精胺/精眯N1-乙酰基转移酶重组蛋白的原核表达及其抗体制备

目的 探讨精胺/精眯N1乙酰基转移酶(SSAT)的原核表达及抗SSAT多克隆抗体的制备.方法 RT-PCR法从人肺癌细胞总RNA中克隆SSAT cDNA后,构建SSAT原核表达质粒pET15b/SSAT并转化BL21(DE3)大肠杆茵细胞.SSAT重组蛋白经IPTG诱导表达后,利用PAGE凝胶纯化和Ni-NTA亲和层析纯化.用凝胶纯化的SSAT重组蛋白免疫家兔以制备抗SSAT多克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用Western blot和ELISA技术检测.结果 SSAT重组蛋白可在大肠杆茵中诱导性高表达,用此蛋白免疫动物所得的SSAT抗体的效价以及特异性均较高.结论 建立了SSAT原核表达系统并成功制备出SSAT多克隆抗体.     

多胺类似物BENS对黑素瘤B16-F1细胞生长的影响

目的:探讨多胺类似物N1,N11-bis(ethyl)norspermine(BENS)对黑素瘤B16-F1细胞生长及凋亡的影响.方法:BENS处理B16-F1细胞,MTT法检测细胞存活率,FCM法检测细胞凋亡率,荧光染色法检测线粒体膜电位的变化,DNA片段化检测细胞凋亡,Western印迹法检测凋亡相关蛋白的含量.结果:多胺类似物BENS能显著抑制B16-F1细胞增殖,抑制率呈药物浓度依赖性.BENS可诱导DNA片段化,导致FCM分析中出现典型的亚凋亡峰,同时伴有细胞线粒体膜电位降低、细胞色素C由线粒体向细胞质释放和Bax由细胞质向线粒体转移等凋亡相关性改变.结论:多胺类似物BENS抑制黑素瘤B16-F1细胞生长,并能诱导该细胞凋亡,具有潜在的临床应用价值.     

京尼平苷干预体外培养大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的合成

背景：近年来的研究表明,中药栀子可能具有活化软骨细胞的功能,而京尼平苷是栀子中重要成分之一。 目的：观察京尼平苷对体外培养大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白合成的影响。 方法：体外分离培养大鼠膝关节软骨细胞,分别应用25,50及100 mmol/L京尼平苷干预,并设置正常对照组。RT-PCR和Western blot法观察京尼平苷对各组细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。 结果与结论：RT-PCR和Western blot法检测结果显示,与正常对照组相比,25,50及100 mmol/L京尼平苷干预可以明显促进Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达(P < 0.01)。结果证实,京尼平苷可以促进大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的合成。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

孤独症男童生长发育及头面部表型特征分析

了解男性孤独症患儿基本生长发育指标和头面部表型特征,为儿童孤独症的早期诊断提供参考依据.方法 整群抽取天津市区6所特殊教育学校的60名男性孤独症患儿,以天津市1所幼儿园40名4~7岁身体和心理发育均正常的男童作为对照,测量形态发育、生理功能及头面部表型指标.结果 10~12岁男性孤独症患儿平均皮褶厚度低于正常男生,13~15岁组平均体重和维尔维克指数均高于正常男生(t值分别为-3.858,2196,2.461,P值均<0.05).16~18岁组收缩压均值低于正常男生(t=-2.798,P=0.038).3~8岁孤独症男童唇高、口宽均值分别为(18.5±2.38) (38.1±3.73)mm,大于正常儿童的(16.3±2.67) (35.5±3.98) mm,差异均有统计学意义(t值分别为3.017,2.316,P值均<0.05).结论 男性孤独症患儿体格发育较正常差,并可能存在面部表型的特异性.应加强对此特殊人群的体质测试研究.     

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景：京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合。目的：观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4代细胞给予0,25,50,100mmol/L京尼平苷干预,利用MTT比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4代软骨细胞的增殖情况。结果与结论：体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著（P〈0.01）。     

慢性自发性荨麻疹患者血清25(OH)D和IL-25水平检测

目的：检测慢性自发性荨麻疹( CSU)患者血清中25(OH) D和IL-25的水平。方法：电化学发光方法和ELISA分别检测40例CSU患者及30例健康对照血清中的25(OH)D和IL-25水平。结果：CSU组血清25(OH) D水平为(19.48±7.41) ng/ mL低于对照组的(23.23±6.43) ng/mL，（P<0.05）。CSU组血清IL-25水平 为(124.59±19.32) pg/ mL高于对照组的(107.33±14.57) pg/ mL,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：血清25(OH)D和IL-25水平可能与CSU发病相关。     

Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞化疗敏感性的影响

2010年美国癌症学会公布了美国癌症的最新统计数据,男性膀胧癌的发病率占全身肿瘤的7%,居第四位,死亡率占全身肿瘤的3%,居第九位;女性膀胱癌的发病率占全身肿瘤的2.4%,死亡率占全身肿瘤的1.58%.而在我国,膀胱癌是泌尿外科最常见的肿瘤,占全部恶性肿瘤的3.2%.     

细胞膜上稳定表达融合蛋白CRT/vGPCR A549细胞株的建立

目的 将人钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(virus G-protein couple receptor,vGPCR)基因进行基因重组,用此重组基因建立细胞膜上稳定高表达CRT/vGPCR融合蛋白的人肺癌A549细胞株.方法 从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vGPCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中.用此质粒转染人A549肺癌细胞,通过G418筛选建立稳定转染的A549细胞株,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用细胞免疫荧光分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位.结果 成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误.将上述质粒转染A549细胞后,建立了稳定转染CRT/vGPCR的A549细胞株,融合基因在A549细胞中表达并定位到细胞膜上.结论 通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上.     

Bcl-2家族在阿司匹林诱导人小细胞肺癌A549细胞凋亡中的作用

摘要 目的: 研究阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究Bcl-2在诱导凋亡机制中的作用。方法:运用体外细胞培养,阿司匹林以不同浓度（1,2.5,5,7.5,10mmol/L）作用于人小细胞肺癌A549细胞。采用噻唑蓝(MTT)法测定阿司匹林对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder 现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果：阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使A549细胞G0/G1期和G2/M期比例明显下降,S期比例升高;诱导细胞凋亡发生;阿司匹林作用A549细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论：阿司匹林在体外可有效抑制人小细胞肺癌A549细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡机制与Bcl-2表达减少,线粒体膜跨膜电位下降相关。     

保妇康凝胶治疗宫颈高危型HPV感染

目的：探讨保妇康凝胶治疗宫颈高危型人乳头瘤状病毒（HPV）感染的临床疗效。方法：通过入组跟踪研究方式,将门诊收治109例宫颈HPV高危型感染患者随机分为治疗组（89例）和对照组（20例）,治疗组给予保妇康凝胶按用药说明进行治疗,对照组不用药,只随访观察。3个疗程后行HPV复查,观察转阴率及滴度变化。结果：治疗组58例（65．2％）HPV转阴,无不良反应发生,31例（34．8％）仍有HPV感染,但其中有20例（64．5％）滴度明显下降（大于50％）,对照组中2例（10％）转阴,1例滴度明显下降．两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：保妇康凝胶治疗宫颈高危型HPV感染临床效果显著．