耐多药结核患者外周血Th17细胞变化及其意义

目的 观察耐多药结核(MDR-TB)患者外周血辅助性T(Th)17细胞的水平,探讨人体抵抗MDR-TB的免疫学机制.方法 选取MDR-TB患者25例(MDR-TB组),初治肺结核患者23例(TB组),健康正常人25例(HC组).采用流式细胞分析法检测各组人群外周血Th17细胞占CD4+T细胞比例.应用流式微球分析法检测各组人群外周血Th17相关的白细胞介素(IL)17和IL-6的表达.结果 MDR-TB组和TB组患者外周血Th17/CD4+T细胞比例分别为(2.18±0.65)%和(1.32±0.34)%,明显高于HC组的(0.41±0.10)%(P<0.05);MDR-TB组的Th17细胞比例亦高于TB组(P<0.05).MDR-TB组和TB组患者外周血IL-17水平分别为(6.45±1.88)Pg/ml和(3.53±0.38)pg/ml,明显高于HC组的(2.39±0.46)pg/ml(P<0.05);MDR-TB和TB组间差异亦有统计学意义(P<0.05).MDR-TB组患者外周血IL-6水平为(571.70±188.24)pg/ml,明显高于TB组的(18.50±5.87)pg/ml和HC组的(5.76±1.86)pg/ml(P<0.05).三组外周血IL-17水平与IL-6水平呈正相关(r=0.824,P<0.01).结论 MDR-TB患者外周血Th17细胞比例增加,IL-17、IL-6水平升高.Th17细胞可能参与MDR-TB的发病.     

滋肾通络方对胶原性关节炎小鼠Th17/Treg细胞分化及平衡的影响

目的观察滋肾通络方(ZTF)对胶原性关节炎(CIA)小鼠Th17/Treg细胞分化平衡的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法 DBA/1小鼠随机分为正常对照组、模型组和ZTF组(8.4 g生药·kg~(-1)),造模21 d后每日灌胃给药,连续4周。检测关节炎指数、关节病理改变、血浆IL-10和IL-17水平、外周血和脾脏Th17/Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10、IL-17 mRNA水平。结果 CIA小鼠踝关节病变明显,血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达明显升高;血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA表达明显降低。ZTF能明显减轻CIA小鼠关节病变,降低血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达;升高血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA水平。结论 CIA小鼠存在Th17/Treg细胞失平衡,ZTF可调节Th17/Treg细胞比例,重构Th17/Treg细胞平衡,调节相关细胞因子释放,这可能是ZTF治疗类风湿关节炎的机制之一。     

辅助性T细胞9在多发性大动脉炎中的潜在作用

目的检测辅助性T细胞9（Th9）及相关细胞因子白细胞介素9（IL 9）在多发性大动脉炎中的改变并探讨二者在多发性大动脉炎中的潜在作用。方法采集11例活动期多发性大动脉炎患者和年龄、性别匹配的10例健康体检者的外周血单个核细胞（PBMC）和血清。采用酶联免疫吸附试验检测血清IL 9水平,流式细胞术检测PBMC中Th9细胞百分数。结果多发性大动脉炎患者组血清IL 9水平为（10.3±4.5）ng/L,健康对照组（健康体检者）血清IL 9水平为（3.0±2.0）ng/L（P〈0.05）。活动期多发性大动脉炎患者PBMC中CD＋4IL 9＋T细胞数为（7.81±3.17）%,CD＋4PU.1＋T淋巴细胞数为（4.90±1.23）%;CD＋4 T细胞中IL 9＋PU.1＋T细胞（Th9细胞）数为（8.25±3.73）%,而健康对照组外周血CD＋4IL 9＋T细胞、CD＋4PU.1＋T细胞及Th9细胞均未检出（P〈0.05）。IL 9、Th9细胞与多发性大动脉炎患者红细胞沉降率、C反应蛋白及美国国立卫生研究院大动脉炎活动性积分无相关性。结论Th9细胞及IL 9可能参与了多发性大动脉炎的免疫紊乱。     

