高通量基因测序技术在自然流产遗传学分析中的应用

目的初步探讨高通量测序技术在自然流产绒毛遗传学分析准确性和异常核型检出率中的作用。方法采用高通量测序和生物信息分析技术,选取常规染色体核型分析结果为46,XY的自然流产绒毛样本进行检测,比较两种检测结果的一致性及差异。结果 (1)常规染色体核型分析技术:14例样本染色体核型分析结果均为46,XY。(2)高通量测序技术:14例样本染色体核型均为46,XY,有拷贝数变异(CNV)改变的占43%(6/14),能检测到250kb~16.5M染色体片段的改变。(3)通过两种检测方法的比较,发现高通量测序技术检测时间短,对染色体结构异常有更高的检出率。结论高通量测序技术更敏感、高效,具有更高的染色体异常检出率。可作为常规染色体核型分析的补充检测手段。     

1389例稽留流产绒毛细胞染色体核型分析

目的探讨在早期稽留流产病例中胚胎绒毛染色体核型分析的意义。方法对1389例稽留流产胚胎绒毛组织进行细胞培养,培养成功的病例进行染色体核型分析,统计学分析。结果 1389例稽留流产胚胎绒毛,培养成功1294例,成功率为93.2%。经染色体核型分析,正常核型为596例,男女比为1：2.19（187/409）;异常核型为698例（54%）,其中三体型为427例,多倍体型为114例,45,X型为89例,染色体结构异常为20例,嵌合体为17例。结论胚胎染色体核型异常是导致稽留流产的重要原因;对流产绒毛组织细胞进行染色体核型分析可以为再次妊娠提供指导依据。     

溶酶体4次穿膜蛋白β在小鼠卵母细胞及早期胚卵中的表达

目的 观察溶酶体4次穿膜蛋白β(LAPTM4β)在小鼠卵母细胞及早期胚卵中的表达,分析新基因LAPTM4β在植入前胚卵发育中的作用,为研究植入前胚卵发育的基因调控提供实验依据.方法 从50只小鼠的子宫或输卵管中收集小鼠卵母细胞及从原核期到胚泡的早期胚卵共50枚.采用激光扫描共焦显微镜技术与免疫组织化学ABC法,观察小鼠卵母细胞及早期胚卵中LAPTM4β的表达;表达结果用Maticam2206图像分析系统进行半定量分析.结果激光扫描共焦显微镜下显示,小鼠卵母细胞和原核期胚卵细胞质的绿色荧光呈不均匀分布,近细胞膜处荧光信号强;2细胞期、4细胞期、8细胞期和桑椹胚卵裂球胞质中绿色荧光均呈局灶性分布,且靠近细胞膜处胞质中绿色荧光均较强,2细胞期中所见极体内也有绿色荧光信号;小鼠胚泡滋养层细胞及内细胞团中均可见中等强度的绿色荧光.免疫组织化学显示,在小鼠卵母细胞中可见LAPTM4β阳性反应颗粒呈浅棕色;原核期、2细胞期、4细胞期、8细胞期胚及桑椹胚,可见深棕色颗粒,且在卵裂球胞质中呈不均匀分布;胚泡的内细胞团及滋养层细胞中均可见棕色阳性反应颗粒.图像分析结果显示,卵母细胞与原核期胚相比,8细胞期与桑椹胚相比,桑椹胚与胚泡相比,LAPTM4β的表达量有显著差异(P<0.05).结论 LAPTM4β在正常小鼠卵母细胞及植入前各期胚卵中均有表达,且具有规律性;不同阶段早期胚卵中LAPTM4β的表达量均高于卵母细胞,推测IAPTM4β与小鼠早期胚卵的细胞分裂、增殖、分化及胚胎发育相关.     

