加。BPD的病理过程可能与HMGB1表达增加及α-SMA活化有关。