树突状细胞在变应性鼻炎发病中的作用

目的 探讨树突状细胞(DC)在变应性鼻炎患者外周血中的变化及对Th1/Th2细胞诱导分化的效应.方法 用流式细胞术分析变应性鼻炎组(15例)、慢性鼻炎组(15例)及对照组(15例)患者外周血CD3-CD64+细胞和CD4+ CD3-CD11c-细胞.将培养成熟的两种细胞分别与CD4+ CD45RA+T细胞和抗CD3及抗CD28单抗共同培养,用ELISA法检测上清液细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-5和IL-10的含量.结果 在变应性鼻炎组外周血中,以CD4+ CD3-CD11c-细胞百分率增高为特征,经IL-3和CD40L等细胞因子培养后分化成熟成淋巴样细胞来源的树突状细胞(DC2);而慢性鼻炎组外周血中以CD3-CD64+细胞占优势,经用粒细胞集落因子(GM-CSF)+CD40L培养后分化成熟成髓样细胞来源的树突状细胞(DC1).结论 变应性鼻炎组外周血中DC的前体细胞(pDC1)/(pDC2)的失衡可能是导致变应性鼻炎患者外周血Th1/Th2失衡的重要原因之一,可能与变应性鼻炎发生密切相关.     

类风湿关节炎患者Th1、Th17细胞的表达

目的 分析类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节滑液中Th极化细胞(Th1、Th17细胞)的表达.方法 流式细胞技术测定RA患者外周血、关节滑液中CD4T细胞上 IFN-γ~+ IL-17~- (Th1)、IL-17~1 IFN-γ(Th17)的表达,并与健康人比较,分析疾病活动指数(DAS28)和Th极化细胞表达量、Th1/Th17比值之间的关系.结果 RA患者关节滑液Th1、Th17细胞的平均百分比与RA外周血、健康人外周血比较,差异有统计学意义(P＜0.01).RA患者关节滑液中Th1细胞、Th1/Th17细胞比值与DAS28指数呈正相关(P＜0.01).结论 在RA疾病部位关节液中是Th1细胞占优势,IL-Th1细胞的表达与疾病活动性密切相关.     

卡介苗对支气管哮喘患者外周血单个核细胞Th1/Th2平衡的影响

目的:研究减毒活菌卡介苗(BCG)干预对支气管哮喘患者外周血单个核细胞Th1/Th2平衡的影响。方法:抽取哮喘患者(哮喘组)外周血样本20例,同期健康献血员(对照组)外周血样本10例。分离外周血淋巴细胞并用BCG(100mg/L)干预培养,于培养前后分别采用流式细胞仪测定外周血Th1、Th2百分率及Th1/Th2比,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定培养前后外周血淋巴细胞白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ表达水平。结果:哮喘组经BCG干预前Th1百分率和Th1/Th2均低于对照组,Th2细胞百分率高于对照组;干预后,Th1百分率和Th1/Th2均升高,Th2细胞百分率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。哮喘组经BCG干预前IFN-γmRNA表达水平低于对照组,IL-4mRNA表达水平高于对照组;干预后,IFN-γmRNA表达水平升高,IL-4mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:哮喘患者中Th2型免疫应答占优势,卡介苗干预可在基因表达水平和细胞数量上纠正哮喘患者的Th1/Th2失衡。     

来氟米特对类风湿关节炎患者外周血Thl/Tcl细胞的影响

目的探讨来氟米特对类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞亚群的影响.方法采用细胞内细胞因子染色、三色流式细胞分析法检测单个细胞分泌细胞因子的情况.收集25位RA患者和10例接受来氟米特治疗前及治疗3个月后的RA患者的外周血,对CD4+、CD8+细胞分泌IL-4和IFN的情况进行检测.结果RA患者和健康对照组的外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞中,分泌IFN(的细胞群均比分泌IL-4的细胞群多,同健康对照组相比,RA患者外周血中Th1型细胞明显减少.产生IFN的Th1型、Tc1型细胞和产生IL-4的Th2型细胞在接受来氟米特治疗后明显减少,而Tc2型细胞则无明显增加或减少.结论来氟米特可能通过抑制Th1型和Tc1型的分化、减少Th1/Tc1型细胞因子如IFN(的分泌而发挥抗炎及改变类风湿关节炎病程的作用.     

