栉孔扇贝血淋巴中ACP和AKP活性及其电镜细胞化学研究↑（*）

用电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝血淋巴中的酸性磷酸酶（ＡＣＰ） 和碱性磷酸酶（ＡＫＰ） 的研究结果表明,溶酶体呈强的ＡＣＰ 阳性;ＡＫＰ 阳性颗粒常沿细胞膜分布;部分细胞ＡＣＰ 阳性颗粒较多,且靠近细胞膜,胞浆中也有分布。生化测定结果表明,血细胞和血清中均存在ＡＣＰ和ＡＫＰ 活性,且血清中的２ 种酶的酶活力均高于血细胞中,血清中ＡＣＰ和ＡＫＰ 的最适ｐＨ 分别为４ ．４ 和１０ ．３ ,最适温度分别为３５ ℃和５５ ℃。     

两个海区栉孔扇贝感染AVNV的比较分析

急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)是一种能导致栉孔扇贝大规模死亡的DNA病毒,研究通过检测不同养殖模式和不同苗种来源的栉孔扇贝样本携带AVNV的情况,以寻找合理的养殖模式和苗种,降低疾病的发生。以扇贝单一养殖的青岛流清河海区和贝藻间养的荣成桑沟湾海区为采样点,每月(2010年3月—2011年4月)定期采集2个海区野生苗养殖和人工苗养殖的栉孔扇贝样品各10只,共得到扇贝样本480只。取扇贝外套膜组织,提取DNA,采用巢式PCR检测扇贝感染AVNV的情况,并对2个海区2类栉孔扇贝AVNV感染率进行比较。结果显示,在2个海区的2类栉孔扇贝体内均检测到AVNV,流清河海区野生苗和人工苗养殖栉孔扇贝AVNV感染率分别为21.1%和18.9%,桑沟湾海区2类扇贝AVNV感染率分别为11.1%和5.6%;2个海区AVNV感染扇贝均集中在7、8月份,其中,流清河海区最高可达80%,桑沟湾海区最高仅40%。研究表明,贝藻间养和选用人工苗能有效减少AVNV对养殖扇贝的感染,是控制养殖扇贝发病死亡的有效措施。     

栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒巢式PCR检测方法的建立

为更好地实现对养殖海区栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)的快速诊断和分子流行病学的调查,以及AVNV的疫情监测,选择AVNV全基因组序列中的保守区段,应用Accelrys gene 2.5软件设计一对巢式引物,用于AVNV的检测.结果显示,引物的扩增片段分别为979和548 bp.实验优化了PCR体系中Mg2+和dNTPs浓度及扩增程序中的退火温度,并建立了完善的AVNV巢式PCR检测技术.研究表明,该PCR检测技术具有较高的敏感性,可稳定检测出5 pg扇贝样品组织总核酸中5×10 copies的病毒粒子.     

Foxl2基因在栉孔扇贝发育过程中的表达图式

Foxl2基因在哺乳动物中是雌性相关基因,参与卵巢发育和功能维持。本研究利用荧光定量PCR和原位杂交技术,对栉孔扇贝(Chlamys farreri)foxl2(Cf-foxl2)在发育过程中的表达图式进行了分析。研究发现Cf-foxl2在受精卵中呈低水平表达,随着发育进行表达量增高,D形幼虫期表达量最高,之后表达量迅速下降。原位杂交结果显示Cf-foxl2表达量在担轮幼虫之前在体内均匀分布;强阳性信号在担轮幼虫口凹附近呈对称分布;至D形幼虫期强阳性信号主要集中在内脏团和外套膜边缘处;之后信号消失,直到性别分化后在卵巢中再次出现。本实验结果暗示Cf-foxl2与卵巢发育相关,鉴于该基因在发育早期的持续性表达特征,暗示其可能参与栉孔扇贝的早期发育过程。     

不同贝龄华贵栉孔扇贝数量性状的通径分析

对华贵栉孔扇贝（Chlamys nobilis）3月龄、6月龄、7月龄、9月龄和15月龄的4个数量性状（壳高、壳长、壳宽和体质量）进行了测量,分析了性状间的表型相关性及形态性状对体质量的影响程度。结果表明,4个数量性状两两间呈正相关,其相关系数达到极显著水平（P〈0.001）。形态性状与体质量间,壳长对体质量的相关系数较高,壳宽对体质量的相关系数较小。通径分析显示壳宽对体质量的通径系数最小,除7月龄外,壳高对体质量的通径系数大于壳长。相关指数分析的结果与通径分析结果相似,形态性状对体质量的相关指数为0.910～0.943。经多元回归分析,建立了4个月龄时期壳高、壳长和壳宽对体质量的线性回归方程。研究表明,在6月龄后以壳高为主要选择指标,可达到对体质量的选择,研究结果为华贵栉孔扇贝选择育种中选育指标的确立提供了理论指导。     

