巨尾阿丽蝇卵不同发育时间形态变化及基因表达

目的 探讨巨尾阿丽蝇(Aldrichina grahami)卵不同发育时间的形态变化与基因表达差异规律.方法 从巨尾阿丽蝇成虫产完卵开始记为0h,每隔4h取1次卵,直至幼虫孵出,用扫描电镜观察不同发育时期形态学变化特点;提取0、4、8、12、16 h的蝇卵RNA,应用Real-time PCR比较循环阈值(CT值)法测定bicoid、slalom、几丁质合成酶(chitin synthase)基因相对表达量,用SPSS 19.0软件对CT值及时间进行曲线拟合.结果 扫描电镜结果显示,发育0～4h时,巨尾阿丽蝇卵变化不明显,卵孔周围有突起,8h卵孔周围变光滑,卵孔可见,12 h卵孔消失,周围皱缩,16h卵孔周围皱缩明显,18h发育为幼虫;RT-PCR结果显示,bicoid基因在发育0～8h表达变化不明显、12h表达水平最高,CT值为(4.19 ±0.04);slalom基因4h表达水平最低、12 h表达最高,CT值分别为(4.05±0.01)、(6.20±0.03);chitin synthase基因8h表达量最高、12 h最低,CT值分别为(5.80±0.01)、(4.38±0.02);不同发育阶段各基因CT值不同,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 巨尾阿丽蝇卵形态结构随发育时间而发生变化,不同发育时期bicoid、slalom、chitin synthase基因表达量存在差异.     

亚洲带绦虫烯醇化酶基因的原核表达、鉴定与组织定位

目的 表达亚洲带绦虫（Taenia asiatica,Ta）成虫烯醇化酶（enolase,ENO）基因,并对其进行组织定位和免疫反应性分析。 方法 通过大规模测序从亚洲带绦虫cDNA文库中确定ENO基因,PCR扩增目的片段,将其克隆至表达质粒pET-30a（+）,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察重组蛋白的表达情况,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱纯化重组蛋白,蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组蛋白的免疫反应性。将重组蛋白免疫SD大鼠制备免疫血清,ELISA检测抗体水平,间接免疫荧光检测确定ENO在亚洲带绦虫成虫组织中的定位。 结果 PCR、双酶切和DNA测序结果均表明,重组质粒pET-30a（+）-TaENO构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白TaENO的相对分子质量（Mr）为47 000。经亲和层析获高纯度的蛋白,蛋白浓度为0.37 mg/ml。重组蛋白TaENO能被SD大鼠抗血清、感染亚洲带绦虫的猪血清和患者血清识别。间接免疫荧光检测结果显示,TaENO主要定位于成虫的表膜。 结论 纯化后的亚洲带绦虫成虫烯醇化酶重组蛋白具有较强的免疫反应性,烯醇化酶主要定位于成虫表膜。     

贵阳地区常见嗜尸性蝇类丽蝇科DNA条形码的构建

目的:构建贵阳地区常见嗜尸性蝇类丽蝇科的系统发育树。方法:对家兔尸体上采集到的嗜尸性蝇类丽蝇科的卵、幼虫及成虫提取DNA,扩增COI基因条形码区的序列,采用CLC Sequence View、MEGA软件进行序列分析,构建系统发育树。结果:共采集到丽蝇科5属9种嗜尸性蝇类,经序列测定确定各样本的形态学鉴定与分子鉴定是符合的,并以此序列构建出贵阳地区常见嗜尸性蝇类丽蝇科的系统发育树。结论:可以利用COⅠ基因条形码区序列构建的系统发育树进行贵阳地区嗜尸性蝇类的种属鉴定。     

亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析

目的 通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据.方法 用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定.结果 该基因全长1 090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26 973.8,等电点为5.96.生物信息分析揭示,Ta CRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符.SDS-PAGE结果表明,目的 基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功.结论 发现亚洲牛带绦虫Ta CRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.     

亚洲带绦虫膜联蛋白B3基因生物信息学分析

目的 识别亚洲带绦虫新基因,分析和预测该基因及其编码蛋白的结构和特性,为其生物学功能研究提供依据.方法 利用在线生物信息学网站及工具进行序列分析、预测其编码的膜联蛋白B3的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象、进化树等.结果 该基因全长1176 bp,编码区为70～588 bp,编码173个氨基酸,为全长基因;无跨膜区;具有多个磷酸化位点和B细胞线性表位;蛋白的理化性质稳定,理论分子量为19339.7;没有质体、线粒体定位序列;氨基酸序列高度保守.结论 运用生物信息学方法 从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中识别出了亚洲牛带绦虫成虫膜联蛋白B3基因,并对其所编码的蛋白质的结构与功能进行预测.     

