HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在内皮细胞的表达

目的:构建HIV-1 Tat真核表达质粒,为研究Tat在HIV-1致病机制中的作用奠定实验基础。方法:以pCV1(tat and rev)质粒为模板,用PCR方法扩增HIV-1 Tat基因,克隆至p cDNA3.1( )表达载体,酶切及测序鉴定重组体。重组质粒转染ECV304细胞,用RT-PCR、转染HIV-1 LTR荧光报告基因的方法检测tat基因的表达及活性。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建pcDNA3.1( )-Tat重组质粒。重组体转染ECV304细胞,建立稳定表达细胞株,应用RT-PCR可检测到Tat基因mRNA的表达;荧光仪检测Tat蛋白可明显促进荧光素酶在ECV304细胞内的表达。结论:成功构建HIV-1Tat真核表达载体,并建立了HIV-1 Tat内皮细胞稳定表达细胞株。     

木瓜发酵工艺及其抗氧化活性研究

目的:研究湖北长阳县皱皮木瓜的发酵工艺,以抗氧化活性作为活性评价标准优化发酵参数。方法:通过比色法建立双氧水诱导红细胞溶解的氧化损伤模型。应用单因素实验测定不同条件对木瓜发酵的抗氧化活性影响。结果:通过调整实验条件建立了稳定的H2O2诱导红细胞溶解的氧化模型。通过木瓜发酵提取液体外抗氧化活性试验,建立最佳发酵模型,得到了木瓜发酵影响因素的最佳条件:糖浓度2.0g/100ml、发酵温度37.0℃、发酵时间2天、发酵初始pH 4.0。结论:应用体外抗氧化活性模型,获得具有较好的抗氧化生物学活性的木瓜发酵条件。     

颞浅动脉顶支带蒂头皮瓣修复面部毁损性烧伤创面的临床效果

目的探讨采用颞浅动脉顶支带蒂头皮瓣修复面部毁损性烧伤创面的临床效果。方法采用回顾性观察性研究方法。2016年1月—2021年12月, 郑州市第一人民医院收治15例符合入选标准的面部毁损性烧伤患者, 其中男11例、女4例, 年龄22～79岁。2例患者合并单侧眼球毁损性烧伤, 2例患者合并单侧耳郭缺损, 8例患者合并唇及面颊部缺损, 3例患者合并唇和面颊部及单侧鼻翼缺损。烧伤创面面积为9 cm×6 cm～13 cm×10 cm, 设计并切取面积为10 cm×7 cm～15 cm×11 cm的颞浅动脉顶支带蒂头皮瓣转移修复烧伤创面, 移植中厚头皮片修复供瓣区继发创面。根据患者需求, 于皮瓣完全成活后2周, 应用激光脱去面部移植皮瓣部位生长的毛发;或于原发创面修复术后3个月, 采用扩张头皮瓣治疗头部供瓣区继发的秃发。记录原发创面修复术后皮瓣/皮片成活情况、皮瓣供受区创面愈合情况;随访时观察皮瓣外观及缝合口瘢痕增生情况、面部功能部位修复效果、激光脱毛及供瓣区继发秃发治疗效果, 询问患者对整体修复效果的满意度。结果原发创面修复术后, 烧伤创面移植的皮瓣和供瓣区继发创面移植的皮片全部成活, 皮瓣供受...     

人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备

目的 克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础.方法 用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性.用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105.结论 鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础.     

细胞治疗与AIDS功能性治愈

HIV可与被感染细胞的基因组整合形成潜伏感染,进而构成机体的病毒储存库,后者是联合抗反转录病毒疗法无法彻底清除病毒、治愈AIDS的根源,探索有效的策略来实现AIDS的功能性治愈是目前AIDS研究的热点。"柏林病人"重新定义了HIV感染治疗的结局,燃起了人类治愈AIDS的希望和信心。目前,以干细胞、T细胞等为主的细胞治疗策略被认为是治愈HIV感染的主要策略之一。本文就近年来细胞治疗在AIDS功能性治愈中的研究进行概述。     

HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的 为了研究HIV-1 p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1 p15(Gag)蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的 蛋白.以纯化目的 蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达载体pET28 a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论 得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础.     

替比夫定治疗慢性乙型肝炎病毒感染孕妇的安全性及有效性评价

目的评价替比夫定治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染孕妇的安全性及有效性,以期提高临床对乙型肝炎的治疗水平。方法选择医院2011年3月-2012年3月51例慢性HBV感染孕妇在常规护肝治疗基础上给予替比夫定治疗设为研究组,同时选择同期仅给予保肝治疗的47例慢性HBV感染孕妇为对照组,两组孕妇分娩前后均进行检测,对HBeAg转阴率、ALT复常率、并发症发生率进行比较,所有产妇及新生儿均随访6¹2个月,对新生儿HBeAg进行检测,并采用Apgar评分了解新生儿的发育情况,采用SPSS13.0软件对所有数据进行统计分析。结果研究组分娩前HBeAg转阴9例,转阴率为17.65%,ALT复常39例,复常率76.47%,分娩前平均HBV DNA水平明显低于入组时,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);研究组新生儿出生时,出生后6、12个月HBeAg阳性率分别为5.88%、0、0;对照组分别为21.28%、17.02%、14.89%;研究组HBeAg阳性率明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);两组孕产妇均无肝功能异常,两组新生儿肌酸激酶升高、早产、产后出血、流产发生率比较差异无统计学意义,两组新生儿的Apgar评分无明显差异。结论替比夫定是治疗慢性HBV感染孕妇的有效药物,不仅能快速降低孕妇的HBV-DNA水平,同时可阻断HBV对胎儿的传播,且具有较高的安全性。     

直接抗病毒药物治愈的慢性丙型肝炎患者NK细胞的免疫学特点分析

目的探讨直接抗病毒药物(direct-acting antivirals, DAAs)治愈的慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C, CHC)患者NK细胞的免疫学变化。方法入组13例经达拉他韦(daclatasvir, DCV)和阿舒瑞韦(asunaprevir, ASV)治疗24周的初治型HCV 1b型CHC患者,同时入组13例健康者为健康对照(healthy controls, HC)组。采用流式细胞术分析患者治疗前,治疗第24周,治疗结束后随访第12周、24周的外周血NK细胞表型和功能特点。结果 13例CHC患者经DCV/ASV抗病毒治疗均获得持续病毒学应答即临床治愈;与HC组相比,CHC患者抗病毒治疗前外周血NK细胞表达HLA-DR、NKP46、CD38的水平显著增高(P均<0.05),分泌CD107a和TNF-α的水平增高(P均<0.05),但产生IFN-γ的能力降低(P <0.05)。抗病毒治疗后,CHC患者外周血NK细胞活化程度降低,分泌IFN-γ的能力明显增强(P均<0.05)。结论经DAAs治愈的CHC患者外周血NK细胞的表型和功能显著改善。     

HIV感染者B细胞的特点及其对疾病进展的影响

艾滋病(AIDS)是由艾滋病病毒-1(HIV-1)感染后引起的一种严重危害人类健康的重大传染病。除了进行性的CD4+T淋巴细胞减少,HIV-1感染还造成多种免疫细胞的功能改变,这些功能改变极大地影响艾滋病的疾病进展。B细胞是人体免疫系统中重要的免疫细胞,其不但能介导体液免疫,还是重要的免疫调节细胞。然而HIV-1感染会在多个方面造成B细胞的功能缺陷。文章分析了HIV-1感染对B细胞免疫超活化、B细胞亚群组成以及调节性B细胞的影响及这些影响与艾滋病疾病进展的关系。