两种扇贝病害的ELISA分析

运用ELISA分析技术,对烟台海区不同时期的栉孔扇贝和海湾扇贝体内感染的病毒粒子的季节性变化进行了研究。结果表明一龄栉孔扇贝体内病毒粒子的含量在8月份最高,其P/N值和OD值分别为0.8305和2.23,与栉孔扇贝大规模死亡时期相一致。一龄海湾扇贝的OD值在8月份的检测中大于1,即表示海湾扇贝中可能存在栉孔扇贝病毒粒子。其他月份的检测结果均为完全阴性,即没有检测到栉孔扇贝病毒粒子。     

虾夷扇贝×栉孔扇贝人工受精过程的荧光显微观察

采用 DAPI染色显微荧光方法 ,连续观察了虾夷扇贝×栉孔扇贝的正反交受精细胞学过程。无论正交或反交 ,精子均可正常入卵 ;受精卵能顺利完成第 1次、第 2次减数分裂 ,排出第一、第二极体 ;精子和卵子内的各一套染色体融合后 ,形成二倍体的合子进入正常的细胞分裂 ,其发育过程同母本     

Studies on mass summer mortality of cultured zhikong scallops (Chlamys farreri Jones et Preston) in China

Mass mortalities of cultured zhikong scallops (Chlamys farreri) have occurred each summer in most culture areas of northern China since 1996. Among the hypothesized causes are high culture density, infectious disease and genetic inbreeding. To investigate these potential agents, C. farreri were deployed at three densities (low, medium and high) at three sites (Jiaonan, Penglai and Yantai) in the summer of 2000. Scallops were sampled for survival, growth and histopathology before, during and after a mortality episode. Most of the mortality occurred in July and August, during and toward the later part of the spawning season, when water temperature reached 23–26 °C. Final cumulative mortalities reached 85% to 90% at all three sites. Scallops in the medium and high densities had higher initial death rates than did those at the low density. High densities also inhibited growth. Ciliates from the genus Trichodina, larvae of various organisms and anomalous secretions were observed in sections of the gill cavity, with highest prevalence during and at the end of the mortality period. Prokaryotic inclusion bodies were found in the soft tissues, but their prevalence was low and apparently without correlation with mortalities. Genetic analysis with random amplified polymorphic DNA markers showed slightly lower heterozygosity in the cultured stocks (0.301) than in the wild stocks (0.331). It is possible that the mortalities are caused by a combination of several factors such as stress associated with reproduction, high temperature, overcrowding and poor circulation in the growout cages, opportunistic invaders or pathogens, and possibly inbreeding.     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体适宜参数的探索

采用照射强度为1500μw/cm2的紫外线对长牡蛎(Crassostrea gigas)精子照射60s,将处理后的精子分别与长牡蛎和栉孔扇贝(Chlamys farreri)的卵子进行受精试验,受精后11.5h用浓度为60mg/L的6-DMAP对栉孔扇贝受精卵分别持续处理15、20、25、30min,运用热滴片法对各实验组进行倍性检测。结果表明,长牡蛎同源单倍体组中单倍体率为75.6%;栉孔扇贝异源单倍体组中单倍体率为14.7%,最佳药物持续处理时间为20min,其二倍体率为24.1%;异源诱导栉孔扇贝单倍体组和二倍体组中胚胎均可以发育到D形幼虫期,其单倍体组中的D形幼虫率为5.0%,20min药物加倍二倍体组D形幼虫率最高为6.1%。本实验结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了诱导参数依据。     

栉孔扇贝生殖活动前后的滤食和生长

在桑沟湾用模拟现场流水法对栉孔扇贝的摄食生理进行了比较研究。结果表明，栉孔扇贝在进行生殖活动前后滤水率无明显的差异，但进行生殖活动前的摄食量较大。尽管栉孔扇贝的滤水率和摄食量随着个体的增大而增加，它的吸收率却与个体大小无关。在３００￣６００ｍｌ／ｍｉｎ的水流范围内栉孔扇贝的滤水率没有明显的变化，水流小于３００ｍｌ／ｍｉｎ时扇贝的滤水率则明显降低。根据实验数据，用计算机模拟得出了栉孔扇贝在生殖活动前     

栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂杂交子一代与其双亲同工酶的比较研究

采用不连续垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对栉孔扇贝(Chlamys farreri)♀、虾夷扇贝(Pa-tinopecten yessoensis)♂及其杂交子一代的ADH、MDH、SDH、IDH、ME和SOD共6种同工酶的酶谱进行分析,以探讨双亲遗传物质在杂交子代中的表达情况及杂交子代基因的表达特征。结果表明,杂交子代的同工酶酶谱与母本栉孔扇贝的相似,而与父本虾夷扇贝的明显不同,说明父本虾夷扇贝的同工酶在杂交子代中没有表达。幼虫阶段的同工酶酶谱亦表明,父本虾夷扇贝的同工酶在杂交子代的幼虫阶段仍然没有表达。另外,在对母本栉孔扇贝群体和杂交子代群体的同工酶酶谱进行比较研究时发现,在杂交子代中出现了一定比例的杂合子,因此不能确定杂交子代是由雌核发育而来。     