精益管理应用于医院药库管理的尝试

目的:完善医院药库管理流程,提高管理效益。方法:采用精益管理的5S管理、目视管理、需求拉动式管理等管理工具。结果:药库的仓储能力增加,药品周转加快,工作效率提高。结论:精益管理可以促进医院药库的科学化管理,提高药品管理的效益和效率。     

猪带绦虫乳酸脱氢酶A和B的生物信息学比较分析

目的预测及比较分析猪带绦虫乳酸脱氢酶A（Taenia solium lactate dehydrogenase A,TsLDH-A）和乳酸脱氢酶B（Taenia solium lactate dehydrogenase B,TsLDH-B）,用于指导其生物学功能的研究。方法利用生物信息网站如美国国家生物技术信息中心（NCBI,http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（ExPASY,http：//ca.expasy.org/）中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,从猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别LDH-A和LDH-B的全长编码基因并对其结构与功能进行生物信息学预测分析。结果两序列都是包含完整开放阅读框的全长基因,推导出的氨基酸序列与其它物种LDH-A或LDH-B同源基因的氨基酸序列的一致性均大于50%。两者编码的蛋白在编码的氨基酸数目（331）、蛋白的理化性质、L-乳酸脱氢酶结构域、构成LDH酶催化中心的关键氨基酸、包含LDH活性位点的线性表位、无亚细胞定位等方面是一致的,但两者在翻译后的修饰位点、3个跨膜区和其他线性表位方面既相似也有区别。结论应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了TsLDH-A和TsLDH-B的cDNA全长序列,并预测和比较了两者结构与功能方面的信息,为进一步研究所编码蛋白的功能奠定了基础。     

自噬相关蛋白Beclin-1表达与缺血性心肌病的相关性

目的探讨自噬相关蛋白Beclin-1表达与缺血性心脏病的相关性。方法病例组选自贵州医科大学法医司法鉴定中心于2013年7月至2016年12月接收的尸检案例中被确诊为"缺血性心肌病"的80例死者,对照组为同期接收的尸检案例中经病理组织学检查确认无心肌组织病变的122例死者。用免疫组织化学检测Beclin-1在病例组和对照组心肌细胞中的表达。通过建立广义线性模型,调整多个混杂因素(包括性别、年龄、身高、体质指数、左心室壁厚度、右心室壁厚度、酗酒史、Gensini评分、心肌梗死史、是否合并高血压、慢性肾病和慢性呼吸系统疾病),评估Beclin-1和缺血性心肌病发病的相关性。结果 Beclin-1在心肌细胞中的表达与缺血性心肌病呈正相关(OR=1.2,95%CI为1.1~1.3,P0.001)。即在调整其他混杂因素后,Beclin-1对缺血性心肌病的作用是:Beclin-1的表达每增加0.01个单位,缺血性心肌病风险增加20%。结论 Beclin-1可能是缺血性心肌病的独立危险因素。     

抗亚洲带绦虫药物对乳酸脱氢酶抑制作用

目的探讨抗亚洲带绦虫药物对于重组的亚洲带绦虫乳酸脱氢酶(Ta.LDH)酶促功能的影响。方法将不同浓度的吡喹酮、阿苯达唑和甲苯咪唑加入Ta.LDH所催化的丙酮酸还原成乳酸(正反应)以及乳酸氧化成丙酮酸(逆反应)的标准反应体系当中,测定烔?废汆堰?核苷酸(NADH)在A340处吸光度的变化值。采用SPSS 16.0软件进行分析,计算药物对酶活性的相对抑制率。结果与对照组比较,0.10 mmol/L吡喹酮对Ta.LDH催化正逆反应的相对抑制率分别为93.99%(P0.01)和94.67%(P0.01),0.10 mmol/L阿苯达唑分别为85.45%(P0.01)和73.81%(P0.01);0.15 mmol/L甲苯咪唑分别为92.2%(P0.01)和86.13%(P0.01)。结论Ta.LDH可能为吡喹酮、阿苯达唑和甲苯咪唑抗亚洲带绦虫药物作用的靶标分子。     

牛带绦虫乳酸脱氢酶基因原核表达及免疫学特征

目的 克隆牛带绦虫乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因在大肠杆菌中表达,研究其免疫学特征.方法 将牛带绦虫成虫LDH基因与质粒pET-28a(+)连接构建原核重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)进行分析.结果 牛带绦虫乳酸脱氢酶基因编码332个氨基酸,理论分子量为35.4kDa,PCR、双酶切及DNA测序的结果均证明pET-28a(+)-LDH构建成功;SDS-PAGE结果表明,牛带LDH基因在大肠埃希菌高效表达,经过亲和层析高纯度蛋白,且该重组蛋白可以被亚洲带绦虫、牛带绦虫及猪带绦虫感染病人血清识别,表明其具有免疫反应性.结论 牛带绦虫LDH基因可在原核系统中有免疫活性的高效表达.