血管钙化对血管组织内皮素表达的影响

通过观察血管钙化大鼠血管组织和钙化血管平滑肌细胞内皮素含量的变化 ,探讨血管钙化对血管组织内皮素表达的影响。用维生素D3加尼古丁诱导大鼠血管钙化模型 ,β 磷酸甘油制备钙化血管平滑肌细胞 ,采用VonKossa染色、钙含量测定、4 5Ca聚集及碱性磷酸酶活性测定判断钙化程度 ,放射免疫分析法测定血浆、血管和血管平滑肌细胞培养基中内皮素含量 ,用竞争性定量逆转录聚合酶链反应方法测定血管和血管平滑肌细胞中内皮素mRNA水平。结果发现 :钙化血管平滑肌细胞VonKossa染色见有大量黑色颗粒沉积 ,钙化细胞的钙含量、4 5Ca2 + 摄入及碱性磷酸酶活性分别较正常平滑肌细胞增加 1 1 8%、1 74 %和 7倍 (P均 <0 .0 1 ) ;钙化细胞培养基中内皮素含量较对照组增加 35 % (P <0 .0 5 ) ,内皮素mRNA水平较对照组高 1 2 0 % (P <0 .0 5 ) ;钙化组大鼠血管组织VonKossa染色见血管中层有大量黑色颗粒沉积 ,主动脉钙含量、4 5Ca2 + 沉积及碱性磷酸酶活性分别较对照组高 5 .0倍、1 .4倍和1 .4倍 (P均 <0 .0 1 ) ;钙化大鼠血浆和血管内皮素含量分别较对照组增加 1 0 2 %和 1 0 3% (P均 <0 .0 1 ) ;钙化血管内皮素mRNA水平较正常对照组高 2 2 % (P <0 .0 1 ) ;波生坦处理的大鼠血管钙含量、4 5Ca2 + 聚集及碱性磷酸酶活性较单     

肾素通过非血管紧张素Ⅱ途径促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨肾素通过非血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的分子机制.方法 采用组织块贴壁法培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞,利用β-甘油磷酸钠联合丙酮酸钠制备血管平滑肌细胞钙化模型.细胞随机分为6组:空白对照组(予常规培养基)、钙化组(予钙化培养基)、钙化+ AngⅡ受体阻断剂组(予钙化培养基,再予氯沙坦10-6 mol/L和PD123,31910-5 mol/L分别阻断AngⅡ受体AT1、AT2)、钙化+肾素(10-10、10-9和10-8 mmol/L)组(于钙化培养基中,先加入氯沙坦10-6 mol/L和PD123,319 10-5 mol/L,再分别予10-10、10-9和10-8 mmol/L肾素).用Von Kossa染色鉴定钙化细胞,测定各组细胞中钙含量、碱性磷酸酶(ALP)活性判断钙化程度.用RT-PCR检测成骨细胞标志物核结合因子α1(Cbfα1)和转化生长因子β1 (TGF-β1) mRNA表达,Western blot测定各组细胞Cbfα1蛋白含量.结果 与空白对照组相比,钙化组钙含量、ALP活性显著增加,Cbfα1和TGF-β1 mRNA及Cbfα1蛋白表达明显增加(P＜0.01).与钙化组相比,钙化+AngⅡ受体阻断剂组对钙化的影响无统计学差异.与钙化+ AngⅡ受体阻断剂组相比,钙化+肾素(10-10、10-9和10-8 mmol/L)组呈剂量依赖地促进大鼠血管平滑肌细胞的钙含量、ALP活性,以及Cbfα1和TGF-β1 mRNA及Cbfα1蛋白表达(P＜0.05).结论 肾素可通过非AngⅡ途径作用促进β-甘油磷酸钠诱导的血管平滑肌细胞钙化,其作用可能与TGF-β1、Cbfα1表达上调有关.     

