庚型肝炎病毒基因组RNA的实验转染

目的：研究庚型肝炎病毒（HGV）对恒河猴的致病性及其在恒河猴体内的复制和表达。方法：体外转录制备全长HGV基因组RNA，肝内注射感染BY1猴，9个月后取其阳性血清感染BM1猴，7个月后取BM1阳性血清感染BB1。采用RT－PCR、原位杂交、定量PCR和免疫学、血清酶学、组织病理学等方法，对HGV的感染性及致病性进行了研究。结果：BY1、BM1和BB1实验猴感染后，分别在第3、8和3周血清HGV RNA阳转，持续存在最长达21周。血清丙氨酸转移酶（ALT）均升高，最高达418IU／L。感染后血清中均检测出抗－HGV。肝组织检查呈现轻度肝炎样变，并检测到HGV mRNA和HGV E2蛋白在肝组织中的表达。结论：体外转录的HGV基因组RNA对恒河猴具有感染性，可在恒河猴中传代感染并引起肝组织轻微炎症改变。恒河猴对HGV感染敏感，可作为研究HGV的实验动物模型。     

献血员中TT病毒感染的检测及序列分析

目的： 研究ALT正常的献血员中TTV(transfusion transmitted virus) 的感染情况,探讨TTV感染的传播途径和致病性。方法： 设计TTV保守区域的特异性引物,聚合酶链反应(PCR)方法检测120例ALT正常的献血员,对1例TTV DNA阳性标本（TTVD026）进行PCR产物测序,并与已知TTV核苷酸序列比较同源性。结果： 120例ALT正常献血员中有20例为TTV DNA阳性,感染率为16.7％。同源性分析表明TTVD026与TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2的核苷酸同源性分别为99％,99％,99％和89％。结论： ALT正常的献血员中存在TTV的感染; TTVD026与TTV TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2可能属于同一个基因型;输血可能是TTV传播的主要途径。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白大肠杆菌中的表达

目的 获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法 从重组质粒Ｉｗｑ２利用反应扩增出ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ３基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱导重组工程菌,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对重组蛋白进行鉴定。结果 酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧ     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

目的;研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞,将转染上清再次感染ｓｆ细胞,以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法分析,检测重组蛋白。结果：序     

丙型肝炎病毒的变异,分型及意义

丙型肝炎病毒为一单股正链ＲＮＡ病毒，基因组高变异且贯穿整个基因组，表现出许多特点，根据变异可将ＨＣＶ分为不同的型及亚型。丙型肝炎病毒的变异、分型对ＨＣＶ的感染预防和丙肝患者的诊断与危治疗均有意义。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

庚型肝炎病毒（ＧＢＶＣＨＧＶ）是近年发现的疑似致人类肝炎的新型单股正链ＲＮＡ病毒,发病呈全球性分布,在人群中有一定的感染率。目前诊断主要以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）为主,有必要研制特异的抗ＧＢＶＣＨＧＶ抗体诊断试剂。杆状病毒的多角体蛋白基因编码表达的蛋白,占感染细胞蛋白总量的比例较高,可使外源基因得到高效表达。由于昆虫细胞能够识别并正确进行诸如信号肽切除、磷酸化、糖基化等蛋白质表达后加工修饰,使得表达的蛋白接近天然蛋白,具有很高的生物活性。ＢａｃｔｏＢａｃ表达系统表达含有６…     

HGV RNA转录体的感染性研究

研究ＨＧＶＲＮＡ转录体在动物体内的感染性。将体外制备的ＨＧＶＲＮＡ转录体 ,肝内接种感染恒河猴。感染后每周采血 ,检测血清抗 ＨＧＶ、ＡＬＴ和ＨＧＶＲＮＡ的消长 ;组织活检和尸检观察肝脏组织学变化 ;ＲＴ ＰＣＲ方法检测心、肝、胰、脾、肾 5种组织中ＨＧＶ基因组ＲＮＡ和负链ＲＮＡ。结果表明 ,恒河猴感染 1周后血中可检出ＨＧＶＲＮＡ ,在感染后 4 7周中 ,有 36周可检测到ＨＧＶＲＮＡ ,最长持续存在时间为 2 7周。ＡＬＴ呈间歇性升高 ,最高达 12 6.3Ｕ/Ｌ。肝组织学检查表现为轻度炎性病变 ,免疫组织化学染色表明肝脏细胞有ＨＧ…