透眭化细胞乳糖酶与提纯的乳糖酶酶学性质比较

通过透性化细胞处理技术和提取纯化两种方法制备乳糖酶,对两种乳糖酶的酶学性质进行了分析比较,结果表明,两种酶的最适反应温度和最适反应pH值相近,透性化细胞乳糖酶pH值稳定性和热稳定性范围大于纯乳糖酶。K^＋、Mn^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋对两种乳糖酶都有激活作用,Cu^2＋有较强的抑制作用,金属离子对纯乳糖酶活性的影响大于对透性化细胞乳糖酶的影响。麦芽糖、葡萄糖等糖类对两种乳糖酶的活性有抑制作用。在完全相同的反应条件下测定的两种乳糖酶的Km和Vmax有所不同。     

复合膳食纤维固体饮品的研制

以豆腐渣和海带为原料水解制备水溶性膳食纤维(SDF)和多糖,并制备复合膳食纤维固体饮品.用碱法和酶法结合提取大豆不溶性膳食纤维(IDF)和SDF,采用复合酶法制备海带多糖.结果表明:大豆IDF的提取条件为氢氧化钠浓度5%,浸泡时间60min、浸泡温度80℃;纤维素酶添加量为IDF重量的1%,纤维素与水的比例为1:12(W/V),pH为4.5,水解时间为12h,水解温度为40℃,在以上条件下,SDF的产率为36.01%.提取海带多糖条件为加入海带粉重1%的复合酶,复合酶(纤维素酶、果胶酶和蛋白酶)的最佳配比为2:1:2,在pH6.0、50℃酶解6h总多糖得率最高,可达10.71%.     

酪蛋白糖巨肽通过树突细胞发挥免疫调节作用的初步研究

研究用酪蛋白糖巨肽(CGMP)刺激体外培养的小鼠骨髓源树突细胞,观察CGMP对树突细胞成熟的影响,初步探讨CGMP作为功能性食品对免疫的调节作用。实验选用6～8周雄性C57BL/6小鼠,分离培养小鼠骨髓细胞,用重组小鼠白细胞介素-4 (rmIL-4)、重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导其分化,在培养的第6天,分别加入RPMI1640完全培养基作为空白对照, 脂多糖(LPS)为阳性对照和0.1、1、10μg/mL的CGMP 3个实验剂量。培养至第8天收集细胞,进行三色荧光标记,用流式细胞仪检测细胞表面标志：CD11c、CD80、CD86、MHC-Ⅱ。另一方面将第8天的树突状细胞(DCs)和T淋巴细胞共孵育进行混合淋巴细胞反应,96h后用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)检测T淋巴细胞的增殖。结果表明：3个剂量的CGMP均具有刺激DCs成熟的作用,其中CGMP为1μg/mL时,DCs的各种成熟标志均达到最高水平,其中,CGMP对MHC-Ⅱ的刺激作用最为强烈,而MHC-Ⅱ在DCs对外源抗原的提呈中发挥重要作用;混合淋巴细胞反应结果显示各个不同浓度CGMP作用的DCs均具有不同程度的刺激T淋巴细胞增殖的能力,并且DCs:T为1:10时T淋巴细胞的增殖作用最明显。     

5(6)-cFDA 标记乳酸菌细胞的影响因素

选用常规发酵乳菌种,探讨不同溶剂、不同浓度的羧基荧光素二醋酸酯(5-(6)-Carboxyfluorescein diacetate,5(6)-cFDA)标记乳酸菌细胞的影响因素。结果显示：水、PBS 和二甲基亚砜(DMSO)配制的5(6)-cFDA 标记初期,细胞标记率分别为94.8%、95.2% 和99.77%,放置30d 后细胞标记效果分别下降到51.53%、55.6% 和96.7%;每毫升菌悬液加60μL 的5mg/mL 5(6)-cFDA(相当于终浓度为6.52 × 10-7mol/L),其荧光强度与5(6)-cFDA 浓度成正比,且标记效果最理想。实验还证实了1 × 106～1 × 107cells/mL 是流式细胞仪检测细胞活性较适合的浓度,且标记率较高;在pH7.0 的条件下对细胞活性和发光强度影响最小,其标记率达到98.3%。     

