朝鲜淫羊藿酸性多糖的理化特性及对HepG2细胞脂质堆积的改善作用＊

目的 对比研究朝鲜淫羊藿酸性多糖酯化还原前后的理化特性，并探讨其改善油酸诱导的肝癌HepG2细胞脂质堆积活性的差异。方法 采用高效凝胶渗透色谱法测定朝鲜淫羊藿酸性多糖（EFPA）的均一性和分子量，高效液相色谱法测定EFPA和酯化还原后朝鲜淫羊藿酸性多糖（EFPA-R）的单糖组成；采用油酸（OA）处理HepG2细胞诱导建立脂质蓄积模型，不同浓度EFPA与EFPA-R（10、30、100、300 μg·mL^-1）分别和OA共同作用于细胞24 h，采用CCK-8试剂盒测定细胞存活率，油红O染色观察细胞内脂滴蓄积情况，并采用试剂盒测定细胞内总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。结果 EFPA为成分均一的多糖组分，分子量为125.8 kDa，由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和阿拉伯糖组成，摩尔比为1.7∶7.4∶1.4∶1.8∶1.0，葡萄糖占比最大，EFPA-R由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为0.8∶10.6∶2.1∶1.0；在10-300 μg·mL^-1范围内，EFPA和EFPA-R对HepG2细胞的抑制作用较弱，作为给药浓度；与空白组相比，模型组细胞中TC、TG含量显著升高（P < 0.01），细胞内红色脂滴显著增多，与模型组相比，EFPA可显著降低细胞中TC、TG含量（P < 0.01），明显减少细胞内红色脂滴（P < 0.05或P < 0.01），EFPA-R干预后细胞则无明显变化。结论 EFPA可明显改善HepG2细胞脂质堆积情况，且呈现剂量依赖性，而半乳糖醛酸（GalA）的存在可能是其抑制HepG2细胞脂质蓄积的关键因素。     

微小RNA-30a-5p调控喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的　探讨miR-30a-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法 用实时荧光定量PCR检测喉癌及癌旁组织中miR-30a-5p的表达；将Hep-2细胞分为NC组（转染miR-30a-5p mimics阴性对照）、miR-30a-5p组（转染miR-30a-5p mimics）、anti-NC组（转染miR-30a-5p inhibitor阴性对照）和anti-30a-5p组（转染miR-30a-5p inhibitor），MTT实验、平板克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 双染实验分别检测细胞增殖、克隆形成和细胞凋亡情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a-5p和SOX9的靶向关系。结果　与癌旁组织表达量（1.00±0.10）相比，喉癌组织中miR-30a-5p的表达水平（0.37±0.03）显著降低（P <0.05）。与NC组相比，miR-30a-5p组细胞活性（48小时：0.42±0.03 vs 0.58±0.04）降低，细胞克隆数（75.36±6.85 vs 136.25±10.50）降低，细胞凋亡率[（23.86±2.21）% vs（9.95±1.16）%]升高（P <0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，转染SOX9-WT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性明显降低（P <0.05），而转染SOX9-MUT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性无显著变化。anti-miR-30a-5p组对He p -2细胞的作用与miR-30 a -5p组相反。结论  miR-30a-5p可能通过靶向下调SOX9抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进细胞凋亡。     

人胰岛素样生长因子在pET-DsbA载体中的克隆及表达

目的 通过重组技术,对胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因进行缺失、突变以获得最有利于高水平表达的IGF-Ⅰ cDNA.构建原核表达载体,并进行表达,以获得能够高水平表达高活性产物的基因工程菌珠.方法 提取人肝脏组织总RNA,RT-PCR后琼脂糖电泳初步鉴定产物.将cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对IGF-Ⅰ基因进行序列分析.采用PCR法从克隆质粒中扩增IGF-Ⅰ片段,亚克隆至pET-DsbA原核表达载体,酶切鉴定,并进行序列测定.转化到大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG诱导表达,聚丙稀酰胺凝胶电泳、Western Blot分析目的蛋白.结果 成功构建原核表达载体pET-DsbA-IGF-Ⅰ,测序结果与预期序列完全一致,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达出IGF-Ⅰ融合蛋白.结论 IGF-Ⅰ融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) PLysS中的表达,对进一步研究IGF-Ⅰ的功能及开发其生物制品具有重要意义.     

