突变靶基因xylE转基因小鼠

本研究以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒为载体，选用恶臭假单孢杆菌ＴＯＬ质粒上的ｘｙｌＥ基因作为突变靶基因组构建的重组构件，经微注射导入ＩＣＲ小鼠５４９枚受精卵雄原核，将存活的３５２枚卵移入２４只假孕鼠输卵管内，７只妊娠，共产仔４１只，其中７只死胎，出生后死亡４只，３０只存活。注射卵存活率为６４％（３５２／５４９），出生率为１１．６％（４１／３５２）。存活鼠经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，整合率为５７％（１７／３０）。在整合阳性鼠中选择了杂交信号较强的２只当代公鼠，通过回收载体和转化试验，结果表明整合基因完整，具有转化的功能，由此，建立了突变靶基因ｘｙｌＥ转基因小鼠模型。     

乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的初步建立

HBx基因为HBV基因组上的一个开放读框,可编码具有转录反式激活作用的蛋白(HBxAg).已证实在体外HBxAg可使哺乳细胞株发生恶性转化[1].为了探索在体内HBxAg转化细胞的作用,国外数个实验室已相继建立了HBx转基因鼠模型[2,3].为研究HBx基因在肝细胞癌变过程中的确切作用提供有效的动物模型,我们初步建立了携带乙型肝炎病毒X基因的转基因小鼠,现报道如下.     

携带xylE的转基因小鼠的制备

建立了一种新的转基因小鼠致突变检测模型．选用ｘｙｌＥ基因作为诱变的靶基因,以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒作为载体,通过显微注射法将线状ｐＥＳｎｘ导入ＩＣＲ小鼠制备Ｇ０小鼠．将显微注射后存活的３５２／５４９枚受精卵分别移入２４只受体雌鼠的输卵管中,共产生４１只仔鼠,存活３０只（Ｇ０）,经过整合检测,检测出转基因小鼠１７只,阳性率为５７％．从中筛选出２只完整整合了ｐＥＳｎｘ的转基因小鼠作为首建鼠（ｆｏｕｎｄｅｒｍｏｕｓｅ）进行繁育,目前已繁殖到第三代（Ｇ３）．经过逐代整合检测,证明转入的基因可稳定地遗传．上述结果表明已成功地制备了在基因组中整合了ｐＥＳｎｘ质粒携带ｘｙｌＥ的转基因小鼠．     

转基因小鼠血清中HBV DNA存在状态的研究

为研究HBV诱发肝病的分子机制,建立了含2个HBV全基因组DNA的复制型转基因小鼠模型。经反复鉴定筛选,最后保留了3个品系(17、21、25)以供分析研究。在传代过程中(G_0代到G_4代),外源基因是按孟德尔规律稳定遗传的,并在G_2代时获得了外源基因纯合子的个体。同时在传代过程中,HBV DNA在血清中一直都稳定地出现。整合阳性小鼠的血清中能测出HBV DNA的比例高达94％(102/108),因此先测血清中HBV DNA的存在,反过来可对转基因小鼠作出可靠的筛选。收集92只G_2、G_3代整合阳性小鼠(12～20周龄)血清45ml,免疫负染处理     

ENU对xy1E-ICR转基因小鼠精子畸形的研究

ｘｙ１Ｅ－ＩＣＲ转基因小鼠突变检测模型不仅可用于体内基因突变研究,还可以在同一动物体内同时进行多个遗传学终点的比较分析工作。本研究将遗传毒性致癌物乙基亚硝基脲（ＥＮＵ）作用于雄性转基因小鼠,研究其对精子形态的影响。选用６－８周龄Ｆ１代ｘｙ１Ｅ－ＩＣＲ转基因雄性小鼠,按给药方式的不同,分两组将ＥＮＵ腹腔内注射染毒ｘｙ１Ｅ－ＩＣＲ转基因小鼠,第一组小鼠给予１／１０ＬＤ５０（４９ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ）的ＥＮＵ,连续５天,最后一次给药后,分别于２４小时,４８小时,７２小时,１周,２周,３周处死小鼠。第二组为…     

