川芎嗪对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的:研究川芎嗪对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并探讨川芎嗪治疗肺癌的作用机制。方法:选用肺癌A549细胞体外培养,在不同浓度川芎嗪作用下,应用MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪检测肺癌细胞的凋亡及细胞周期的分布,采用免疫细胞化学方法检测川芎嗪对肺癌A549细胞Bcl-2及Bax表达的影响。结果:川芎嗪对肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且呈时间剂量依赖关系;川芎嗪能够使A549细胞G0/G1期、G2/M期细胞增多,与对照组比,差异显著(P<0.01);川芎嗪能够下调肺癌A549细胞Bcl-2的表达,对Bax无明显影响,使Bcl-2/Bax下降。结论:川芎嗪对肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与川芎嗪能够改变A549细胞周期分布,下调肺癌A549细胞Bcl-2表达,改变Bcl-2/Bax比例,促进肿瘤细胞凋亡等有关。     

苦参碱诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察苦参碱抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Bax及caspase-3蛋白表达水平.结果:苦参碱对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖关系;电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;细胞周期分析显示细胞增殖发生S/G2期阻滞;苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01);而显著升高Bax蛋白表达水平及caspase-3活性.结论:苦参碱可显著抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达水平改变线粒体膜通透性有关.     

鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的: 研究鬼臼素衍生物CN-2对人肺腺癌细胞A549的凋亡诱导作用,并对其分子机制进行初步探讨. 方法: 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Fas及caspase3蛋白表达水平. 结果: CN-2对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用,24, 48, 72 h IC50分别为108.20, 41.28, 20.67 mg/L,电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;DNA电泳可见明显的梯状条带;细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现S/G2期阻滞;CN-2能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05);Fas蛋白表达水平未见明显变化. 结论: CN-2通过诱导A549细胞发生S/G2期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2表达及阻滞细胞周期有关.     

槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响.方法采用MTT试验、流式细胞仪检测槲皮素对体外培养的人肺腺癌A549细胞的抑制作用和细胞周期的变化,电镜观察超微结构变化,免疫组化技术检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果MTT结果显示槲皮素对体外培养的A549具有明显的增殖抑制作用,且具有一定的浓度和时间依赖性;流式细胞仪检测发现,30μg/ml槲皮素作用A549细胞48h后能将细胞阻滞于G0/G1期,且在细胞周期G1峰的左侧出现了凋亡峰;电镜观察发现有凋亡的特征性改变;免疫组化结果显示,槲皮素使Bcl-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论槲皮素能抑制肺腺癌A549细胞的生长,阻止细胞由G0/G1期向S期和G2/M期移行并诱发细胞凋亡,其诱发A549细胞凋亡的机制可能与上调促凋亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达有关.     

洛铂联合放疗对肺癌细胞杀伤作用的研究

目的:研究洛铂联合放疗对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用以及对细胞周期和凋亡的影响?方法: MTT法观察肺癌A549细胞增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,蛋白免疫印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达?结果: 洛铂对肺癌A549细胞有增殖抑制作用,且细胞毒性呈剂量依赖性;洛铂联合放疗组观察到有更高的细胞凋亡率和G2/M期阻滞;蛋白免疫印迹结果显示洛铂联合放疗组Bcl-2表达水平下降,促进凋亡诱导蛋白Bax表达水平升高?结论:洛铂有放疗增敏作用,作用机制可能与抑制Bcl-2表达?促进Bax表达?激活 Bcl-2(Bax)-Caspase信号通路有关?     

罗格列酮对体外培养人肺癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的探讨罗格列酮（Rosiglitazone, ROS）对体外培养人肺癌细胞系A549细胞增殖抑制和凋亡的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞系（HUVEC）、人肺癌细胞系（A549）,每种细胞实验组中分别加入不同浓度罗格列酮,对照组加入等量PBS.采用改良MTT比色法分别检测罗格列酮作用HUVEC、A549细胞不同时间后的细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析法分别检测HUVEC、A549细胞的细胞周期分布及凋亡率;间接免疫荧光流式细胞仪分析法分别检测HUVEC、A549细胞的细胞内蛋白PPARγ表达.结果罗格列酮对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,对HUVEC细胞的增殖抑制作用弱,与A549细胞相比差异有显著性（P〈0.05）;罗格列酮作用于A549细胞后细胞周期分布及凋亡率与HUVEC细胞比较,G0/G1期细胞明显增多,且G1期细胞前出现明显的亚G1凋亡峰;罗格列酮作用于A549细胞后,细胞内 PPARγ的表达进行性上调.结论罗格列酮对肺癌细胞系A549的增殖具有明显抑制作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过活化PPARγ途径诱导细胞凋亡.     

