3MA抑制自噬降低头颈鳞癌细胞放疗抵抗性的实验研究

目的探讨6-氨基-3-甲基嘌呤(3MA)对头颈鳞癌细胞放疗抵抗性的影响。方法蛋白印迹法（Western blotting）检测CNE2、6 10B及其放疗抵抗细胞CNE2 Rs、6 10BRs中LC3B蛋白的表达；3MA作用于CNE2 Rs及TU686细胞后LC3B蛋白的表达；克隆集落形成实验检测3MA对头颈鳞癌细胞的放疗抵抗能力及生存分数的改变；细胞免疫荧光法检测3MA对放疗致DNA双链损伤相关指标γ H2AX焦点数量的改变。结果LC3B蛋白在放疗抵抗细胞较亲本细胞中表达增加；3MA能有效抑制自噬膜蛋白LC3B的表达；3MA抑制自噬后CNE2 Rs及TU686细胞克隆集落形成能力减弱，生存分数降低；3MA抑制自噬后CNE2 Rs及TU686细胞放疗组中γ H2AX焦点数量较对照组显著增加。结论3MA抑制自噬后可能影响放疗后DNA双链损伤修复，进而降低头颈鳞癌细胞的放疗抵抗性。     

嗓音训练联合拳击动作治疗青春期假声的疗效观察

目的观察嗓音训练配合拳击动作治疗青春期假声的临床疗效。方法收集2016年1月—2019年6月在中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈科就诊的青春期假声患者21例，均为男性患者，年龄16~35岁，病程1~20年。所有患者均表现为青春变声期或变声期后说话时音调偏高或用假声，杂音明显，偶有声嘶及破音，其中19例患者喉镜下表现为声带闭合欠佳。对患者采用嗓音训练联合拳击动作的矫治治疗，根据即时效果反馈，语训1~4次不等，每次1~2 h，以上过程均由专业语训师对患者进行指导及追踪。治疗前后采用动态喉镜及嗓音分析系统记录患者的喉镜下表现及嗓音声学参数，并进行对比分析，评估治疗效果。结果21例青春期假声患者发声基频（F0）较训练前均下降明显，其中18例患者基频恢复至成年男性正常水平，嗓音障碍指数(DSI)较前明显改善，最长发音时间(MPT)较前明显延长，差异具有统计学意义（P＜0.05）； 19例声带闭合不全的青春期假声患者经治疗后声带闭合良好。结论嗓音训练配合拳击动作治疗青春期假声效果显著，有一定的临床应用价值。     

PBL教学法在耳鼻咽喉科临床教学中的应用

以问题为基础的学习(problem-basedlearning,PBL)是一种以讨论问题为核心进行研究性学习的教学模式,是由美国神经病学教授Barrows于1969年在加拿大首创,目前已成为国际上较为流行的教学方法[1]。     

经鼻内镜鼻腔-鼻窦-翼腭窝-颞下窝手术入路的应用解剖学研究

目的通过对鼻腔-鼻窦-翼腭窝(pterygomaxillaryfossa,PMF)-颞下窝(infratemporalfossa,ITF)手术入路的相关结构进行解剖,为手术入路提供解剖学基础。方法对6例12侧成人尸头标本按中线锯开后进行解剖,并完全模拟该手术入路,对相关解剖标志进行了观察、拍摄和测量。结果翼腭窝-颞下窝区结构复杂,有重要的神经和血管经过。圆孔外口距正中矢状面距离为(19.18±1.48)mm,与后鼻孔上缘的距离为(19.81±1.52)mm,距鼻小柱根部为(77.31±5.13)mm。卵圆孔到鼻小柱根部为(86.40±3.76)mm。结论经鼻内镜鼻腔-鼻窦-翼腭窝-颞下窝手术入路能够简单和迅速地到达翼腭窝和颞下窝,可较好地显露翼腭窝及部分颞下窝区的结构。经鼻内镜入路进入PMF时术野的深度限制为70mm左右,注意保护位于蝶窦外侧壁的翼管神经、上颌神经及颈内动脉(internalcarotidartery,ICA),进入ITF时,术野的深度限制为80mm左右。     

放射线照射诱导鼻咽癌细胞上皮-间质转化的作用研究

目的 体外实验探讨放射线照射对鼻咽癌细胞上皮-间质转化的影响.方法 采用梯度递增放射线照射筛选构建鼻咽癌CNE-2放疗抵抗细胞(CNE-2 with radio resistance,CNE-2-Rs),并通过CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术验证CNE-2-Rs细胞的放疗抵抗性.显微镜下观察照射过程中,CNE-2细胞的形态学改变;Western blot检测不同照射时期CNE-2细胞上皮细胞标志物钙黏蛋白和间质细胞标志物波形蛋白的表达情况.结果 CCK-8结果表明,CNE-2-Rs细胞在同一时间点(第4天)不同照射剂量(4、6、8 Gy)以及同一照射剂量(4 Gy)不同时间点(2～5 d)下的存活率均高于其亲本细胞(P值均＜0.05);4 Gy放射线照射前细胞增殖能力基本一致,放射线照射后CNE-2增殖能力明显低于CNE-2-Rs;CNE-2-Rs细胞放射线处理后,集落形成能力强于亲本细胞(P值均＜0.05);拟合多靶单击模型和线性二次模型细胞存活曲线,结果表明,平均致死剂量(mean lethal dose,D0)、准阈剂量(quasi-threshold dose,Dq)、2 Gy细胞存活分数(survival fraction,SF2)和平均灭活剂量(mean inactivation dose,MID)增加,α和α/β值减少(P值均＜0.05);CNE-2-Rs细胞接受4Gy射线后,相对于CNE-2细胞出现S期、G2期细胞比例增多(P值均＜0.05).CNE-2-Rs细胞在形态上出现呈梭形、伪足伸出和细胞间连接变松散等上皮-间质转化形态学改变.照射总剂量达24 Gy后,CNE-2细胞钙黏蛋白表达下调和波形蛋白表达升高(P值均＜0.01).结论 鼻咽癌细胞在放射线照射过程中出现典型的上皮-间质转化形态学及分子标志物改变,提示上皮-间质转化可能在鼻咽癌放疗抵抗中发挥了重要作用.     

