人肝细胞癌及癌旁肝组织HBV—DNA的原位杂交检测

探讨乙型肝炎病毒ＤＮＡ五增生结了和肝癌的关系，应用原位杂交技术检测５８例肝细胞癌及癌旁组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ的表达。结果 肝细胞癌及癌旁组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为３７．９％和４４．８％〉差异无显著性。ＨＢＶ－ＤＮＡ在癌旁组织中主要位于胞浆内，而肝癌组织中以胞核定位为主。     

肝细胞癌HBVDNA和癌基因表达的分子病理研究

目的：从分子水平观察肝细胞癌组织ＨＢＶＤＮＡ和癌基因的表达情况及与发病的关系。方法：应用原位核酸分子杂交技术研究４５例原发性肝细胞癌和２５例肝硬化的石蜡切片组织中ＨＢＶＤＮＡ和ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ癌基因表达情况。结果：在肝细胞癌中见有ｎ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ表达增强，其检出率分别为６８．９％（３１／４５）和４０．０％（１８／４５），高于肝硬化组（２８．０％，８．０％）（Ｐ＜０．０５）。４０％肝细胞癌病例（１８／４５）两种癌基因同时过量表达，４５例肝细胞癌组织中有１９例存在有ＨＢＶＤＮＡ序列（４２．２％）并均具有ｎ－ｒａｓ或ｃ－ｍｙｃ过度表达。结论：两种癌基因ＨＢＶＤＮＡ可能有激活癌基因作用，肝细胞癌发生中可能起着重要的协同作用。ＨＢＶ感染与肝细胞癌发生有密切关系。     

地高辛标记探针原位杂交对肝细胞癌HBV DNA分布的研究

为了探讨ＨＢＶ与肝细胞癌（ＨＣＣ）发病的关系，作者应用地高辛标记ＨＢＶ ＤＮＡ探针原位杂交及免疫组化检测了８０例ＨＣＣ组织及癌周肝组织的ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ。结果显示，癌周肝组织ＨＢＶ阳性６３例（７９％），癌组织ＨＢＶ阳性４９例（６０％），癌周阳性细胞数明显多于癌内。癌周ＨＢＶ ＤＮＡ，以复制型为主，而癌组织的ＨＢＶ ＤＮＡ大多属整合型。结果表明大多数ＨＣＣ病例与ＨＢＶ存在密切相关，而且整合     

整合型HBV-DNA前C区基因突变与肝细胞癌的相关性

目的探讨整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区基因突变与肝细胞癌的关系。②方法应用聚合酶链反应－单链构象多态技术,对２９例肝癌、１２例慢性肝硬化和１４例非肝病病人的肝组织内整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区进行突变分析。③结果肝癌、肝硬化和正常肝组织中整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％,６６．６７％和１４．２９％,组间比较差异有显著性（χ２＝２９．４３,Ｐ＜０．００１）,３组整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区突变率分别为４１．６％,２５．０％和０,组间比较差异有显著性（χ２＝１２．４４,Ｐ＜０．０５）。④结论肝组织中整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区突变与肝细胞癌的发生和发展相关。     

肝细胞癌c-fos的表达及其与乙型肝炎病毒的关系

目的 研究肝癌组织中ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｃｏｆ ｍＲＮＡ的表达及其与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的关系。方法 采用免疫组化及原位杂交技术检测５９例肝细胞癌组织及５６例癌旁组织中ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ、ｃ－ｆｏｓ蛋白及ｃ－ｆｏｓ ｍＲＡＮ的表达。结果 癌旁肝组织ＨＢｓＡｇ阳性率为８７．５％（４９／５６）。肝癌组织ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为５９．３％（３５／５９）。肝细胞癌组织、癌旁肝组织ｃ－ｆｏｓ蛋白 阳性率     

HBV和HCV感染与原发性肝细胞癌发生的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测２０例肝细胞癌患者肝组织ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。检测发现８０％的ＨＣＣ癌组织中可检出ＨＢＶ－ＤＮＡ的存在，２５％的病例可以查到ＨＣＶ－ＲＮＡ；所有ＨＢＶ和ＨＣＶ阳性病例均为原发性肝细胞癌，而继发性肝细胞病例未能检出二种病毒核酸序列。本研究揭示我国引起ＨＣＣ发生的肝炎病毒以ＨＢＶ为主，ＨＣＶ也可能起到一定作用。     

胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在人肝癌及癌旁组织的表达

①目的探讨胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）在肝癌及癌旁组织的表达及意义。②方法应用抗人ＧＳＴπ多克隆抗体，以ＬＳＡＢ免疫组织化学方法检测７７例肝细胞癌及癌旁组织中ＧＳＴπ的表达。③结果７７例肝细胞癌中，ＧＳＴπ阳性表达率为８９．６％；癌旁组织中，增生结节ＧＳＴπ阳性表达率为７１．１％（２７／３８），肝硬化组织为２２．９％（８／３５）；肝癌及增生结节中ＧＳＴπ阳性表达率显著高于肝硬化组织（χ２＝４４．９，１６．９；Ｐ＜０．００１）；且肝癌与增生结节两组间ＧＳＴπ阳性表达率亦有显著性差异（χ２＝６．３５，Ｐ＜０．０２）。ＧＳＴπ表达与Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ组织分级无关（χ２＝１．９６，Ｐ＞０．２５）。④结论ＧＳＴπ可作为肝细胞癌及癌前病变的标志酶，对肝癌有辅助诊断价值     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

丙型肝炎病毒C33c抗原、核心抗原和HBxAg在人原发性肝内胆管细胞癌中的分布及意义

目的：研究丙型肝炎病毒Ｃ３３ｃ抗原及核心抗原在人肝内胆管细胞癌中的分布及意义。方法：以免疫组织化学方法检测ＨＣＶ两种抗原及ＨＢｘＡｇ在肝内胆管细胞癌及癌旁肝组织中定位及分布。结果：ＨＣＶＣ３３ｃ抗原位于癌细胞或肝细胞的胞浆内；ＨＣＶ核心抗原在癌组织主要呈核阳性，在癌旁肝以胞浆阳性为主。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原在癌组织及癌旁肝的阳性率分别为６０％（２１／３５）及１００％（２１／２１），ＨＣＶ核心抗原在上述两种组织的阳性率分别为８７．８％（２９／３３）及６１．９％（１３／２１）；ＨＢｘＡｇ在两种组织中检出率分别为７４．３％（２６／３５）及７６．２％（１６／２１）．Ｃ３３ｃ及ＨＢｘＡｇ双阳性分别为４８．６％（１７／３５）及７６．２％（１６／２１）．结论：除ＨＢＶ感染外，ＨＣＶ感染在人肝内胆管细胞癌的发生中可能起重要作用     

肝细胞癌组织中P16蛋白表达与丙型肝炎病毒感染的关系

目的：研究肝细胞癌（Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＨＣＣ）组织中Ｐ１６蛋白表达与丙型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）感染的关系。方法：用免疫组化ＡＢＣ法检测４６例ＨＣＣ及其癌旁肝组织中Ｐ１６蛋白和ＨＣＶ抗原的表达。结果：Ｐ１６蛋白的阴性表达率在ＨＣＣ癌组织（５８．７％,２７／４６）明显高于其癌旁组织（３６．８％,１４／３８）（Ｐ〈０．０５）,在Ｅｄｍｏｎｄｓ     

肝细胞癌与HCV、HBV感染关系的病例对照研究

对来自广东、广西、海南１０４例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者抗－ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ状况按年龄、性别配对和１：２的数量比设对照组进行了病例对照研究。结果表明：ＨＣＣ组抗－ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ阳性率分别为１２．５０％（１３／１０４）和８６．５４％（９０／１０４），分别显著高于对照组的１．４４％（３／２０８），Ｐ＜０．００５）和１３．４６％（２８／２０８，Ｐ＜０．００１）。与抗－ＨＣＶ、ＨＢｓＡｇ双阴性组比较，仅抗－ＨＣＶ阳性、仅ＨＢ－ｓＡｇ阳性以及两者均阳性时发生ＨＣＣ的相对危险度分别为４８．８２、５０．０７和８１．３６，显示ＨＣＶ、ＨＢＶ均与ＨＣＣ强相关，两者重叠感染时有协同致癌作用，作者提出预防和控制ＨＢＶ、ＨＣＶ感染对减少ＨＣＣ发病具有重要意义。     