浅海远岸水域筏养栉孔扇贝数量性状的相关性及通径分析

随机选取76个浅海远岸水域浮筏养殖的体型规则的2龄栉孔扇贝测定其壳宽、壳长、壳宽、总干重,计算相关系数,采用通径分析方法计算了以贝壳性状为自变量对总干重作依变量的通径系数、决定系数及相关系数,对各性状的影响大小进行剖分,明确影响远岸水域浮筏养殖的栉孔扇贝总干重的主要外部形态性状。结果表明:所测各表型性状与总干重之间的相关系数均达到极显著水平(P<0.01);壳长是主要影响因素,通过与壳高的协同作用影响总干重;所选表型性状对总干重的回归系数R2=0.737,表明所选性状是影响体重的主要性状。利用逐步回归分析方法建立以壳高、壳长、壳宽为自变量估计总干重的多元回归方程:Y=-39.582+2.977 X1+2.061 X2+11.181 X3。     

栉孔扇贝和虾夷扇贝通用微卫星引物的筛选及其在杂种鉴定中的应用

[目的]为进行大规模栉孔扇贝×虾夷扇贝群体的杂种鉴定以及家系中的亲子鉴定提供了基础。[方法]将已发表的25对虾夷扇贝的微卫星引物在栉孔扇贝基因组DNA上进行PCR扩增,并利用筛选出的通用引物对栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)进行杂种鉴定。[结果]通过PCR扩增,筛选出6对引物获得扩增产物,其中2对表现为多态性。将这6对具有属间通用性的微卫星引物对栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)进行PCR扩增,均能扩增出特异性条带,其中引物P13F449和KMY134的扩增产物中可以明显地分辨出来自父母本群体的特有条带,从而确定了杂交子代的杂种身份。[结论]虾夷扇贝和栉孔扇贝间通用微卫星引物是存在的,而且部分引物可以直接用于属间杂种的鉴定。     

栉孔扇贝对麻痹性贝类毒素的生理响应及转录组分析

本研究将栉孔扇贝(Chlamys farreri)暴露于塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense),通过测定内脏团中毒素的蓄积含量、氧化应激酶活性及其基因转录调控变化,探究栉孔扇贝暴露于麻痹性贝类毒素(Paralytic shellfish toxin, PSTs)的初期应激响应机制。结果显示,PSTs在内脏团中迅速蓄积,实验第6天时毒素含量最高,实验第30天时毒素残留量高达62.4%;PSTs引发栉孔扇贝体内脂质过氧化,过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)显著应激(P<0.05)。透射电镜下观察组织病变,发现空泡化、染色质聚集和核质固缩等结构损伤。通过加权基因共表达网络分析鉴定细胞凋亡和谷胱甘肽代谢解毒通路显著应激上调,映射ALOX5、AfGST-σ11、caspase-8及Bax 4个关键转录因子。综上可知,除抗氧化应激外,栉孔扇贝可激活特征性细胞凋亡和以谷胱甘肽解毒代谢反应抵抗PSTs毒性作用。本研究可为深入探索栉孔扇贝应激与代谢PSTs的特征机制提供科学依据。     

Reproductive success under the joint influences of temperature and salinity in noble scallop,Chlamys nobilis (Reeve)

In this study, the joint effects of two important environmental factors, temperature and salinity, on the per cent fertilization (FR) and per cent hatching (HR) of noble scallop, Chlamys nobilis, was evaluated using the central composite design and the response surface methodology. The results showed that the linear effects of temperature on FR and HR were significant (P < 0.01), and the linear effects of salinity were non‐significant (P > 0.05); the interactions between temperature and salinity were not significant (P > 0.05); the quadratic effects of temperature and salinity on the two responses were significant (P < 0.01); temperature was more important in influencing the reproductive success. The model equations of FR and HR towards temperature and salinity were established, with R² more than 98%, indicating that the models had excellent ability for goodness of fit and projection. Through simultaneously optimizing the two models derived, we found out that the optimum factor combination was 25.7°C/29 ppt and the greatest reproductive success was 89.93% for FR and 72.42% for HR. The desirability value of 97.30% showed the reliability of these optima. Our results provide some valuable guidelines for refining the reproductive efficiency of C. nobilis.     

乙酰胆碱对栉孔扇贝血淋巴中过氧化物酶活性和一氧化氮含量的影响

栉孔扇贝的血淋巴在不同质量浓度的乙酰胆碱作用下于体外孵育3h,测定栉孔扇贝的血清、血细胞中依赖卤素的髓性过氧化物酶、不依赖卤素的髓性过氧化物酶和一氧化氮活性的活力变化。结果表明,乙酰胆碱对于这两种酶和一氧化氮均有一定的影响,髓性过氧化物酶和一氧化氮活性大部分均为先升后降。据此,乙酰胆碱对栉孔扇贝血淋巴中的几种氧化酶有一定的作用。