钙化血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统的基因表达上调

探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统一降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义。采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺髓质素含量;半定量逆转录聚合酶链反应测定细胞肾上腺髓质素、降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白的mRNA水平;原子吸收分光光度计测定细胞钙含量;碱性磷酸酶试剂盒测定血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性;β液体闪烁计数仪测定45Ca2+放射活性。结果发现,与非钙化血管平滑肌细胞比较,钙化血管平滑肌细胞内钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性分别增加118％、174％和7倍(P<0.01);钙化细胞肾上腺髓质素分泌量增高99％(P<0.01),肾上腺髓质素、降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平分别增加78％、93.7％、91.8％和109.5％(P均<0.01)。肾上腺髓质素与降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平呈正相关,其相关系数分别为0.83、0.92和0.93(P均<0.01)。结果提示,血管平滑肌细胞肾上腺髓质素 旁/自分泌功能改变可能参与血管钙化的调节过程。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法建立血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞中钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性的影响。结果与正常对照组比较,血管紧张素Ⅱ组能够明显刺激血管平滑肌细胞增殖,血管紧张素Ⅱ处理的血管平滑肌细胞的钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性及细胞增殖活度均较正常对照组显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪处理后,各组钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性均显著下降(P<0.01)。结论川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其抑制机制可能与其干预钙调神经磷酸酶依赖的信号转导途径有关。     

糖基化终末产物促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 观察糖基化终末产物对体外培养的血管平滑肌细胞钙化的影响.方法 在含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养液中加入不同浓度(0、50、100、200 mg/L和400 mg/L)的糖基化终末产物与大鼠血管平滑肌细胞孵育不同时间.采用磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶活性,甲-酚酞络合酮方法测定钙含量,实时定量逆转录聚合酶链反应检测成骨细胞特异性核心结合因子、碱性磷酸酶以及骨桥蛋白基因表达,蛋白免疫印迹检测成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白蛋白表达.结果 与对照组相比,糖基化终末产物随作用时间延长和浓度增加,细胞钙含量增加(P<0.05),升高碱性磷酸酶活性和基因表达(P<0.05),促进成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白基因及蛋白表达(P<0.01).结论 糖基化终末产物可促进体外培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化.     

大鼠钙化血管尾加压素Ⅱ及其受体上调

目的 观察血管钙化大鼠主动脉和心肌尾加压素Ⅱ及其受体表达的变化.方法 采用维生素D3 和尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,以Von Konsa染色检测血管钙化,以原子吸收法和磷酸苯二钠法测定血管钙含量和碱性磷酸酶活性,放射免疫法检测血浆、主动脉和心肌尾加压素Ⅱ含量,免疫组织化学法检测血管尾加压素Ⅱ的表达,RT-PCR法检测主动脉和心肌尾加压素受体mRNA水平.结果 维生素D3 和尼古丁能够诱导大鼠典型血管钙化形成.Von Kossa染色可见血管钙化大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀,血管钙含量、碱性磷酸酶活性明显升高,主动脉尾加压素Ⅱ含量、主动脉和心肌尾加压素受体基因表达明显上调.精氨酸饮食能减轻血管钙化,血管钙含量、尾加压素Ⅱ水平及尾加压素受体mRNA表达与单纯钙化组相比轻度下降,但无统计学意义.蛋氨酸饮食能加重血管钙化,增加钙含量,上调尾加压素Ⅱ表达,降低碱性磷酸酶活性.各组之间血浆尾加压素Ⅱ水平差异无统计学意义.结论 大鼠钙化血管尾加压素Ⅱ表达上调,提示尾加压素Ⅱ可能参与了血管钙化的发展过程.     

同型半胱氨酸对血管钙化的促进作用

目的 在体外血管钙化模型基础上探讨同型半胱氨酸（HCY）对血管钙化的影响。方法 建立牛主动脉平滑肌细胞体外钙化模型（钙化BASMCs)。检测HCY对细胞层钙含量。培养上清骨钙素浓度及碱性磷酸酶活性的影响。并检测骨钙素，骨桥蛋白及Ⅰ型胶原（ColⅠ)mRNA表达的变化及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对HCY促钙化作用的影响。结果 HCY剂量依赖性促钙化BASMCs钙沉积，但不促进非钙化的BASMCs钙沉积；N-乙酰半胱氨酸抑制HCY对钙化BASMCs钙沉积的促进作用。但在钙化BASMCs中单纯加入等剂量的N-乙酰半胱氨酸对钙沉积无影响；HCY促钙化BASMCs培养上清骨钙素含量增加，且使骨桥蛋白，骨钙素，ColⅠmRNA表达分别增加56.33%,86.48%及110.64%。但对正常培养的BASMCs培养上清骨钙素含量及骨桥蛋白，骨钙素mRNA表达无影响。仅使ColⅠmRNA表达增加108.33%;HCY不影响正常及钙化BASMCs碱性磷酸酶活性。结论 （1）HCY是钙化的促进因子，而非启动因子；（2）HCY的促钙化作用可能部分是通过细胞外基质途径实现的；（3）N-乙酰半胱氨酸阻断HCY的促钙化作用。间接提示氧化反应参与此过程；（4）HCY的促钙化作用与碱性磷酸酶活性无关。     