标志物组合检测在益母草肾毒性评价中的应用

目的:采用标志物组合检测的方法评价益母草肾毒性。方法:Wistar大鼠随机分为对照组、益母草水提物组(40 g生药/kg)和醇提物组(40 g生药/kg)。药物组灌胃给予相应剂量的药液,对照组灌胃给予等量纯水,连续9周,停药恢复4周。各组于不同时间点采集血液和尿液样本,末次给药后和恢复期结束时分离肾脏。HE染色后光镜下观察肾组织形态学变化;生化分析仪检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)以及尿液总蛋白(uTP)、尿白蛋白(uALB)、尿肌酐(uCr)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C(CysC)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)以及尿液NGAL(uNGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)、白介素-18(IL-18)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析结合二元Logistic回归分析的方法,比较单一标志物与标志物组合的检验效能。结果:①与同时间点对照组相比,益母草水提物组第9周血清TP水平明显降低(P0.05),第4、8周血清BUN水平显著升高(P0.01);醇提物组第8、9周血清BUN水平显著升高(P0.01),第2周尿液uCr水平显著降低(P0.05)。至恢复期结束,以上指标的组间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。②与同时间点对照组相比,益母草水提物组和醇提物组各时间点血清CysC、NGAL及尿液uNGAL、KIM-1、IL-18水平均显著升高(P0.01);至恢复期结束,水提物组和醇提物组以上标志物水平仍明显高于对照组(P0.01)。③给药9周后,益母草水提物组和醇提物组大鼠出现不同程度的肾小管上皮细胞肿胀及蛋白管型,且醇提物所致的肾损伤更为明显;停药4周后,水提物组和醇提物组大鼠肾损伤有所恢复,但仍可见一定程度的肾小管上皮细胞肿胀。④单一标志物的ROC分析显示,血清标志物CysC、NGAL和尿液标志物uNGAL、KIM-1、IL-18的曲线下面积(AUC)均远大于其他标志物。标志物组合的ROC分析显示,水提物组血清BUN+CysC+NGAL组合AUC为0.999,尿液uNGAL+KIM-1组合AUC为0.991,且均具有较高的敏感性和特异性,检验效能高于其他标志物组合及单一标志物;醇提物组以上两种组合的AUC均为1.000,亦具有较高的检验效能。结论:益母草水提物、醇提物长期给药可诱导大鼠肾损伤,且醇提物所致的肾损伤更为明显;血清BUN+CysC+NGAL及尿液uNGAL+KIM-1组合检测可用于益母草肾毒性的评价。     

高通量测序技术与传统染色体核型分析技术在稽留流产遗传学分析中的比较

目的比较传统染色体核型分析技术和高通量测序技术在稽留流产遗传学分析中的应用,探讨高通量测序在临床遗传学分析中的价值。方法采用绒毛细胞培养及染色体核型分析检测稽留流产绒毛组织1530例;采用高通量测序和生物信息分析技术检测稽留流产绒毛组织例。比较两种方法的一致性及差异。结果 (1)传统染色体核型分析技术:1530例稽留流产绒毛培养成功率为93.5%(1431/1530);在1431例核型分析结果中,染色体正常占44.4%(636/1431);染色体数目异常占53.9%(771/1431)(其中含嵌合体29例);染色体结构异常占1.7%(24/1431)。(2)高通量测序技术:25例稽留流产绒毛样本全部检测成功,成功率100%;染色体正常占28%(7/25);染色体数目异常占56%(14/25)。染色体结构异常(染色体片段的缺失和重复)占16%(4/25)。(3)通过两种检测方法的比较,发现高通量测序技术具有更高的染色体结构异常检出率。结论高通量测序技术用于诊断稽留流产绒毛组织是可行的,与传统染色体核型分析技术相比成功率高,且对染色体结构异常的诊断有较高的敏感性,可以作为传统染色体核型分析技术的补充方法。     

双氢青蒿素通过调控MAPK/PI3K/Akt信号通路抗结直肠癌作用研究

目的：探讨双氢青蒿素（DHA）在体内对人结直肠癌（RKO）细胞的抗癌活性及体外机制。方法：将40只SPF级雄性裸鼠建立RKO荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组及DHA高剂量（200 mg/kg）、低剂量（100 mg/kg）组,每组10只;对比各组裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、血清肿瘤坏死因子（TNF-α）水平等;苏木素-伊红（HE）染色观察各组裸鼠肿瘤组织病理学变化;噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（25、50、100μmol/L）DHA干预0、24、48、72 h内对RKO细胞增殖的影响;流式细胞仪、Hoechst 33258检测（0、50、95、150μmol/L）DHA干预48 h后对RKO细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验观察95μmol/L DHA干预对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DHA对细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax） mRNA表达水平的影响;蛋白质印迹法（Western blot）检测DHA对细胞内Caspase-3、C...     

