重组天花粉蛋白体外诱导宫颈癌 HeLa 细胞 p27 基因去甲基化的研究

目的 研究重组天花粉蛋白 (recombinant trichosanthin, rTCS) 对宫颈癌 HeLa 细胞中 p27 基因甲基化状态和基因表达的影响。方法 应用不同质量浓度的 rTCS (20、40、80 μg/mL) 处理体外培养的宫颈癌 HeLa 细胞后,MSP 法检测用药前后细胞中 p27 基因的甲基化状态,RealTime PCR 法检测用药前后细胞中 p27 和 DNA 甲基转移酶1 (DNMT1) mRNA 水平的变化,Westernblotting 法检测用药前后细胞中 p27 蛋白表达的变化。结果 HeLa 细胞中 p27 基因为低表达,基因启动子区 CpG 岛呈部分甲基 化状态。40 μg/mL rTCS 处理导致 p27 基因启动子区 CpG 岛去甲基化;在 20、40、80 μg/mL 的 rTCS 作用 48 h 后,p27 基因 mRNA 相对表达水平分别升高 2.22、4.00、6.03 倍,p27 蛋白水平表达也逐渐增加;宫颈癌 HeLa 细胞中 DNMT1 mRNA 高表达,40 μg/mL rTCS 处理 48 h 可至 DNMT1 mRNA 表达水平降低 78%。结论 rTCS 通过抑制 DNMT1,逆转 p27 基因启动子区 CpG 岛的甲基化状态,使宫颈癌 HeLa 细胞中 p27 基因表达活化。rTCS 能逆转宫颈癌 HeLa 细胞 p27 基因甲基化状态,调控 p27 基因和 DNMT1 的表达。     

蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖抑制作用及机制,为蜂毒素用于膀胱癌的临床应用提供依据.方法 体外培养T24细胞,分别用0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5和15.0 μg/mL蜂毒素处理,采用四甲基偶氮(MTT)法检测细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;TUNEL染色检测凋亡率和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达.结果 蜂毒素处理后,T24细胞生长明显受到抑制,呈剂量依赖性;细胞出现典型的凋亡形态学改变;凋亡率随剂量升高以及Bax的表达升高而Bcl-2表达下降.结论 蜂毒素在体外能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,机制可能为诱导其细胞凋亡.     

孤独症谱系障碍儿童左侧视野优势效应研究

  目的  探索孤独症谱系障碍儿童对面孔加工中左侧视野优势效应的损害情况, 为加深理解孤独症社交损害的注意机制提供依据。  方法  采取重复测量资料的混合设计, 招募2016年9月—2019年12月在天津市各个孤独症康复机构训练的105名孤独症儿童, 组成病例组, 按照病例组的年龄和性别匹配正常发育的天津市小学或幼儿园就读的105名正常儿童为对照组。采用注意偏好范式进行眼动数据采集, 比较两组在左右侧视野对于面孔的注视点数、注视总时间和左半脸百分比等指标, 通过重复测量资料的方差分析, 探索组别、左右视野、面孔性别等因素的主效应和交互作用。  结果  对于左右视野整张面孔的注视点数(FC)和总注视时间(TFD)组别主效应有统计学意义[FC:F_(1，206)=26.27，P < 0.01；TFD:F_(1，206)=51.23，P < 0.01]。组别×左右视野的交互作用只有FC差异有统计学意义[F_(1，206)=4.62，P=0.03)]。进一步简单效应分析发现，病例组左右侧视野(3.19±0.42，4.05±0.41)差异有统计学意义(P < 0.01)，右侧视野多于左侧，而对照组差异无统计学意义(P=0.22)。左半脸百分比进行重复测量资料的方差分析可见组别主效应[FC:F_(1，206)=13.77，P < 0.01；TFD:F_(1，206)=12.89，P < 0.01)]和组别与左右视野的交互作用[FC:F_(1，206)=36.99，P < 0.01；TFD:F_(1，206)=38.62，P < 0.01)均有统计学意义。经简单效应分析，仅病例组存在左右视野的差异(FC:0.36±0.03，0.56±0.03，P < 0.01；TFD:0.36±0.03，0.57±0.03，P < 0.01)，右侧视野注视多于左侧。  结论  孤独症谱系障碍儿童的注视行为未见左侧视野视觉优势效应, 其右侧视野的注视相对正常, 提示其病理生理损害可能与右侧面孔加工区异常有关, 也提示其中枢统合能力存在异常。     