血管紧张素1-7抑制血管外膜成纤维细胞增殖

目的探讨血管紧张素1-7对血管外膜成纤维细胞增殖的影响.方法在培养大鼠血管外膜成纤维细胞中,用血管紧张素Ⅱ和血管紧张素1-7刺激,检测蛋白激酶C、丝裂素活化蛋白激酶及钙调神经磷酸酶活性,以氚标胸腺嘧啶和氚标亮氨酸掺入量反映血管外膜成纤维细胞增殖的指标.结果血管紧张素1-7既能明显抑制基础状态下血管外膜成纤维细胞蛋白激酶C、丝裂素活化蛋白激酶和钙调神经磷酸酶活性(P＜001或P＜0.05),又能抑制血管紧张素Ⅱ刺激下的血管外膜成纤维细胞蛋白激酶C、丝裂素活化蛋白激酶和钙调神经磷酸酶活性(P＜0.01或P＜0.05).血管紧张素1-7能明显抑制血管外膜成纤维细胞氚标胸腺嘧啶和氚标亮氨酸掺入(P＜0.01或P＜0.05);而血管紧张素Ⅱ则促进血管外膜成纤维细胞氚标胸腺嘧啶和氚标亮氨酸掺入(P＜0.01或P＜0.05).血管紧张素1-7还能抑制血管紧张素Ⅱ刺激下的血管外膜成纤维细胞氚标胸腺嘧啶和氚标亮氨酸掺入(P＜0.01或P＜0.05).结论血管紧张素1-7可能通过影响蛋白激酶C、丝裂素活化蛋白激酶和钙调神经磷酸酶信号通路,发挥抑制血管外膜成纤维细胞增殖的作用.     

钙调神经磷酸酶对钙化细胞Ⅰ型三磷酸肌醇受体表达的影响

目的探讨大鼠血管平滑肌细胞钙化过程中钙调神经磷酸酶对Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达的影响。方法大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞经传代培养后随机分为对照组、钙化组和环孢素A组,采用磷酸二氢钠诱导大鼠动脉血管平滑肌细胞钙化。应用免疫印迹法及实时荧光定量RT-PCR法测定钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体的表达变化,同时测定Ca2+浓度及碱性磷酸酶、钙调神经磷酸酶活性。结果与对照组比较,钙化组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.01);与钙化组比较,环孢素A组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01)。钙化组Ca2+浓度、钙调神经磷酸酶活性、碱性磷酸酶活性较对照组显著增高(P<0.01);环孢素A组碱性磷酸酶活性、Ca2+浓度较钙化组显著增加(P<0.05或P<0.01),钙调神经磷酸酶活性较钙化组显著降低(P<0.01)。结论钙调神经磷酸酶能够增强钙化细胞中Ⅰ型三磷酸肌醇受体mRNA和蛋白的表达。     

吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及机制

目的研究吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法将36只SD雄性大鼠随机平均分为6组:对照组、糖尿病组、钙化组、糖尿病+钙化组、钙化+吡格列酮组、糖尿病+钙化+吡格列酮组;建立大鼠血管钙化模型(维生素D3+华法林)和糖尿病模型(链尿佐菌素);并对血管组织进行Von Kossa染色、钙含量和碱性磷酸酶活性检测,qRT-PCR检测mRNA表达,免疫组织化学法检测骨保护素蛋白表达。结果钙化组血管平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积;糖尿病+钙化组较糖尿病组和钙化组血管组织钙含量、碱性磷酸酶活性分别升高3.63倍、1.35倍和3.69倍、1.30倍(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达降低(P<0.05);糖尿病+钙化+吡格列酮组较糖尿病+钙化组钙含量、碱性磷酸酶活性分别下调13.70%、18.04%(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达升高(P<0.05)。结论吡格列酮可以减轻血管钙化程度并上调骨保护素mRNA含量及蛋白表达,骨保护素可能是抑制血管钙化主要因素之一。     