细菌质粒谱分析技术

细菌质粒是一种染色体外具有自主复制能力的环状DNA 分子,其分子量约为1～300kb。自然状态下完整的质粒分子是双链超螺旋构型,它并非细菌生存繁殖所必需.质粒能介导细菌的抗药性及许多其他生物学特性如细菌毒素,降解复杂有机化合物、产生限制性内切酶和修饰酶等。多数细菌含有大小不一、     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.     

高通量基因测序在胎儿性染色体非整倍体产前检测中的应用价值

目的:探讨应用高通量基因测序检测胎儿性染色体非整倍体的可行性?方法: 选择2012年5月—2015年5月在常州市妇幼保健院产前诊断中心就诊的3 218例单胎孕妇,在知情同意的原则下抽取孕妇外周血,提取血浆中胎儿游离DNA,制备文库,采用Illumina NextSeq CN500测序平台对其进行测序分析,对测序提示的性染色体异常患者行羊膜腔穿刺,羊水细胞培养后染色体G显带核型分析?结果:3 218例样本中,高通量基因测序提示16例性染色体非整倍体?经知情同意,12例孕妇自愿接受羊水产前诊断,其中8例羊水G带核型结果与测序结果一致?包括3例45,X;3例47,XXX;2例47,XXY;其余4例G带核型正常?结论:高通量基因测序可用于胎儿性染色体非整倍体的产前检测,但还需改进测序方案,积累临床数据,提高效果?     

硬膜下积脓的临床特点及治疗分析

目的探讨硬膜下积脓(Subdural empyema,SDE)的临床特点,为临床治疗提供借鉴。方法回顾性分析本科保守治疗的硬膜下积脓病例1例,并对已有文献报道进行综述,总结其临床、影像学表现及治疗。结果文献报道共50例患者,48例外科手术治疗,2例内科保守治疗。SDE起病急,主要临床表现为大脑镰综合征、抽搐,意识障碍。头磁共振表现:大脑镰及小脑幕下积脓呈长T1,长T2信号,FLAIR呈高信号,DWI呈高信号,积脓周围脑膜强化。治疗上主要以外科手术为主,少数病例通过合理的抗菌药物治疗也可好转。结论镰幕硬膜下积脓的临床特点是大脑镰综合征和镰幕下积脓;以外科治疗为主,内科保守治疗也是一种可行的治疗方法。     

子宫输卵管四维超声造影在输卵管通畅度评估中的应用价值

目的探讨子宫输卵管四维超声造影在输卵管通畅度评估中的应用价值。方法选取2019年6月至2020年5月于医院行输卵管通畅度评估的63例不孕症患者(126条输卵管)作为研究对象,均先后接受子宫输卵管四维超声造影检查和腹腔镜亚甲蓝通液术检查,比较两组检查的诊断结果和并发症发生率。结果两种检查的诊断结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);子宫输卵管四维超声造影检查的并发症发生率为7.94%,低于腹腔镜亚甲蓝通液术检查的17.46%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论子宫输卵管四维超声造影在输卵管通畅度评估中的应用价值显著,其诊断效果与腹腔镜亚甲蓝通液术检查相当,且安全性较高。     

为了每个家庭的和谐幸福

与女孩相比，男孩更能降低父母离婚率：年龄和学历差距越小，婚姻越稳定：中国的婆媳关系不和与儒家文化有关，西方婆媳之间很少存在矛盾是因为信奉基督教。2011年7月9日至10日，