Treg/Th17细胞的比值在慢性乙型肝炎患者外周血的变化及意义

目的探讨调节性T细胞(CD4+FoxP3+T细胞,Treg)/辅助性T细胞17(CD4+IL-17+T细胞,Th17)的比值在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中的变化及其与肝损伤的相关性。方法用流式细胞术检测25例中重度CHB患者(A组)、30例轻度CHB患者(B组)及30例健康对照者(C组)外周血Treg细胞及Th17细胞的百分率,并计算出两者的比值;同时测定三组血清ALT水平。结果 A组外周血Treg/Th17细胞的比值为6.86±1.83,显著低于B组的8.39±2.15(P<0.05)和C组的9.41±3.57(P<0.01);A组外周血Treg/Th17细胞的比值与血清ALT水平呈显著负相关(r=-0.479,P<0.05),B组外周血Treg/Th17细胞的比值与血清ALT水平无显著相关性(r=-0.201,P>0.05)。结论外周血Treg/Th17细胞的比值在CHB慢性进展的各个临床阶段可能有所不同;中、重度CHB患者外周血中可能存在Treg/Th17细胞的失衡,且失衡程度可能还与肝损伤的程度相关。     

真性红细胞增多症患者外周血Th17和CD4~+CD25~+调节性T细胞亚群研究

目的探讨真性红细胞增多症(PV)患者外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。方法选取30例初发(PV)患者,30名健康体检者作为对照。应用流式细胞术检测PV患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白细胞介素(IL)-17,并与健康对照组比较。结果 1PV组外周血Th17淋巴细胞比例(2.9±5.6)%高于健康对照组(1.6±4.2)%;PV组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例(2.0±5.4)%,低于健康对照组(4.6±4.4)%;2PV组血浆中IL-17表达水平(36±20)pg/mL,高于健康对照组水平(21±15)pg/mL;PV组IL-21水平(36±14)pg/mL,高于健康对照组(29±15)pg/mL。结论 PV患者外周血Th17淋巴细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,发病可能与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

化疗前后肺癌患者CD4~+细胞因子水平的观察

目的观察化疗前后Th1、Th2细胞分泌的细胞因子表达的变化,探讨其与疗效的关系。方法采取小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)两组患者化疗前及化疗后2周静脉血标本,用Th1、Th2细胞因子标记流式细胞技术检测干扰素(IFN)γ-、肿瘤坏死因子(TNF)α-、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10,分别比较SCLC及NSCLC患者化疗前后外周血CD4+细胞分泌细胞因子水平的变化。结果小细胞及非小细胞肺癌患者外周血CD4+T细胞分泌IFNγ-、TNFα-、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、Th1/Th2(γ/4)水平化疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论针对局部晚期和晚期肺癌患者的化疗,不能纠正Th1/Th2漂移,对中晚期肺癌尤其是化疗患者,改善机体免疫功能,重建机体防御系统是很重要的治疗措施。     

CD4~＋CD25~＋调节性T细胞在肺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨肺癌患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的表达及其临床意义。方法应用流式细胞术分析45例肺癌患者与15例健康对照组外周血CD4＋CD25＋Treg细胞占CD4＋T细胞的比例。结果肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞占CD4＋T细胞比例为（17.8±6.6）%,表达高于对照组（6.49±0.5）%（P〈0.001）。肺癌患者外周血中Treg细胞数量在不同临床分期和组织学分化程度中的差异有统计学意义（P〈0.01）,但与患者的病理类型无关（P〉0.05）。结论 Treg细胞在肺癌患者中表达明显升高,是肺癌患者免疫功能紊乱的一个证据。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及临床意义

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法应用流式细胞术分析30例晚期肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达水平,与10例健康人比较。结果晚期肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞数量增加（17．9±6．1）％,表达高于正常人（6．81±0．4）％（P〈0．001）。肺癌患者外周血中Treg细胞数量与患者的病理类型无关（P〉0．05）,但与临床分期和组织学分化程度有关（P〈0．01）。结论Treg细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。     