生长素抑制大鼠血管钙化及其可能机制

为探讨生长素调节血管钙化的可能机制,用肌肉注射维生素D3和口服尼古丁诱导大鼠血管钙化模型和β-甘油磷酸盐诱导血管平滑肌细胞钙化模型,采用原子吸收分光光度法测定血管和细胞钙含量,磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶活性,45CaCl2摄入测定钙沉积,逆转录-聚合酶链反应测定生长素、骨桥蛋白和内皮素mRNA表达水平,放射免疫分析方法测定血浆生长素和内皮素含量.结果表明,维生素D3和尼古丁明显诱导大鼠血管钙化,β-磷酸甘油可诱导血管平滑肌细胞钙化.采用30和300nmol/kg生长素治疗大鼠均可抑制血管钙化,且高剂量时效应强于低剂量,与钙化组相比较,血管组织钙化指标均下降并且差异有显著性,而骨桥蛋白mRNA的表达明显上调.10-8～10-6mol/L生长素呈浓度依赖性降低血管平滑肌细胞钙化指标,并上调骨桥蛋白mRNA表达.此外生长素明显下调血浆内皮素浓度及血管组织的内皮素表达,且高剂量生长素的效应更强.结果提示,生长素可能部分通过拮抗血浆和血管组织局部的内皮素系统效应而产生抑制血管组织和血管平滑肌细胞钙化的作用.     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响

目的探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响及抗动脉粥样硬化可能的分子机制。方法体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞，应用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术，测定罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体mRNA和蛋白表达的剂量、时间依赖的影响。结果基础状态下，血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体均有少量的表达。血管紧张素Ⅱ显著上调血管紧张素Ⅱ1型受体（P〈0.01）和下调2型受体的表达（P〈0．05）。浓度依赖实验表明，不同浓度罗格列酮（20、30和50μmol／L）干预12h均显著下调血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），上调2型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01和0．05）。时间依赖实验表明，30μmol／L的罗格列酮干预后，6h即出现明显的干预效应，24h时下调血管紧张素Ⅱ1型受体和上调2型受体mRNA和蛋白的作用最大，与血管紧张素Ⅱ组比差异有显著性（P〈0．01）。结论罗格列酮可呈浓度依赖和时间依赖性地下调血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达，上调血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达，这可能是过氧化体增殖物激活型受体7激动剂罗格列酮发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用的重要机制。     

白细胞介素10抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的信号途径

为探讨白细胞介素 10抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的细胞信号机制 ,采用3 H -TdR掺入的方法检测血管平滑肌细胞DNA合成 ,3 2 P ATP掺入检测丝裂素活化蛋白激酶和蛋白激酶C活性 ,蛋白免疫印迹杂交及免疫沉淀方法检测粘着斑激酶蛋白表达及其活性变化。结果显示 ,白细胞介素 10呈浓度依赖性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖 ,同时下调血管紧张素Ⅱ引起的丝裂素活化蛋白激酶、蛋白激酶C和粘着斑激酶信号的激活 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。因此白细胞介素 10可能通过下调血管紧张素Ⅱ刺激的丝裂素活化蛋白激酶、蛋白激酶C和粘着斑激酶等增殖相关信号的激活而抑制其刺激的血管平滑肌细胞增殖     

