6-DMAP诱导栉孔扇贝三倍体的细胞学观察

用Bouin氏液固定、连续石蜡切片方法,对6-二甲基氨基嘌呤(简称6-DMAP)抑制第二极体诱导栉孔扇贝三倍体在受精和早期卵裂过程中的细胞学变化进行了详细观察。结果表明,在授精后25min,以60mg/L的6-DMAP处理栉孔扇贝受精卵15min,有效地破坏了纺锤体结构的形成,抑制了第2次减数分裂进程,致使受精卵内形成两种核相:一种是1个大的二倍性雌核和1个雄核;另一种是两个单倍性的雌核和1个雄核。不论形成几个雌原核,它们都能与雄原核相互靠近,在卵轴中央核膜逐渐发生融合,形成合子核,三倍体的合子核在卵内所占体积明显较二倍体的大。继而,合子核经过DNA复制,最后凝缩成染色体,发生有丝分裂,其过程与正常二倍体相同。     

桑沟湾栉孔扇贝养殖容量的研究

通过计算单位面积的初级生产量生产的有机碳供应量、单位面积滤食性附着生物量及其对有机碳的需求量，首次对桑沟湾栉孔扇贝养殖容量进行了估算。结果显示，当栉孔扇贝壳高为３￣４ｃｍ时，其养殖总容量为１１０亿粒左右，单位面积养殖容量估算值为９０粒／ｍ＾２；当壳高为４￣５ｃｍ时，其养殖总容量降为７５亿粒，单位面积养殖容量估算值为６０粒／ｍ＾２；当壳高为５￣６ｃｍ时，其养殖总容量仅为４０亿粒，单位面积养殖容量为３     

基于长片段PCR扩增的牡蛎疱疹病毒基因组高通量测序

为获取2001年低温冻存栉孔扇贝感染牡蛎疱疹病毒(Os HV-1)变异株(ZK2001)基因组序列,并分析ZK2001与其他Os HV-1变异株的序列差异和系统发育关系,利用基于长片段PCR的基因组DNA的扩增和富集技术,获取2001年栉孔扇贝感染Os HV-1变异株的基因组DNA;再使用Illumina Hiseq 2500 PE250高通量测序平台对其测序。最后分析ZK2001与Os HV-1其他变异株基因组的序列差异和系统发育关系。测序数据组装后获得8个Scaffold。基因组变异分析结果显示,ZK2001与参考基因组相比存在328个SNP位点,SNP和序列插入/缺失变异是导致Os HV-1基因组序列变异的主要变异类型。系统发育分析结果显示,ZK2001变异株与分离自我国的Os HV-1变异株亲缘关系最近,与分离自欧洲的Os HV-1μvar及其相关变异株的亲缘关系最远,说明中国和欧洲分布Os HV-1间存在因地理隔离导致的遗传分化。研究表明,基于长片段PCR的DNA富集技术,可以有效地扩增和富集冷冻样本中Os HV-1基因组DNA,并应用于高通量测序。Os HV-1不同变异株基因组序列数据的获取和积累,将为其基因组尺度的基因变异、株系演化和系统发育关系等研究提供重要基础。     

有机-无机复合污染对扇贝积累石油烃的影响

[目的]研究有机-无机复合污染对扇贝积累石油烃的影响。[方法]在实验室模拟条件下研究石油烃与Cu、Pb复合污染对栉孔扇贝积累石油烃的影响。[结果]单一石油烃污染条件下,石油烃在栉孔扇贝体内的积累量随暴露时间的延长及石油烃浓度的增大都有明显增大趋势;复合污染条件下,石油烃在栉孔扇贝体内的积累量随暴露时间及污染物种类及浓度的变化发生着动态变化,且不同浓度处理组间差异很大,当石油烃浓度固定为0.6 mg/L时,不同处理浓度组的Cu、Pb及Cu与Pb组合都促进了栉孔扇贝对石油烃的积累,但低处理浓度组的Cu、高处理浓度组的Pb、低处理浓度组的Cu与Pb组合更有利于促进栉孔扇贝对石油烃的积累。[结论]石油烃与Cu、Pb复合污染条件下,石油烃在栉孔扇贝体内的积累状况比单一石油烃污染条件下要复杂得多。     

三亚华贵栉孔扇贝套笼养殖方式研究

使用网目为0．8cm的聚丙烯挤塑网套住吊笼对华贵栉孔扇贝（Chlamys nobilis）的幼苗和幼贝进行养殖试验。结果表明：在幼苗期,套网笼组的整体壳高均低于不套网笼组,且成活率远低于不套网笼组;在人工筏式吊笼养殖的幼贝实验方面,套网笼组幼贝的生长速度略低于不套网笼组,但套网笼组的成活率高于不套网笼组。因此,套网笼法不适合幼苗的养殖,但适合幼贝的养殖,此项技术可以在华贵栉孔扇贝幼贝养殖上推广应用。     