TLR9信号通路参与急性肺损伤的作用机制研究

目的研究Toll样受体-9在急性肺损伤中的作用机制,为临床诊疗提供理论依据。方法分离40例急性肺损伤患者的外周血单个核细胞,采用RT—PCR检测Toll样受体-9mRNA表达,外周血单个核细胞（PBMC）经过非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸（CpGODN）和不含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸（non—CpGODN）、空白培养三种形式培养72h。采用3H—TdR掺入法测定PBMC增值变化,采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例、T细胞表面CD69分子变化及CD8＋T细胞内IFN-γ和IL-4的表达。采用ELISA法对PBMC上清液IFN-α的浓度,并评价其对氯喹和抑制性ODN的反应程度。结果急性肺损伤患者PBMC表达TLR9mRNA的表达强度为（0．75±0．08）,与健康组（0．76±0．09）比较差异无统计学意义（P〉0．05）;CpGODN诱导急性肺损伤患者PBMC增殖（P〈0．05）,增加CD3＋T细胞表面CD69分子的表达（P〈0．05）;增强CD8＋T细胞产生IFN-γ的能力（P〈0．05）;增强CD4＋T／CD8＋T比值（P〈0．05）;CpGODN可促进IFN-α的分泌（P〈0．05）;氯喹和抑制性ODN会抑制CpGODN产生IFN—α。结论TLR9参与急性肺损伤患者的免疫调节,其激活效应包括促进PMBC活化、增加PBMC中CD4＋T的比例,诱导并增殖IFN-α产生,促进CD8＋T分泌IFN-γ。     

肿瘤负荷对胃癌患者免疫功能的影响

目的探讨胃癌患者外周血T淋巴细胞、单核细胞的表面分子变化及Th1／Th2的漂移,并分析肿瘤负荷对胃癌患者的免疫功能的影响。方法选取胃癌患者30例及同期体检的健康志愿者30例,采用流式细胞仪检测和分析外周血T淋巴细胞、单核细胞的表面分子及Th1／Th2细胞因子的变化。结果T淋巴细胞中CD3^＋、CD4^＋28^＋／CD3^＋、CD8^＋28^＋／CD3^＋水平均低于对照组（P〈0．01）;CD8^＋3^＋,CD28^-较正常组升高（P〈0．01）;单核细胞的表面分子CD40与正常对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,但是CD80与CD86均相对于正常水平降低（P〈0．01）;Th1细胞因子（IL-2、IFN-γ）降低（P〈0．01）;Th2细胞因子（IL-4、IL-10）的表达较正常组升高（P〈0．01）。结论胃癌患者的免疫功能受损,胃癌的发病可能与免疫功能低下有一定关系;Th1／Th2失衡,表明肿瘤细胞出现免疫逃避与胃癌的发展可能也有关系。     

TGFβ1和CD4＋CD25＋调节性T细胞表达在系统性红斑狼疮发病中的意义

目的检测系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血转化生长因子β1（TGFβ1）和CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的表达,探索其在SLE发病中的作用及临床意义。方法分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）和二色荧光抗体标记流式细胞仪法,对SLE患者和正常对照组血清TGFβ1和外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞进行检测,并结合临床资料进行分析。结果血清TGFβ1和外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞表达在SLE活动组[（715±414）pg/ml、（4.53±0.85）%]明显低于正常对照组[（1314±129）pg/ml、（8.78±2.87）%]和SLE稳定组[（1423±153）pg/ml、（10.89±1.41）%]（均P〈0.05）,而SLE稳定组和正常对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;SLE患者TGFβ1和CD4＋CD25＋调节性T细胞表达量均与疾病活动度SLEDAI积分呈负相关（r=-0.68,P=0.002;r=-0.78,P=0.000）,与其他临床指标如24h尿蛋白量、抗ds-DNA抗体等无相关性。TGFβ1表达与CD4＋CD25＋调节性T细胞数之间亦未见相关性（r=0.51,P=0.113）。此外,血清TGFβ1表达尚与血小板数量和血红蛋白量成正相关（r=0.71,P=0.001;r=0.44,P=0.042）。结论活动SLE患者血清TGFβ1和外周血CD4＋CD25＋细胞表达减少,提示两者可能参与SLE发病,并对判断疾病活动度有一定的临床意义。     

T细胞免疫球蛋白域和黏液素样域-1表达的研究

目的探讨人辅助性T细胞(Th细胞)表达T细胞免疫球蛋白域和黏液素样域-1(TIM-1)在变应性鼻炎(AR)中的作用。TIM-1基因被认为是一种特应性疾病易感基因。方法密度梯度离心分离25名健康人和25例AR患者外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选CD4+T细胞(Th细胞),CD4+CD45RA+T细胞(初始T细胞),免疫荧光和流式细胞仪检测TIM-1阳性细胞。对比植物血凝素(PHA,20μg/ml)非特异性刺激上述细胞后表达TIM-1阳性细胞的差异。结果AR患者组CD4+T细胞中TIM-1阳性CD4+T细胞(9.5±1.5)%,高于健康组(3.1±0.3)%(P<0.05);PHA刺激后两组表达TIM-1的CD4+T细胞均高于刺激前(P均<0.05)。结论AR患者中表达TIM-1的辅助性T细胞高于健康者,提示TIM-1的蛋白表达与驱动辅助性T细胞分化有关,从而影响变应性鼻炎免疫机制发生。     