孕妇人群中常见耳聋基因突变检出率的分析

目的针对孕妇群体进行中国人群常见耳聋基因突变的分子筛查,为耳聋患儿产前诊断提供分子流行病学数据基础,为降低耳聋患儿出生率提供理论依据。方法选取于我院进行正常产检的孕妇,抽取静脉血并提取基因组DNA,利用基因芯片针对中国人群常见的4个耳聋基因GJB2、GJB3、SLC26A4以及线粒体12S r RNA进行分子筛查。对携带耳聋易感基因突变的孕妇的新生幼儿,出生后采用耳声发射和听觉脑干诱发电位进行听力筛查,同时对其丈夫进行耳聋易感基因的分子检测,探讨孕妇常见耳聋基因突变携带率与新生幼儿耳聋的相关性。结果 2 067例受检孕妇中共有110例(5.320%)检测到耳聋基因突变,其中GJB2基因(67例)、GJB3基因(6例)、SLC26A4基因(33例)和线粒体12S r RNA基因(4例)的突变检出率分别为3.240%、0.290%、1.600%和0.190%;其中GJB2基因235 del C、GJB2基因299 del AT双突变1例;GJB2基因299 del AT、GJB3基因538 C>T双突变1例;GJB2基因235 del C、SLC26A4基因IVS7-2 A>G双突变1例。接受后续针对性听力筛查的新生幼儿共108例,其中左耳未通过3例,右耳未通过3例,双耳未通过4例。结论利用遗传性耳聋基因芯片对孕妇群体中具有较高携带率的常见耳聋基因突变进行分子检测、分析,能够方便、快捷、高效的进行耳聋的产前诊断,为降低聋儿出生率提供了理论依据和方法参考。     

利用多平台遗传学技术产前诊断一罕见的含der(6)t(6;22)(q27;q11.2)的非罗氏易位及其随访

目的对一对平衡易位携带者夫妇,利用多平台遗传学技术进行产前诊断,并随访。方法对夫妇双方行染色体核型分析,对羊水细胞行核型分析、染色体微阵列分析(CMA)、荧光原位杂交(FISH),并以新生儿脐血对各检测进行复核;对新生儿随访至1周岁。结果父亲核型为46,XY,t(6;22)(q27;q11.2),母亲为46,XX;胎儿核型为45,XY,der(6)t(6;22)(q27;q11.2)pat,-22,CMA结果显示未测到有临床意义的拷贝数变异,FISH结果显示6号端粒区、22号端粒区和22q11.21区信号无增加或缺失;脐血复查结果与先前相同;对新生儿随访显示生命里程碑节点均正常。结论合理应用多平台遗传学技术,对产前诊断罕见病例十分重要。     

五苓散中桂枝的配伍对水负荷和阳虚模型小鼠利水作用的影响

目的探讨五苓散中桂枝的配伍对水负荷和阳虚模型小鼠利水作用的影响,证明方剂"要药"的客观存在。方法选用昆明种小鼠,实验分两步进行,第一步筛选五苓散的最佳作用剂量,第二步观察五苓散最佳剂量去桂枝、去白术后对其利水作用的影响。①小鼠灌胃蒸馏水复制水负荷模型,30 min后各组灌胃给药干预,观察给药后1 h、2 h尿重。②肌肉注射氢化可的松复制小鼠阳虚模型;第4天开始各给药组同时灌胃给药,正常组、模型组予同体积的蒸馏水,连续7天,第10天下午置代谢笼中观察12 h尿重。结果①五苓散最佳作用剂量:水负荷实验中,与模型组比较,阳性药(速尿)组、五苓散中剂量组尿重明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。阳虚实验中,与模型组比较,五苓散中剂量组尿重明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与五苓散中剂量组比较,阳性药(速尿)组、五苓散低、高剂量组尿重均明显减轻,差异有统计学意义(P0.05)。②五苓散去桂、去术后对水负荷小鼠利水作用影响:与模型组比较,速尿组、五苓散中剂量组、去桂五苓散中剂量组、去术五苓散中剂量组尿重均明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与五苓散中剂量组比较,去桂五苓散中剂量组尿重明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。③五苓散去桂、去术后对阳虚小鼠利水作用影响:与模型组比较,阳性药(金匮肾气丸)组、五苓散中剂量组、去术五苓散中剂量组尿重均明显增加(P0.05);与五苓散中剂量组比较,去桂五苓散中剂量组尿重明显减轻(P0.05)。结论①五苓散中剂量具有最佳的利尿作用;②对于氢化可的松模拟的肾阳虚模型动物,桂枝为五苓散中"要药"。     

新时代下高校家具里的医学智慧

当前各高校招生规模逐步扩大，资产管理面临着严峻的挑战，如何做好家具设计与管理将直接影响师生的工作、学习和生活。文章将从采购与资产管理制度、家具设计存在的问题两方面深入分析高校家具现状，并对新时代下高校家具的设计与管理提出独到见解，使家具集经济、健康、美学、简洁、功能于一体，从中融入医学智慧，营造温馨之家。