融合基因CRT/vGPCR的构建及其在真核细胞膜上的表达

目的:将人钙网蛋白(CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(vGPCR)基因进行基因重组融合,由此将CRT携带到肿瘤细胞膜表面。方法:从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vG-PCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。用此质粒转染人A549肺癌细胞后,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用免疫荧光细胞化学和流式细胞术分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位。结果:成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误。将上述质粒转染A549细胞后,融合基因可在A549细胞中表达并定位到细胞膜上。结论:通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上。     

与癌症共存

与癌症抗争的经历会让你产生新的观点。癌症的治疗需要大量的时间和精力,从而让你没有时间去注意别的事情。但是经历过以后,曾经让你最期待的事,如经过很长时间为住院做的计划、安排门诊的治疗,以及处理治疗及药物所带来的副作用,都已经回到以前的正常生活。     

枳Bei子对实验性肝损伤的防护作用

ＣＣｌ４性肝损伤小鼠血清ＧＰＴ活性，血清和肝ＭＤＡ含量显著性升高，但血糖和白蛋白浓度显著性下降，表明肝脏结构与功能的严重损伤，用枳Ｂｅｉ我浆灌胃１４ｄ由述指标变化幅度明显变小，提示枳Ｂｅｉ对ＣＣｌ４引起的肝损伤具有防护作用。     

复方细辛不同制剂的镇痛作用比较

目的 :本实验采用酊剂和水煎剂的细辛分别用维拉帕米配制成复方细辛 ,来观察其镇痛作用。同时测定其水煎剂的半数致死量 ,观察其急性毒性 ,判断其临床应用价值。方法 :采用化学刺激法、热板法、牙髓电刺激法。结果 :复方细辛酊剂局部给药及复方细辛水煎剂全身给药均有镇痛作用 ,其中酊剂复方细辛局部应用比水煎剂复方细辛全身应用起效快 ,用量少。但酊剂刺激性大 ,应用时有一定适应证限制。而水煎剂可口服 ,全身作用明显 ,急性毒性实验结果表明 ,毒性极低。所以也有其临床应用价值。结论 :复方细辛酊剂和复方细辛水煎剂均具有安全、可靠的镇痛作用。因此均可作为有效镇痛药用于临床。但它们分别有各自的适应证和优缺点     

HIV-1 Tat蛋白结合Tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究

目的：建立HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型用于抗艾滋病药物体外筛选。方法：构建表达HIV-1 Tat蛋白的真核表达质粒（pCDNA3．1（＋）-Tat）和HIV-1 LTR-luc荧光素酶报告基因，采用脂质体转染法共转染HeLa细胞，荧光仪检测Tat蛋白结合HIV-1LTR促进荧光素酶在HeLa细胞内的表达情况。结果：成功构建pCDNA3．1（＋）-Tat和HIV-1 LTR-luc质粒，将质粒共转染HeLa细胞，荧光仪检测到荧光素酶的活性，建立了HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型。以DRB（5，6-二氯-1-β呋核亚硝脲-苯并咪唑）为阳性对照，进行模型的条件优化。通过反复试验表明：目的基因和报告基因的比例、细胞浓度以及药物作用时间等对模型的稳定性和敏感性有影响。应用优化的细胞模型对文冠果、紫苏等天然产物浸提物进行筛选及结果的分析。结论：建立的HIV-1Tat蛋白结合Tar的细胞模型可用于抗HIV-1的药物筛选。     

HIV-1 p15（Gag）基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的:构建HIV-1p15(Gag)原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法:用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中,利用大肠杆菌表达系统表达HIV-1p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的蛋白的免疫原性。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性。结果:原核表达载体pET28a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约20KD的p15(Gag)蛋白,经western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的HIV-1p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。