血清AMA-M2亚型、调节性T细胞与IL在PBC患者中的表达及临床意义

目的 研究原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者血清抗线粒体抗体亚型M2（autimitochondria antibody typeⅡ,AMA-M2）、调节性T细胞和相关白介素（IL）的表达及相关性,以探讨其诊断价值.方法 分别收集PBC确诊患者组（42例）、疾病对照组（36例）和健康对照组（50例）的血清样本,采用免疫印迹法检测AMA-M2;流式细胞术检测CD4±CD25＋调节性T细胞和CD4＋、CD8＋、CD4＋、CD8＋水平;IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10采用ELISA定量方法测定.结果 PBC组、健康对照组和疾病对照组AMA-M2阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）.与AMA-M2阴性组比较,阳性组CD4＋、CD4＋/CD8＋分别增加11.57％和72.79％,CD4＋CD25＋、CD8＋水平分别降低61.50％和35.97％,IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10分别升高189.65％、24.29％、2184.54％、230.33％和1281.37％,且差异均有统计学意义（P＜0.05）;但与弱阳性组相比,阳性组血清中只有CD4＋、CD8＋、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 PBC患者免疫功能异常与IL-2、IL-6、IL-8、IL-10高水平表达相关,血清AMA-M2阳性检测、外周血调节性T细胞比例及细胞因子浓度的检测可为临床诊断PBC提供依据.     

HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗HER-2阳性乳腺癌的初步研究

目的 探讨HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗HER-2阳性乳腺癌的安全性和有效性.方法 15例HER-2阳性及HLA-A2阳性的乳腺癌患者（Ⅱ～Ⅲ期）经标准治疗后行HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗.检测治疗前后患者外周血淋巴细胞亚群、Th1型和Th2型细胞因子水平,以及IFN-γ分泌型CD8＋T淋巴细胞比例,观察治疗相关毒副反应及近期临床疗效.结果 治疗后外周血CD3＋比例、CD3＋CD4＋比例和CD4＋/CD8＋比值较治疗前明显升高（P〈0.05）,治疗后血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ较治疗前明显上升（P〈0.05）,IL-4、IL-10、IL-12无明显变化（P＞0.05）,IL-10/TNF-α比值较治疗前显著下降（P〈0.05）.IFN-γ分泌型CD8＋T淋巴细胞比例较治疗前也显著上升（P〈0.05）.在治疗结束后的随访时间内,15例患者取得了13例病情稳定,2例病情进展的近期临床疗效.所有治疗患者均未出现3～4级不良反应.结论 HER-2阳性乳腺癌行HER-2多肽负载自体树突状细胞治疗是安全可行的,可改善患者细胞免疫功能并提高Th1型细胞因子水平,促进特异性抗肿瘤细胞免疫应答并产生一定临床获益.     

溃疡性结肠炎患者肠黏膜CD4＋CD25＋调节性T细胞及Foxp3表达水平的研究

目的通过分析溃疡性结肠炎（UC）患者肠黏膜中CD4＋CD2＋5调节性T细胞及其特异性标志物Foxp3的表达特点,探讨CD4＋CD2＋5调节性T细胞和Foxp3在UC发病机制中的作用。方法 18例UC活动期患者和12例健康体检者作为正常对照组,分别经电子肠镜活检肠黏膜组织,以流式细胞术检测肠固有层单个核细胞（LPMC）中CD4＋CD2＋5T细胞和CD4＋T细胞比例,应用免疫组化方法检测肠黏膜中Foxp3的表达。结果 UC患者肠黏膜CD4＋CD2＋5T细胞占CD4＋T细胞比例和Foxp3＋T细胞表达明显高于正常对照组（P〈0.05）,两组LPMC中CD4＋T细胞比例无明显差异（P〉0.05）。结论 CD4＋CD2＋5调节性T细胞在UC的发病机制中起重要作用,参与肠黏膜炎症的发生、发展,Foxp3是CD4＋CD2＋5调节性T细胞的特异性表达因子,外周血调节性T细胞数量减少可能是疾病发生的重要因素。