血吸虫疫水感染性及感染性钉螺分布与人群感染率的关系

湖北省潜江市龙湾镇每年都有大批血吸虫病急性感染发生,为控制急性血吸虫病发生,我们于1992年在龙湾镇所属3个村的5个点作了小白鼠疫水感染性测定及感染性钉螺分布与人群感染率关系的研究,现报告如下。     

直肠显微镜对血吸虫病诊断的应用(附103例检查报告)

直肠显微镜作为一种血吸虫病检查的新型内窥镜,1979年问世。本组检查103例,均男性,年龄20～55岁,临床上疑为血吸虫病患者,血吸虫皮内抗原1:8,000反应阳性,而进行直肠显微镜检查。器械与方法本组采用徐州医疗光学仪器厂出产     

结合农业开发控制血吸虫病流行效果观察

我们选择潜江市高场原种场甘家塔(包括保安、联丰2个村)作为试区.采用结合农业综合开发的水利化、田园化、电气化和初步机械化(以下简称“四化”建设)以及改造低产田、改种水旱轮作、改建自来水、改建沼气池(以下简称“四改”建设),开展了消灭钉螺和控制传染源的防制措施.经过3年(1991—1993年)的实施,取得了较好的效果.     

乙基亚硝基脲诱导转基因小鼠基因突变的研究

[目的 ]用乙基亚硝基脲 (ENU)进一步验证携带xylE基因的转基因小鼠在体内基因突变研究中的应用价值。 [方法 ]用ENU对转基因小鼠进行诱变处理 (i.p .5 0mg/(kg·d) ,连续 5d)后 ,从脾脏组织DNA中回收带有靶基因xylE的pESnx质粒 ,通过电穿孔法转化大肠杆菌 ,筛选突变体 ,检测突变率 ,并对突变靶基因进行测序分析以确定突变类型。 [结果 ] (1)ENU诱发转基因小鼠脾脏组织xylE基因的突变率为 1 2 48× 10 -4 ,显著高于自发突变率 ;(2 )ENU诱发基因突变的类型包括碱基的颠换、转换以及由于碱基的缺失或插入所引起的移码突变。 [结论 ]该转基因小鼠是检测体内基因突变的一种有效的动物模型。     

xylE 转基因小鼠突变检测系统的建立

为了验证ｘｙｌＥ转基因小鼠能否用于体内基因突变检测,首先对从小鼠体内回收目的质粒的影响因素（电压,基因组ＤＮＡ浓度和Ｔ４连接酶浓度）进行了研究,结果发现用ＨｉｎｄⅢ酶切后的０．５μｇ组织ＤＮＡ在４００μＬ反应体系中以０．３ＵＴ４连接酶连接后,以１６ｋＶ,２００Ω,２５μＦ的参数用电穿孔法转化大肠杆菌ＤＨ１０Ｂ菌株是回收目的质粒效率最高的方法．在此基础上观察了致突变剂ｎ－甲基－ｎ′－硝基－ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对转基因小鼠（ｉｐ１０ｍｇｋｇ－１ｄ－１,连续４ｄ）外周血正染红细胞（ＮＣＥ）的微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因的自发和诱发突变率,并对突变的ｘｙｌＥ基因进行序列分析,结果ＭＮＮＧ使外周血ＮＣＥ的微核率从（２．２０±１．４８）‰上升为（６．８０±２．２８）‰（Ｐ＜０．０１）,ｘｙｌＥ基因的突变率从小于１／２２８４３增至４／１８６４１,表明ＭＮＮＧ可诱发转基因小鼠ＮＣＥ微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因突变率显著升高．序列分析显示ＭＮＮＧ诱发的ｘｙｌＥ基因突变主要是单碱基缺失．上述结果表明ｘｙｌＥ转基因小鼠是检测体内基因突变的有效模型．