人原发性肝细胞癌地高辛素标记HBV DNA探针的原位杂交与C－myc和P_（53）癌基因表达相互关系的研究

取自肝癌高发区的４０例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）标本，应用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ探针作原位杂交，检测ＰＨＣ和癌周肝组织内ＨＢＶＤＮＡ的表达，并用光敏生物素Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针原位杂交和用免疫组化检测ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ及Ｐ５３癌基因在ＰＨＣ和癌周肝组织内的表达。Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针肝内总阳性率为８０％，在ＰＨＣ内为６５％，而癌周肝组织中为７３％。ＨＢＶ－ＤＮＡ定位于肝细胞或癌细胞的胞浆和胞核内，而ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒在胞浆内比胞核内多。ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞癌周比癌内更多。结果表明，ＰＨＣ病例与ＨＢＶ存在关系密切；癌内ＨＢＶＤＮＡ大都属整合型，而癌周属游离型。研讨ＰＨＣ内ＨＢＶＤＮＡ的表达与ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，和Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达相互关系及致癌作用。     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌（ＨＣＣ），分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达。结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬化或／和慢活肝病变，且ＨＢｓＡｇ表达率９６．３％。３２例ＨＣＣ中检出８例Ｐ５３蛋白阳性（２５％），这种改变与ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达无明显关系，而与ＨＣＣ发生年龄有关；３２例ＨＣＣ组织中有２例ｐ５３基因第２４９号编码子突变（６．２５％），明显低于ＡＦＢ１高含量区ＨＣＣ，而与台湾、日本等ＡＦＢ１低含量区报道一致，提示：成都地区ＨＣＣ与ＨＢＶ感染确有密切关系；ｐ５３改变在ＨＣＣ发生上有一定作用，但是多数ＨＣＣ并无ｐ５３基因突变又提示ＨＣＣ发生尚涉及其它复杂机制；ＨＢＶ在ＨＣＣｐ５３基因改变中的作用机制值得进一步探索。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

原发性肝癌中 HBV X、S、Pre-S、C 基因片段整合与 ras、myc 癌基因表达的关系

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶＸ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶＸ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、６２．５％（２０／３２）和２５．０％（８／３２）。ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ在ＨＣＣ中的表达率分别为５０．０％（２０／４０）、８１．２％（２６／３２）。通过对ＨＣＣ中４种ＨＢＶ基因片段整合与ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ表达之间关系的研究，显示ｐ６２ｍｙｃ的表达与ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－Ｓ基因整合关系密切，ｐ２１ｒａｓ的表达则主要与ＨＢＶＸ基因整合有关（Ｐ＜０．０５）。提示ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－ＳＤＮＡ片段在宿主细胞染色体上的整合可能直接或通过其蛋白启动ｍｙｃ和（或）ｒａｓ癌基因的表达。     

整合型HBV—DNA前C区基因突变与肝细胞癌的相关性

１．目的 探讨整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区基因突变与肝细胞癌的关系。２．方法应用聚合酶链反应单链构象多态技术,对２９例肝癌１２例慢性肝硬化和１４例非肝病病伯肝组织内整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区进行突变分析。３．结果 肝癌、肝硬化和正常肝组织中整型ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％,６６．６７％和１４．２９％,组间比较差异有显著性（ｘ＾２＝２９．４３,Ｐ〈０．００１）,３组整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

肝细胞癌患者GB病毒C感染状况及其相关性研究

为了解ＧＢ病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）感染与肝细胞癌（下称肝癌）之间可能的相关性,采用一步法逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对１２４ 例肝癌患者进行了ＧＢＶ－ＣＲＮＡ 检测。结果：ＧＢＶ－ＣＲＮＡ 总检出率高达２６．６％ （３３／１２４）,３３ 例ＧＢＶ－ＣＲＮＡ 检出阳性者中,９０．９％ 合并有ＨＢＶ、ＨＣＶ感染;３３ 例非Ｂ非Ｃ型肝癌中,ＧＢＶ－ＣＲＮＡ检出率为９．１％ （３／３３）。３３ 例ＧＢＶ－Ｃ感染阳性肝癌患者中,９０．０％ （３０／３３）有既往输血史,高于ＧＢＶ－Ｃ感染阴性组（４８／９１）。上述结果提示,我国肝癌患者中ＧＢＶ－Ｃ感染的检出率高于美、欧、日等地同类患者的检出率,其在肝细胞癌及输血后肝炎发生中的病因学意义值得注意。