菲律宾蛤仔和栉孔扇贝的呼吸与排泄研究

对菲律之后人蛤仔和栉孔扇贝的呼吸与排泄进行了实验研究。结果表明：温度和贝体重对两种贝类的耗氧率的氨排泄率都有明显的影响，且两者间存在着交互作用。菲律宾蛤仔的耗氧率（Ｑｏ，ｍｇ／ｇ／ｈ）和氨排泄率（ＱＮ，μｇ／ｇ／ｈ）与温度（Ｔ，℃）（Ｗ，ｇ）存在下列关系：Ｑｏ＝０．３０７Ｗ＾－０．７３８ １．００４＾Ｔ，ＱＮ＝７．８４１Ｗ＾－０．９１９ ０．９９０＾Ｔ；栉孔扇贝的耗氧率和氨排泄率与温度、湿重存在下     

栉孔扇贝急性病毒性坏死症病原人工感染研究

从发病疫区栉孔扇贝（Chlamys farreri)组织中分离出病毒和立克次体(Rickettsia organism，RO)，对健康栉孔扇贝进行人工感染。结果显示，病毒注射组死亡率为75％，病毒浸浴组死亡率为68．7％；RO注射组死亡率仅为18．7％；灭活RO注射组死亡率为31％；灭活病毒注射和空白对照组死亡率皆为12．5％；病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率有显著差异。而RO注射组与灭活RO注射组、空白对照组死亡率没有显著差异。电镜复检结果显示，发病扇贝的外套膜、鳃、消化腺组织中分布有大量病毒粒子，该病毒粒子的形态特征、病理学特征与自然海区发病扇贝中的病毒粒子特征完全一致。人工感染实验结果证明，栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(A—cute Virus Necrobiotic Virus，AVNV)是栉孔扇贝大规模死亡的直接病原。     

栉孔扇贝急性病毒性坏死症(AVND)病理学观察与分析

2000~2002年,应用光镜和电子显微技术对AVND发生期间栉孔扇贝(Chlamys farreri)各主要组织器官病理变化进行了连续观察。光镜观察显示,除生殖腺、闭壳肌外,濒死栉孔扇贝的外套膜、鳃、肾、消化腺和肠组织都有不同程度的组织病理变化。病灶主要出现在上述各器官的结缔组织以及上皮组织,病理变化表现为细胞核肿大、固缩、破裂,核染色质边缘化或空泡化,受感染细胞崩解、脱落,留下大片均质无结构的空白区域,形成凝固性坏死,结缔组织细胞质中有嗜碱性包涵体样颗粒存在。电镜观察显示,在病灶出现的组织细胞内,细胞核染色质异常凝集和边缘化、核膜周隙扩张或溶解。细胞器病理变化明显,内质网扩张,核糖体脱落,有髓鞘样小体出现;线粒体肿大、嵴融解,整个细胞出现解体现象。病变的结缔组织细胞与间质细胞细胞质中有大量直径为130~170nm、具有囊膜的球形病毒粒子存在,负染电镜观察表明,病毒囊膜表面覆有长20nm放射状纤突。病毒的发生基质在细胞质内,并被一膜性结构所包围。病毒在宿主细胞中的繁殖分为3个阶段,即病毒发生期、病毒装配期和病毒释放期。病理学观察证明,病毒感染与病理变化具有明显的相关性。     

栉孔扇贝鳃和唇瓣过氧化物酶活性

采用组织化学、电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃和唇瓣内的过氧化物酶(EC1.11.1.7;POD)进行研究,以探讨扇贝的鳃和唇瓣在免疫防御中的作用。组织化学显示,鳃轴、鳃丝和唇瓣上皮细胞均呈POD强阳性,结缔组织呈弱阳性;病毒感染后酶活力逐步增强。电镜细胞化学定位表明,鳃和唇瓣上皮细胞内有数量和大小不等的POD强阳性颗粒,阳性颗粒多为圆形,直径为150-220 nm;次级溶酶体也呈POD强阳性;内质网和空泡膜等细胞内膜系统以及细胞表面的微绒毛和纤毛呈POD弱阳性。结缔组织中部分血细胞呈POD强阳性。鳃轴上皮细胞内POD高电子密度阳性颗粒较少,而低电子密度阳性颗粒较多;主鳃丝上皮细胞内POD阳性颗粒较少,普通鳃丝上皮细胞内POD高电子致密阳性颗粒和呈POD强阳性的次级溶酶体均较多;唇瓣上皮细胞内POD阳性颗粒较鳃的略少。生化测定显示,鳃轴的POD酶活力最高,鳃丝次之,唇瓣最低;病毒感染24 h后,各部分的酶活力均显著增强。栉孔扇贝鳃和唇瓣内大量的POD可在抵抗病原微生物感染方面发挥重要的作用。