蛇床子素诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞并引起凋亡性死亡

目的 探讨蛇床子素(osthole)对人肺癌细胞A549的杀伤作用及其机制。方法 将人肺癌细胞A549用不同浓度的蛇床子素治疗后,采用MTT法检测蛇床子素对A549细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术检测A549细胞内DNA的含量测定蛇床子素对A549细胞周期的影响、蛇床子素处理后A549细胞凋亡情况;Western blot检测蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2和Cyclin B1及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果 蛇床子素对A549细胞增殖的抑制效应呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组增殖抑制率分别为(25.4±3.2)%、(40.2±3.7)%、(63.7±4.5)%。蛇床子素对A549细胞的凋亡诱导效应也呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组凋亡率分别为(9.4±1.4)%、(17.3±2.5)%、(22.9±3.3)%。蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2、Cyclin B1及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下降,Bax表达显著增高。结论 蛇床子素可诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞,并引起肿瘤细胞凋亡性死亡。     

鸡血藤黄酮类有效部位对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡与线粒体膜电位的影响

目的探讨鸡血藤黄酮类有效部位(spatholobus suberectus column extract,SSCE)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。方法采用细胞增生试剂盒cell counting kit-8,观察SSCE对A549细胞增生的影响;通过Annexin V-PI双染法结合Hoechst33324染色检测SSCE对A549细胞凋亡的影响;应用Mitotracker Red及JC-1染色,检测SSCE对细胞线粒体及线粒体膜电位的影响。结果浓度高于40 mg/L的SSCE对A549细胞生长有抑制作用,且具有浓度时间依赖性。SSCE作用24 h后,A549细胞呈现典型的凋亡现象:膜磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;线粒体由棒状变成颗粒状,并向细胞核聚集;线粒体膜电位下降。结论 SSCE可以诱导人非小细胞肺癌A549细胞发生凋亡,改变线粒体形态且降低其线粒体膜电位。     

蛇床子素诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞并引起凋亡性死亡研究

目的探讨蛇床子素(osthole)对人肺癌细胞A549的杀伤作用及其机制。方法将人肺癌细胞A549用不同浓度的蛇床子素治疗后,采用MTT法检测蛇床子素对A549细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术检测A549细胞内DNA的含量测定蛇床子素对A549细胞周期的影响、蛇床子素处理后A549细胞凋亡情况;Western blot检测蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2和Cyclin B1及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果蛇床子素对A549细胞增殖的抑制效应呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组增殖抑制率分别为(25.4±3.2)%、(40.2±3.7)%、(63.7±4.5)%。蛇床子素对A549细胞的凋亡诱导效应也呈剂量依赖性,50μM、100μM、150μM的蛇床子素组凋亡率分别为(9.4±1.4)%、(17.3±2.5)%、(22.9±3.3)%。蛇床子素处理后A549细胞周期相关蛋白p-Cdc2、Cyclin B1及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下降,Bax表达显著增高。结论蛇床子素可诱导人肺腺癌细胞进入G2/M阻滞,并引起肿瘤细胞凋亡性死亡。     

5-氮-2′-脱氧胞苷对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:通过体外实验观察DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2′脱氧胞苷(5-aza-2′deoxycytidine, 5-aza-dC)对人肺腺癌细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响,初步探讨其在治疗肺部肿瘤的作用及可能机制。方法：分别以0.5、2.0、10.0 μmol/L的5-aza-dC处理人肺腺癌A549细胞,用MTT法测定药物干预72 h后的光密度值,计算抑制率,流式细胞仪检测5-aza-dC对肺癌细胞株细胞周期及凋亡的影响,实时定量PCR检测相关基因p21、Cyclin D1、Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果：5-aza-dC能抑制人肺癌细胞株A549的增殖,且呈浓度依赖性; G0/G1期细胞比例下降,S期及G2/M期细胞比例明显高于对照组,出现G2/M细胞周期阻滞;同时,5-aza-dC能诱导A549细胞凋亡;与对照组比较,各药物干预组p21 mRNA表达升高(均P＜0.01),而Cyclin D1 mRNA表达无明显变化(P＞0.05);与对照组比较,各药物干预组Bax、Bcl-2 mRNA表达均明显降低(均P＜0.01),且Bax/Bcl-2增高。结论：5-aza-dC能抑制肺癌细胞株的增殖、引起G2/M细胞周期阻滞,并促进凋亡,其机制可能与p21基因的上调及Bax/Bcl-2比值改变有关。     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。     

尼美舒利对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法、流式细胞仪（FCM）、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察细胞形态等技术,研究尼美舒利对人肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制和促进凋亡的影响。结果MTT比色法显示塞来昔布对A549细胞有较强的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;FCM显示有凋亡峰出现,凋亡率在（12.69±0.87）%～（43.87±1.53）%;尼美舒利使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定效应关系;荧光显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征：细胞体积缩小、细胞核固缩,凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。结论尼美舒利体外能够显著抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用

目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用.方法 分别以体外药物敏感实验、流式细胞术观察TSA处理肺腺癌细胞株A549后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,Western blot检测p21及细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平的变化.结果 TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;TSA作用48及96h后,A549细胞凋亡、G0/G1期及G2/M期细胞显著增加(P<0.05);S期细胞显著下降(P<0.05).p21蛋白表达显著增强,磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 HDAC抑制剂TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,阻断ERK通路的活化,从而引起细胞周期的阻滞和细胞凋亡.     