AP1反应元件的确定及在细胞角蛋白13基因表达调控中的作用

目的 确定细胞角蛋白13（cytokeratin 13,CK13)基因5'旁侧－nt，199－－nt.192碱基CTGAATCA反应元件的类型及其在CK13基因表达调控中的作用。方法 采用报告基因分析的,构建CK13基因5'旁侧513bp全片段，－nt.207- nt.63与氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体，并采用PCR定点诱变技术，构建与－nt.207 nt.63同样长短，但-nt.197和T、G分别定点诱变为A，T的氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体，通过脂质体介导的转染技术导入HeLa细胞，检测各重组体报告基因的瞬间表达，确定CK13基因5'旁侧－nt.199--nt.192碱基CTGAATCA在CK13基因表达调控中的作用；并采用凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验验证CK13基因5'旁侧中CTGAATCA反应元件的类型。结果 凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实CK13基因5'旁侧中CTGAATCA反应元件的类型。结果 凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实CK13基因5'旁侧－nt.199--nt.192碱基CTGAATCA反应元件是AP1反应元件，它促进CK13基因的表达。结论 CK13基因5'旁侧起始密码上游－nt.199--nt.192的碱基CTGAATCA是AP1反应元件，而不是cAMP反应元件，它可增强CK13基因5'旁侧的转录活性。     

鼻咽恶性淋巴瘤43例误诊分析

目的 分析鼻咽恶性淋巴瘤的误诊原因，探讨减少误诊的措施。方法对我院1990至2002年间住院治疗的120例鼻咽恶性淋巴瘤病人进行回顾性分析。结果120例鼻咽恶性淋巴瘤中有43例误诊，误诊率高达35.8％。结论鼻咽恶性淋巴瘤易发生临床误诊和病理误诊，全面掌握鼻咽恶性淋巴瘤的临床表现特点、重视鼻咽的检查和活检、注意影像学检查、结合实验室检查及免疫组化等是减少鼻咽恶性淋巴瘤误诊的有效措施。     

维甲酸诱导后CK13基因在鼻咽癌中的表达研究

目的探讨维甲酸(retinoic acids,RA)对鼻咽癌细胞株HNE1生长及表型的作用,同时观察维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1后细胞角蛋白基因13(cytokeratin 13,CK13)表达情况。方法应用细胞培养的方法观察维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1细胞的生长状况,利用Northern杂交技术分析维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1后CK13基因的表达。结果维甲酸能显著抑制鼻咽癌细胞的生长,抑制的强度取决于维甲酸的浓度和诱导持续时间,当维甲酸的浓度为1×10-4 M/L时,前4天下降约50％,第5天开始细胞停止增殖,细胞数逐渐减少,细胞逐渐老化死亡。维甲酸处理后的鼻咽癌细胞从典型的多边形变成扁平、细长,类似纤维细胞的形态。维甲酸诱导后的鼻咽癌细胞中CK13基因的表达明显上调,且与维甲酸的浓度有关。结论维甲酸能促进鼻咽癌细胞的分化,可能是通过上调CK13基因的表达而实现的。     

细胞角蛋白基因13在鼻咽癌中的表达研究

目的　探讨细胞角蛋白基因 13(Cytokeratin 13,CK13)在人鼻咽癌 (NPC)中的表达。方法应用免疫组化检测了 40例NPC组织和 8例慢性鼻咽炎 (CINE)组织中CK13蛋白水平的表达 ,同时应用Northern杂交对其中 32例NPC和 8例CINE组织进行了mRNA水平检测 ,并分析了CK13表达与NPC临床特征的关系。结果　在NPC中 ,CK13在蛋白质水平和mRNA水平均较CINE显著降低 (P <0 0 1) ,且CK13表达与NPC颈淋巴结转移有显著相关性 (P <0 0 5 ) ,与肿瘤的T分期无显著相关性(P >0 0 5 )。结论　CK13基因的表达可能与NPC组织分化以及颈淋巴结转移有关。     

A cDNA located on chromosome 7q32 shows loss of expression in epithelial cell line of nasopharyngeal carcinoma

ｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｍａｒｋｅｒｓｏｎ 7ｑ32ｉｎＤＮＡｆｒｏｍ 2 4ｂｉｏｐｓｉｅｓｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｍａｔｃｈｅｄｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ 2 0ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ (ＥＳＴｓ)ｏｎ 7ｑ32ｂｅｔｗｅｅｎｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ 1(ＨＮＥ1)ａｎ…