微反应板酶联夹心杂交定量检测乙型肝炎病毒基因组

目的 建立一种在微量反应板上进行乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因杂交定量分析的技术。方法 利用人工合成的多组寡核苷酸探针与乙型肝炎病毒全基因组在微量ＤＮＡ结合板上进行杂交反应，并利用自制的标记放大探针检测杂交信号，信号值以Ａ值标示，与标准曲线比较后，可求得待测标本中ＨＢＶ基因含量。结果 （１）本方法可直接从血清标本中对ＨＢＶ定量，可定量范围为２０ｐｇ－２０ｎｇ／ｍｌ；（２）不与人类基因组及其它病毒或细菌     

人CD38分子基因的克隆及其在真核细胞中的表达

目的：克隆并表达人CD38抗原分子的全长cDNA。方法：采用RT－PCR法，从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中克隆出CD38全长cDNA并将其插入pGEM-T载体中，重新设计引物，引入酶切 位点，二次PCR；从重组pGEMT载体上扩增CD38抗原分子的cDNA编码序列，再亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1( )，用脂质体法转染COS7细胞。用免疫荧光及A－PAAP方法检测CD38抗原的表达。结果：克隆的CD38抗原的全长cDNA，经酶切鉴定及序列分析表明，其序列与文献报道完全一致。免疫荧光及APAAP方法检测表明，CD38抗原分子在COS7细胞中获得表达。结论：成功构建了CD38真核表达载体，并在COS7细胞中获得表达，对研究CD38分子的功能具有重要的意义。     

重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体的构建及其应用

目的　构建表达人内皮细胞抑制素 (Endostatin)的重组腺病毒载体 ,并进行活性检测。方法　将含有IL3分泌肽的人Endostatin全长cDNA插入穿梭质粒pAdCMV产生重组质粒pAd IL3 Endo ,通过脂质体介导与 pBHG1 0共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生重组腺病毒Ad IL3 Endo。体外转染人结肠癌SW62 0细胞并观察其上清对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)生长的影响。结果　扩增到的Ad IL3 Endo的滴度为 4 .3× 1 0 1 2 空斑形成单位 (pfu) /L ,多聚酶链反应 (PCR)显示在转染的细胞中有人EndostatincDNA的存在 ,Westernblot显示转染细胞上清中有人Endostatin蛋白表达 ,台盼蓝染色显示其上清作用 72h后HUVEC的生长被抑制了 67% (P <0 .0 5)。结论　所制备的重组人Endostatin腺病毒载体能有效表达具有生物学活性的人Endostatin ,为进一步的研究奠定了基础     

医学微生物学教学改革探索与分析

针对医学微生物学的学科特点以及学科发展现状,在教学过程中,通过改变教学模式、丰富教学手段、改革实验内容以及改变考核形式等方法来提高教学效果,使学生成为教学过程的主体,激发学生的学习兴趣和创新热情,培养学生的动手能力以及分析问题和解决问题的能力.     

HIV-1/HCV合并感染者中HCV基因亚型流行情况调查

目的 了解中国部分地区HIV-1和HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行、分布及其与HIV-1感染疾病进展的关系.方法 对186份获自河南、云南、新疆、吉林和辽宁省HIV-1/HCV合并感染人群标本(HCV病毒载量>1000 cop/ml),用反转录巢式聚合酶链反应方法扩增血浆HCV核心基因区并进行基因亚型分型,同时检测HIV-1和HCV载量以及CD4+T细胞计数.结果 (1)HCV不同基因亚型比例分别为1a(1.7%)、1b(39.9%)、2a(17.9%)、3a(10.4%)、3b(15.6%)、6a(1.2%)、6n(6.4%)和6型未鉴定亚型(7.5%).HCV 2a和1b主要流行于河南省既往有偿献血浆人员中;3a和3b亚型主要流行于新疆和云南静脉注射吸毒者(IDU)中;HCV6型主要流行于云南吸毒人员中.(2)1b亚型的HCVRNA水平显著高于非1b亚型,但在HIV-1载量和CD4+T细胞数方面差异无统计学意义.2a亚型的HIV-1 RNA和HCV RNA水平显著低于非2a亚型.结论 HIV-1/HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行和分布与流行地区和感染途径有关.新的HCV6型亚型病毒株已经在合并感染的IDU人群中流行.尚未发现HCV基因哑型与HIV感染疾病进展之间的关系.     

从ＨＣＶ核心蛋白噬菌体随机展示肽库中筛选抗原表位

目的 探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法 应用噬菌体展示技术,筛选ＨＣＶ核心蛋白的抗原序列,用抗－ＨＣＶ核心抗体单独阳性的血清,对已构建的ＨＣＶ核心蛋折扣长菌体随机展示肽库进行４轮筛选,检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂交阳笥率来评价筛选的效果。测定和分析了７个序列中,６个为ＨＣＶ核心蛋白序列,其中５个被正常地展示于噬菌体表面,１个可能被正确展示。这些序列均含有重要的ＨＣＶ核心抗原表位。另１个为大肠杆菌nrfa基因。结论 噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选,并具有简便、快速、准确的优点。     

同个体中HCV高变区1序列变异的研究

ＨＣＶ高变区１ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｏｎｅＨＶＲ１基因变异可能与病毒逃避宿主免疫选择作用有关,是病毒在体内持续存在及ＨＣＶ感染易慢性化的重要原因之一１。近年来研究发现,ＨＶＲ１基因可能对ＨＣＶ的免疫预防有重要作用２,３。为此,我们选择了长期、多次进行血液透析的ＨＣＶ感染者作为研究对象,动态观察了ＨＶＲ１的序列变异。以研究其变异极其规律有重要意义。１材料和方法研究对象：血透析患者的血清,由上海医科大学附属中山医院血液透析中心提供。引物设计、ＨＣＶＲＮＡ的提取、逆转录巢式ＰＣＲ、ＤＮ…     

CHILDREN’S RESPIRATORY VIRAL DISEASES TREATED WITH INTERFERON AEROSOL

In 1979, the Pediatric Department of Shanghai Changzheng Hospital, in collaboration with the SINE Laboratory, succeeded for the first time in producing a human leukocyte interferon aerosol (IFN-a aerosol). The biological value of the interferon used in the aerosol was not adversely affected. Over 80'70 0f its particles have diameters under 5 Um. In animal ex- periments no irritative reactions were observed. Clinical trials showed the preparation was effective in children's respiratory viral disease including in fluenza, bronchiolitis caused by RSV, mumps, asthma (infectious), asthmatic bronchitis and recurrent upper respiratory tract infections. Based on our animal ex periments and clinical trials lasting more than 7 years, IFN a aerosol is proved effective, safe and non- traumatic. It has no side effects and is economical and easy to use     

不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较.结果:在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞,阳性信号位于胞质内.阳性细胞散在分布,在生殖嵴处聚集成团.不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现.统计学分析结果表明,4～7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P>0.05);由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异.结论:人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处.4～7周发育阶段,胚胎内PGC数目和体外培养的克隆数无明显变化.