栉孔扇贝精子的超低温保存研究

于１９９９年５￣６月对栉孔扇贝精子进行超低温保存研究。结果表明，抗冻液为ＤＭＳＯ５％＋蔗糖５％并以２０℃ｍｉｎ的降温速率通过０￣－８０℃时的保存效果最好，冻精的活力、受精率、化率分别为４９．３９％、４２．０６％和１２．１５％。样品体积对超低温存效果产生影响，体积为０．６ｍｌ或１ｍｌ比较适宜。此外，在０℃进行预处理平衡是必须的，但时间不宜太长。冻精用３５℃水浴解冻效果最佳，５０℃次之，２０℃最差。对     

栉孔扇贝神经节结构的显微观察

采用甲苯胺蓝、嗜银和铅苏木素3种组织学染色方法分别对栉孔扇贝(Chlamys farreri)神经节进行显微观察。结果表明,甲苯胺蓝染色法效果最好,神经细胞和神经纤维均着色较深,与背景反差较大。神经干及神经索中无神经元胞体,仅有沿神经索方向分布的神经纤维。神经节包括:1对彼此分离的脑侧神经节、1对连接在一起的足神经节和左右2神经节完全愈合而成的脏神经节。各神经节均由表面的神经节被膜、周边的胞体层和中央纤维网构成,胞体层分层现象不明显,神经元胞体根据其大小大致可分为直径15-36μm的大型细胞和5-15μm的小型细胞,胞体发出的突起均进入中央神经纤维网。脑侧神经节胞体层明显分脑神经节(CG)和侧神经节(PG)2区,CG区中神经元胞体主要分布于前端和外侧面,而PG区中神经元胞体则主要分布于外侧面;大型细胞较多,小型细胞很少。足神经节表层神经元胞体无分区分布的现象;大型细胞较少,而小型细胞较多。脏神经节相对较复杂,神经元胞体数目多,胞体层分区明显,分为:2个前叶,1个后叶,2个侧叶和2个嗅检叶;前叶和后叶中大型细胞较多,小型细胞较少;侧叶和嗅检叶中仅有小型细胞,而无大型细胞。     

贝壳上污损生物的重量对栉孔扇贝生长和存活的影响

对网笼养殖的栉孔扇贝壳上污损生物的数量进行了研究，发现9～11月贝壳上污损生物的湿重分别为1．47、0．49和2．09g，与上壳重的比值分别为28．16％、10．24％和31．29％。通过在栉孔扇贝上壳添加上壳干重0．5、1、2和3倍重的水泥，用以模拟附着在扇贝壳上的污损生物，设不添加水泥的对照组，对贝壳上污损生物的重量对栉孔扇贝生长和存活的影响进行了研究。结果表明，实验组扇贝壳长、闭壳肌和剩余软体组织的特定增长率及存活率与对照组均没有显著差异（P〉0．05），说明贝壳上的污损生物的重量没有影响扇贝的生长和存活。     

6_二甲基氨基嘌呤诱导栉孔扇贝三倍体

用６－二甲基氨基嘌呤（６－ＤＭＡＰ）处理以抑制栉孔扇贝第二极体释放产生三倍体的适宜诱导参数进行了试验研究,结合ＤＡＰＩ染色和荧光显微镜观察,分析了开始处理前和处理结束时的受精卵染色体核相组成与三倍体诱导率和幼虫成活率的关系,对三倍体处理组和对照组幼虫的生长进行了观察,结果表明,获得充分成熟的卵子,起始处理时间以第一极体占４０％,药物浓度６０ｍｇ／Ｌ,持续处理时间１５ｍｉｎ及产卵至处理结束保持水温２     

栉孔扇贝消化盲囊细菌群落组成的季节变化分析

为分析栉孔扇贝消化盲囊内细菌群落组成及其季节变化,于2009年6月—2010年6月(2月份除外)定期从青岛沙子口流清河湾扇贝养殖海区采集养殖的2龄栉孔扇贝,采用SDS方法提取消化盲囊的总DNA,并通过引物358f和907r采用PCR扩增细菌16S rDNA的V3～V5区序列,利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)分离所得扩增序列。DGGE图谱显示,12个月份的样品共有不同位置的谱带11条,其中9条谱带作为共有谱带在所有月份的栉孔扇贝消化盲囊中均有分布,占总谱带数的81.82%,表明整个养殖季节栉孔扇贝消化盲囊内的细菌群落组成相对稳定。对11条DGGE条带进行切胶回收、PCR扩增、纯化、克隆后测序,其中9条谱带克隆测序成功。经BLAST比对搜索,结果显示9条序列与NCBI数据库中的序列相似性达97%～99%,所代表的细菌分别属于4大类群,变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、蓝细菌门(Cyanobacteria)和放线菌门(Actinobacteria);NCBI数据库中与其相近的细菌主要为马赛菌属(Massilia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、聚球藻属(Synechococcus)、红球菌属(Rhodococcus)和未培养菌。