丙戊酸钠抑制肺癌细胞株A549增殖的研究

目的研究丙戊酸钠（sodium valproate,VPA）对肺癌细胞株A549细胞增殖的影响。方法体外不同浓度VPA不同作用时间处理人肺癌细胞株A549,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期与细胞凋亡的改变。结果2.0 mmol/L VPA作用72 h细胞形态明显改变、细胞数明显减少。1.0mmol/L VPA作用72 h后,细胞增殖被抑制,抑制率为（15.8±2.8）%,与同期对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;提高处理浓度或延长作用时间,抑制作用有加强趋势。1.0 mmol/L VPA作用72 h后可改变细胞周期分布,G1期细胞比例为（72.2±3.4）%,与同期对照组相比差异显著;2.0 mmol/LVPA处理24～72 h后G1细胞比例由（64.5±3.7）%增加至（79.8±4.4）%,而S期细胞由（30.7±5.17）%降低至（14.2±3.37）%;提高处理浓度或延长作用时间均使G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少。2 mmol/L VPA作用24～72 h可提高细胞凋亡率,由（7.30±1.87）%增加到（19.85±2.40）%。结论VPA可抑制肺癌A549细胞生长,改变细胞周期分布、促进细胞凋亡。     

培美曲塞二钠与吉非替尼对肺腺癌细胞的放射增敏作用

目的：研究培美曲塞二钠与吉非替尼单独及联合运用对肺腺癌细胞放射增敏作用及机制。方法：单独或联合使用培美曲塞二钠和吉非替尼处理人肺腺癌细胞株A549,使用噻唑蓝比色法（MTT）检测药物对细胞增殖的影响;采用克隆形成试验检测药物联合放射线对细胞的生长抑制作用;使用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot检测细胞内Akt和p-Akt的表达变化。结果：培美曲塞二钠和吉非替尼对人肺腺癌细胞A549增殖具有抑制作用,体外培养克隆形成实验分析显示,放疗+两药联用组的准阈剂量（Dq）、平均致死剂量（D0）及2 Gy照射时的存活分数（SF2）均明显低于单纯放疗组、放疗+培美曲塞二钠组及放疗+吉非替尼组;培美曲塞二钠和吉非替尼放射增敏比（sensitivity enhanced ratio,SER）分别为1.17和1.48,两药联合 SER为2.62。培美曲塞二钠和吉非替尼使细胞阻滞在G1/G0期,与放射线联合作用后,S期细胞比例进一步降低。培美曲塞二钠和吉非替尼均可以提高放射线诱导的凋亡,两药联用后细胞的凋亡率最高。药物作用前后、照射前后及药物增敏照射后Akt水平没有明显改变;培美曲塞二钠和吉非替尼均能抑制p-Akt表达;与单纯照射组相比,培美曲塞二钠和吉非替尼联合照射组p-Akt水平显著减低,p-Akt/Akt的比值最低。结论：培美曲塞二钠和吉非替尼各自均有放射增敏作用,两药联合使用可以明显提高放疗效果,其机制可能与减少S期细胞、增强放射线诱导凋亡和抑制PI3K/Akt信号转导通路有关。     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。     

4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bcl-2家族蛋白相关性研究

目的研究4-HPR对肺腺癌细胞A549体外生长的影响及机制的初步探讨。方法MTT法观察4-HPR对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用,流式细胞术观察4-HPR诱导A549细胞凋亡作用和对细胞周期的影响,Western blot分析凋亡相关蛋白表达。结果4-HPR抑制A549的增殖呈剂量依赖性;4-HPR诱导A549细胞凋亡,凋亡过程伴随Bcl-2、Bcl-xS/L表达下降,而Caspase-3、Caspase-9的表达无明显变化。结论4-HPR可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,通过降低Bcl-2和Bcl-xS/L促进A549细胞凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。     

萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮（XX0335）抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法 实验分为4组：对照组（含0.1% DMSO的培养液）、另外3组为不同浓度（6.25、12.5、25 μg/mL）的XX0335（该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%）。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响,通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响;通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响,动物实验使用4周龄小鼠共10只,随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下,待26 d后瘤体长径长至1 cm时,对照组小鼠注射无菌生理盐水（200 μL）,对实验组注射化合物XX0335（12.5 μg/mL,200 μL）,隔天注射1次,共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果 CCK-8实验表明,A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降（P<0.01）。EdU实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖（P<0.001）。流式细胞术检测结果表明,细胞凋亡较对照组呈剂量依赖性上升（P<0.01）,且细胞停滞于G1期。与对照组相比,AKT、mTOR的磷酸化受到了明显抑制,cleaved PARP表达量升高,且CyclinD1的蛋白表达量下降。裸鼠荷瘤实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小（P<0.01）。结论 XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡,且细胞周期阻滞于G1期,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。