糖尿病大鼠钙化血管中Msx2和Wnt3a的表达

目的 研究糖尿病对血管钙化的影响及Msx2和wnt3a基因在钙化血管中的表达变化.方法 将48只雄性wistar大鼠随机分为四组:维生素D3和尼古丁诱导的单纯血管钙化组(n=12)、链脲佐菌素诱导的单纯糖尿病组(n=12)、链脲佐菌素联合维生素D3和尼古丁诱导的糖尿病合并血管钙化组(n=12)和正常雄性Wistar大鼠为正常对照组(n=12).测定大鼠血糖、血清胰岛素、总胆固醇和甘油三酯水平,以血管von Kossa染色、血管钙含量和碱性磷酸酶活性作为判断血管钙化程度的指标,测定大鼠血管中Msx2和wnt3a mRNA 的表达.结果 与正常对照组相比,单纯血管钙化组大鼠血管中Msx2和wnt3a mRNA 相对表达量有所升高(P<0.05),但血管钙含量和碱性磷酸酶活性无明显变化.与正常对照组及单纯血管钙化组相比,糖尿病合并血管钙化组大鼠的血管中,可见沿中膜弹力层内广泛分布的钙盐沉积,大鼠血管中钙含量和碱性磷酸酶活性以及血管内Msx2和wnt3amRNA 相对表达量明显增高(P<0.05).结论 糖尿病可以明显加速血管钙化的发生和发展.在糖尿病大鼠钙化血管中,骨形成过程中的转录因子Msx2和Wnt3a表达增高,提示血管钙化是一个类似于骨形成的过程,Msx2和Wnt3a 参与血管钙化病变的发生.     

钙离子通道部分介导机械牵张力引起的小鼠主动脉血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶的激活

目的为了证实血管紧张素Ⅱ受体是否参与了主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)对机械牵张力信号的直接介导。方法(1)体外分离培养静息状态的小鼠主动脉VSMC给予血管紧张素Ⅱ刺激或血管紧张素Ⅱ受体特异性阻断剂坎地沙坦(candesar-tan)预处理后给予血管紧张素Ⅱ刺激,用Western blot法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性,以证实VSMC血管紧张素Ⅱ受体的存在。(2)静息状态的VSMC给予机械牵张力刺激一定时间和强度,观察细胞内MAPK的活....     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖、迁移作用的信号通路研究

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）是血管中膜的主要细胞成分,它的增殖和迁移是血管病变的细胞基础病理改变之一。血管紧张素Ⅱ（Angio-tensinⅡ,AngⅡ）与VSMCs上其1型受体（AngiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R）结合后,可经丝裂原激动蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）、核因子-κB（nuclear factorof kappa B,NF—κB）等多条信号通路,     

雌二醇对大鼠血管紧张素Ⅱ及其1型受体表达的影响

目的雌二醇对去卵巢SD大鼠血管紧张素Ⅱ及其1型受体表达的影响。方法24只12周龄雌性SD大鼠随机分为3组:去卵巢组、去卵巢加雌二醇(简称雌二醇)组和假手术组。测量术前和术后大鼠体重、血压,检测血清雌二醇、血浆血管紧张素Ⅱ、心脏、肾皮质、主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA的表达水平。并用离体培养血管平滑肌细胞,检测雌二醇对血管平滑肌血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的影响。结果1.三组大鼠在手术前体重没有明显差别,三个月后,与假手术组比较,去卵巢组大鼠体重显著增加(475.8±23.0比372.1±13.1,P<0.05),雌二醇组与假手术组比较无明显差别(387.3±15.9比372.1±13.1,P>0.05)。2.术前三组大鼠血压没有明显的差别。三个月后,去卵巢组大鼠血压明显升高(117.5±7.6比104.4±6.2mmHg,P<0.05),雌二醇组血压不升高,与假手术组没有差别。3.与假手术组比较,去卵巢组血浆血管紧张素Ⅱ浓度明显升高(617.7±80.1比215.0±26.7,P<0.05)。雌二醇组血浆血管紧张素Ⅱ浓度与假手术组没有区别。4.与假手术组比较,去卵巢组心脏、肾脏、主动脉血管mRNA表达明显增加,雌二醇组无显著差异。5.体外培养血管平滑肌细胞,在0.2%小牛血清培养基的条件下,加入10-6mol/L雌二醇,从4h开始抑制血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA的表达,12h血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA的表达明显降低(0.65±0.06比0.85±0.07,P<0.05)。在0.2%小牛血清培养基的条件下,10-5、10-6和10-7mol/L雌二醇呈浓度依赖性的抑制血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA的表达,当雌二醇10-6mol/L血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA的表达显著降低(0.67±0.06比0.85±0.07,P<0.05)。结论1.雌二醇可抑制血管紧张素Ⅱ1型受体的表达及降低血管紧张素Ⅱ水平。2.雌二醇对心血管系统作用可能通过降低血管紧张素Ⅱ及其1型受体的表达     

