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目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。 相似文献
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目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株ECV304-Nef和其阴性对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),通过RT-PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot、FCM和细胞黏附试验分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平。结果 RT-PCR、real-time PCR结果显示ECV304-Nef细胞ICAM-1 mRNA表达水平明显升高,为对照组的(4.3±0.2)倍;Western blot结果示ECV304-Nef细胞I-CAM-1蛋白的表达水平高于对照组;FCM分析显示ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P0.01),两组间ICAM-1表达有显著差异。细胞黏附实验观察到ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞数明显多于对照组,荧光仪定量分析结果显示ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞的荧光强度值显著高与对照组(P0.05)。结论本实验证实了HIV-1Nef基因可以上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达。 相似文献
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鸟氨酸脱羧酶抗酶融合蛋白高表达对小鼠黑素瘤细胞B16-F1细胞周期的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)与绿色荧光蛋白融合蛋白GFP-OAZ1和GFP-OAZ2高表达对小鼠黑色素瘤B16-F1细胞周期的影响。方法构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达质粒并经脂质体法瞬时转染B16-F1细胞,然后用Western blot分析法和荧光显微镜下观察融合蛋白在B16-F1细胞中的表达。流式细胞分析用于检测GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞周期的影响。Western blot分析法鉴定GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞中鸟氨酸脱羧酶(ODC)酶蛋白水平的影响。结果成功构建的GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因B16-F1细胞中正确高效表达。经流式细胞检测发现,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达导致细胞G0/G1期阻滞。当用OAZ1和OAZ2分别与ODC共转染B16-F1细胞时,OAZ1融合蛋白高表达显著性减低细胞内ODC蛋白水平,但OAZ2融合蛋白高表达无此种影响。结论成功构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达载体,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达均能将B16-F1细胞阻滞于G0/G1期,但仅OAZ1融合蛋白能显著性促进ODC降解,OAZ2融合蛋白无此种功能。 相似文献
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目的 为了研究HIV-1 p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1 p15(Gag)蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的 蛋白.以纯化目的 蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达载体pET28 a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论 得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础. 相似文献
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目的 了解天津市3~7岁孤独症谱系障碍(ASD)儿童生长发育状况,为改善ASD儿童生长发育提供参考依据。方法 2016-2019年整群抽取天津市221名3~7岁ASD儿童进行体格测量,各项指标依据2015年中国九市7岁以下儿童体格发育和2008年WHO儿童生长发育标准转化为Z评分,以评价ASD儿童的体格和营养状况,采用儿童孤独症评定量表(CARS)评估ASD儿童症状严重程度。结果 天津市ASD儿童超重/肥胖率为19.0%,年龄别体重Z评分(WAZ)、年龄别身高Z评分(HAZ)、年龄别体重指数Z评分(BAZ)分布曲线向右偏移,胸围及腰围的Z评分分布曲线向+3s外延伸,坐高的Z评分分布曲线向左偏移,呈现生长偏离趋势。男童WAZ(Z=2.053,P<0.05)及超重/肥胖率(χ2=6.572,P<0.05)高于女童,6~7岁组超重/肥胖率高于3~岁和4~岁组(P<0.05),不同ASD症状严重程度间营养状况的差异无统计学意义(χ2=5.321,P>0.05)。结论 天津市ASD儿童超重/肥胖检出率较高,存在体格生长偏离,应加强ASD儿童生长发育监测和肥胖的早期干预。 相似文献
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目的 观察人肺癌及癌旁组织中经典Wnt信号途径相关基因的甲基化状态,探讨其与肺癌发生的关系.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)检测25例新鲜肺癌组织及癌旁组织、11例存档肺癌组织、6例炎性假瘤的瘤旁正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化状态.结果 6例正常肺组织未检测到甲基化基因.18例肺癌组织和10例癌旁组织中可检测到甲基化基因.在13例肺癌组织和2例癌旁组织可检测到2个以上甲基化基因.肺癌组织中WIF-1、sFRP-1和DKK-3三个基因的甲基化率分别为47.2%、36.1%、27.8%;肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而8FRP-1基因呈未甲基化状态.结论 肺癌组织中存在经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)的甲基化.其导致的基因功能失活可能发生在肺癌形成的早期. 相似文献
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