候选HCVE1蛋白疫苗在健康志愿者中的耐受性和免疫原性

比利时Ghent大学和医院的Leroux-Roels等在Vero细胞中表达了1b丙型肝炎病毒（HCV）的E1蛋白，即羧基端截短的重组E1蛋白（192～326位氨基酸）。它装配形成20nm的病毒样颗粒后，在免疫小鼠中显示了良好的免疫原性。他们以之为候选疫苗，在20名男性志愿者中进行Ⅰ期临床试验。     

HCV F蛋白体外自组装以及在HCV感染者肝组织中的分布研究

目的 探讨HCV F(frameshift)蛋白是否能自组装为病毒样颗粒以及F蛋白是否存在于HCV患者肝组织中.方法 将0.5～1 g/L大肠埃希菌重组表达的F蛋白与0.006 g/L tRNA混合,于100 μl组装缓冲液中进行反应,取组装产物进行1:10稀释,2%醋酸铀复染后电镜观察是否形成病毒样颗粒.HCV感染者肝组织中F蛋白的检测采用免疫组织化学法.结果 1 g/L F蛋白与tRNA混合(167:1)后,可形成直径35 nm的病毒样颗粒.在20例HCV感染者的肝穿刺组织标本中,有2例患者的肝细胞胞浆中可检测到F蛋白.结论 F蛋白在体外可以形成病毒样颗粒,在部分HCV感染者的肝组织中存在F蛋白,F蛋白在HCV的生活周期中可能有重要功能.     

随机多肽噬菌体展示载体pCANTAB5X的构建

构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体,方法在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列,将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中,再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果限制酶切点ＸｂａＩ和ＨＧＶＣ片段被引入到新构建的噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ中。     

献血员中TT病毒感染的检测及序列分析

目的： 研究ALT正常的献血员中TTV(transfusion transmitted virus) 的感染情况,探讨TTV感染的传播途径和致病性。方法： 设计TTV保守区域的特异性引物,聚合酶链反应(PCR)方法检测120例ALT正常的献血员,对1例TTV DNA阳性标本（TTVD026）进行PCR产物测序,并与已知TTV核苷酸序列比较同源性。结果： 120例ALT正常献血员中有20例为TTV DNA阳性,感染率为16.7％。同源性分析表明TTVD026与TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2的核苷酸同源性分别为99％,99％,99％和89％。结论： ALT正常的献血员中存在TTV的感染; TTVD026与TTV TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2可能属于同一个基因型;输血可能是TTV传播的主要途径。     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅲ.单克隆抗体免疫荧光快速检测霍乱弧菌的实验研究

为了进一步研究所获得的霍乱弧菌单克隆抗体在诊断应用中的价值,将其中一株2B_1H_1C_6用FITC标记,进行免疫荧光直接法和间接法快速检测霍乱弧菌模拟标本,同时以标记多克隆抗体相比较。结果表明,单克隆抗体的间接荧光比多克隆抗体的间接荧光特异,前者仅对伤寒疾杆菌和痢疾杆菌有很微弱的非特异荧光(±),而后者对多数肠道菌有±～++的非特异荧光,在1000～10,000菌/ml时,两种抗体的免疫荧光均可检出,18份粪便模拟粪便的     

携带hIL-2cDNA的逆转录病毒载体的构建及其在人肝癌细胞中的特异表达研究

将人白细胞介素２（ｈＩＬ-２）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＭＮＳＭ的ＰＬ位点　，分别构建了转录受ＳＶ４０早期启动子和人甲胎蛋白增强子调控的重组逆转录病毒载体ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ。用脂质体转染法将ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ分别转导ＰＡ３１７包装细胞，测质粒转染率为（５～２０）×１０~(－３)克隆／μｇＤＮＡ·１０~６细胞，病毒感染率为（５．４～４５０）×１０~４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌细胞、肾癌细胞和黑色素瘤细胞，Ｎｅｏ~Ｒ克隆经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证明ｈＩＬ－２ｃＤＮＡ转入人肿瘤细胞并整合，　Ｒ　ＮＡ斑点杂交及ＩＬ－２活性表达分析证明，人甲胎蛋白增强子可促进异源启动子启动ｈＩＬ－２ｃＤ－ＮＡ在合成甲胎蛋白的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。该研究对肝癌特异性免疫增强基因治疗有重要意义。     

脑源性神经营养因子与帕金森病

帕金森病 (PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars com pacta,SNpc)多巴胺 (DA)能神经元的进行性退化变性 ,由于其机制还不清楚 ,因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子 (brain- derived neu-rotrophic factor,BDNF)由 Barde等于 1982年在猪脑中首次发现 ,其氨基酸序列有 5 5 %～ 6 0 %与神经生长因子 (nervegrowth factor,NGF)完全相同 ,也属神经营养素 (neu-rotrophin)家族的成员 ,BDNF可通过其高亲和力受体 trk B和低亲和力受体 p75 NTR发挥生物活性 ,能够促进多种神经元的存活 ,尤其对 DA能神经…     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅳ.McAb吖啶橙(McAb-AO)简易免疫荧光菌团法快速检定霍乱弧菌的实验研究

将获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中的一株“2B_1H_1C_6”的McAb与荧光素吖啶橙标记制成简易AOFA、对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,研究其敏感性,特异性和实用性同时以霍乱弧菌多克隆抗体比较。结果表明:McAb-AO比PcAb-AO敏感度高,特异性强(前者仅对霍乱弧菌呈现荧光菌团,对其它肠道菌无交叉反应),在每毫升类模拟标本中含10个     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究—Ⅰ.霍乱弧菌单克隆抗体的敏感性和特异性检测结果

将所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体(McAb),用不同年代的霍乱弧菌(两种生物型)及常见的肠道菌(含不凝集弧菌),以试管凝集试验法测定它们的敏感性和特异性,并以霍乱弧菌多克隆抗体比较。结果表明,12株霍乱弧菌单克隆抗体,对各型霍乱弧菌(9株)均有不同程度的抗体效价(1:40～1280),其中四株单克隆抗体对各型霍乱弧菌的凝集效价比多克隆抗体的凝集效价高,所以较敏感;所有12株单克隆抗体,对不凝集弧菌等9种、株肠道菌的凝集效价,均<1:140,而多克隆抗体对这些肠道菌有不同程度交叉凝集(1:40～220)的却有2/4,证明这些单克隆抗体的特异性比多克隆抗体高,适合于诊断应用。     

IL-2重组逆转录病毒载体的构建及介导的肝癌特异性基因治疗研究

将小鼠白细胞介素２（ｍＩＬ－２）ｃＤＮＡ全序列克隆到逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ的ＰＬ位点，使其转录受ＳＶ４０早期启动子驱动，构建ｐＭＮＳＭ－ＳＶ４０－ｍＩＬ－２。用小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）置换ｐＭＮＳＭ－ＳＶ４０－ｍＩＬ－２中ＳＶ４０启动子，构建ｐＭＮＳＭ－Ａｌｂｅ／ｐ－ｍＩＬ－２。经酶切鉴定符合要求。将重组体用磷酸钙共沉淀法导人逆转录病毒包装细胞ｐＡ３１７中，用所得的重组病毒在８μｇ／ｍｌＰｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下体外感染小鼠肝癌细胞（ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ、ＢＮＬＩＭＥ）、黑色素瘤…