维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系

目的 探讨维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系.方法 选择慢性肾脏疾病5期维持性血液透析患者17例(透析时间在1年以上),均为自体桡动脉-头静脉内瘘作为透析通路的患者,因自体动静脉内瘘失功拟重建血管通路.在动静脉内瘘重建过程中,取失功动静脉内瘘动脉段作为实验组标本,同龄人群(取材于尸体肾供者)腹主动脉作为对照组.以von Kossa染色法对血管钙化进行定性检测,甲酚酞络合酮化学法对血管钙化进行定量检测,磷酸苯二钠法测定血管组织碱性磷酸酶活性.Western blotting检测血管组织p53蛋白水平,并对血管钙含量和碱性磷酸酶活性与p53的表达进行相关性分析.结果 维持性血液透析患者桡动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为0.81)显著低于同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为1.72),而血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性分别较同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞增加69%和105%(P均＜0.01).相关性分析发现,p53的表达与血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性均成显著负相关(r=-0.77和r=-0.86,P均＜0.01).结论 在5期慢性肾脏疾病维持性血液透析患者中血管钙化广泛存在,血管钙化伴随着血管平滑肌细胞p53蛋白表达的显著下降,这一现象提示慢性肾脏疾病患者血管平滑肌细胞p53表达的抑制可能参与了血管钙化的发生机制.     

钙激动剂介导血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

为探讨钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在雷尼丁刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用，以培养的大鼠血管平滑肌细胞为模型，用雷尼丁刺激其内贮Ca^2 释放入胞浆，环孢素A阻断钙调神经磷酸酶信号通路，维拉帕米阻断钙通道，检测血管平滑肌细胞钙调神经磷酸酶、丝裂素活化蛋白激酶和蛋白激酶C活性，用^3H-亮氨酸及^3H－胸腺嘧啶掺入量作为反应细胞增殖的指标。结果显示，雷尼丁刺激组蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异显著（P＜0．01）；环孢素A及维拉帕米能明显抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白核酸合成速率增高，与雷尼丁刺激组相比差异显著（P＜0．01）。同时发现雷尼丁刺激组钙神经磷酸酶、蛋白激酶C活性与对照组平滑肌细胞相比差异显著（P＜0．05或0．01）。环孢素A和维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞钙调神经磷酸酶活性增高，维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白激酶C活性的增高。提示钙调神经磷酸酶信号通路在雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖中起重要作用，但钙调神经磷酸酶信号通路不是雷尼丁介导平滑肌细胞增殖的唯一信号通路，以丝裂素活化蛋白激酶为核心的信号通路亦参与了雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖。     

吡格列酮通过内质网应激致凋亡途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的　探讨吡格列酮通过内质网应激致凋亡途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制。方法　利用β-甘油磷酸钠联合丙酮酸钠制备钙化血管平滑肌细胞模型,予不同浓度（10、50、100　μmol/L）吡格咧酮干预。用Von　Kossa　染色、茜素红S染色测定钙含量以及碱性磷酸酶（ALP）活性观察细胞钙化程度。采用流式细胞术及Tunel法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR及Western　Blot检测各组细胞GRP78、Caspase-12和Runx2的mRNA及蛋白表达。结果　钙化组其钙含量、ALP活性较对照组细胞增多（P<0.05）,而不同浓度吡格列酮呈剂量依赖性地减轻钙化大鼠血管平滑肌细胞的钙含量和ALP活性（P<0.05）;钙化组其细胞凋亡率较对照组明显升高,而不同浓度吡格列酮呈剂量依赖性地减轻钙化大鼠血管平滑肌细胞凋亡率（P<0.05）;钙化组GRP78、Caspase-12和Runx2　的mRNA及蛋白表达明显升高,而不同浓度吡格列酮呈剂量依赖性地下调钙化大鼠血管平滑肌细胞GRP78、Caspase-12和Runx2的mRNA及蛋白表达（P<0.05）。结论　吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径作用可减轻β-磷酸甘油诱导的血管平滑肌细胞钙化,其作用可能与GRP78、Caspase-12及Runx2表达下调有关。