乳源酪蛋白糖巨肽对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群多样性的影响

研究乳源酪蛋白糖巨肽（casein glycomacropeptide,CGMP）对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠肠道菌群多样性的影响,从肠道菌群角度探讨乳源CGMP改善溃疡性结肠炎与肠道菌群变化关系的可能机制。恶唑酮（oxazolone,OXZ）诱导小鼠UC模型,设立正常对照组、模型对照组、乳源CGMP组（50 mg/（kg·d））和柳氮磺胺吡啶（salazosulfapyridine,SASP）治疗组（40 mg/（kg·d））,其中正常对照组和模型对照组灌胃相应剂量的生理盐水,连续灌胃7 d。利用Ion Torrent PGM技术检测实验期间小鼠肠道菌群多样性的变化。UC小鼠肠道菌群结构失调,其肠道菌群多样性降低以及优势菌群比例下降。对测序序列通过主成分分析（principal componentanalysis,PCA）、UniFrac等统计分析发现,UC小鼠肠道中厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）的丰度降低而放线菌门（Actinobacteria）和变形菌门（Proteobacteria）的丰度升高。乳源CGMP干预后UC小鼠肠道菌群多样性增加,厚壁菌门和拟杆菌门的相对比例高于模型组,提示乳源CGMP可通过调节失衡的肠道菌群来改善UC。     

小扁豆中多酚物质的提取与组分鉴定

采用有机溶剂法提取小扁豆中多酚类物质,利用响应面试验(RSD)对提取工艺条件进行优化,并采用高效液相色谱(HPLC)对提取物进行分析和鉴定。结果表明,当料液比1︰190(m︰V),提取温度82.60℃,丙酮浓度12.96%时小扁豆多酚平均产率可达到26.94%(m/m)。分析结果显示:采用该方法提取的小扁豆多酚主要由没食子酸、香草醛、香豆酸、芦丁、槲皮素等物质组成。     

微生态制剂调节便秘、腹泻人群肠道菌群结构与产短链脂肪酸关键菌属的相关性

为探究微生态制剂对健康、便秘和腹泻人群肠道菌群结构的调节能力。本研究以健康、便秘和腹泻人群 为对象,令其定时、定量摄入水苏糖（stachyose tetrahydrate,Sta）、益生菌纯粉（probiotics power,PP）、益生 菌剂（probotic preparations,PPrs）3 种微生态制剂,共6 周,采集新鲜粪便样本并提取DNA,利用Ion torrent PGM 二代测序技术进行16S rRNA V3区扩增子测序,并用气相色谱检测粪便中的短链脂肪酸（short-chain fatty acids, SCFAs）表达水平,最后联合多变量统计学分析方法对测序数据进行多样性分析。结果表明：绝大多数序列属 于硬壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）,约占总序列数的94.37%。随着微生态制剂的摄入,受 试人群肠道菌群的群落结构多样性明显增加,毛螺菌科（Lachnospiraceae）中的Blautia、Lachnospira以及瘤胃菌 科（Ruminococcaceae）中的Faecalibacterium、Oscillospir等与产SCFAs相关的菌属都明显地增长,其中Blautia和 Faecalibacterium与SCFAs含量呈显著正相关。SCFAs的含量以及肠道中相应菌群的增长与减少都与微生态制剂的成 分相关,在3 组受试人群中,服用Sta组,丙酸含量显著增加,乙酸与丁酸含量也在2 周左右有所增加,并伴随产 SCFAs的菌属快速且大量增长;PP组肠道中只有乙酸含量有所增加,丙酸和丁酸含量呈现降低的趋势,而产SCFAs 的菌属增长较明显;服用PPrs组,乙酸和丁酸含量明显增加,且便秘和腹泻人群在停止服用后,其SCFAs的含量 接近于健康人群,常见的Bifidobacterium、Lactobacillus、Parabacteroides等外源性益生菌均明显增长,可能性致病 菌相对丰度降低,表明服用PPrs对肠道菌群结构的调节作用以及影响更大。此外,根据肠型的分析,Bacteroides和 Prevotella在饮食的共同驱动下会调整并改变肠型,而仅通过所选择的微生态制剂的作用,在驱动肠型改变方面不 显著。综上所述,肠道疾病状态的人群服用微生态制剂后,肠道菌群结构向正常人群的状态调整,菌群多样性和 SCFAs表达水平提高,表现出持续抑制肠道有害细菌生长,促进有益菌的增殖,以此来维持肠道菌群结构的稳态。 经扩增子测序分析获得初步结论为：微生态制剂有改变腹泻、便秘人群肠道菌群整体结构的功效,并且PPrs要比单 一的Sta或PP调整肠道菌群的能力更突出。     

酪蛋白糖巨肽对小鼠肠道双歧杆菌增殖水平的影响

采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）分析不同剂量酪蛋白糖巨肽（casein glycomacropeptide,CGMP）对小鼠肠道双歧杆菌增殖水平的影响,揭示乳源CGMP是否有增殖肠道关键益生菌的功能。选用50 只健康BALB/c小鼠,随机分为对照组,安慰组（灌胃生理盐水0.2 mL）,乳源CGMP低、中、高剂量组（灌胃等体积不同质量浓度的乳源CGMP）,灌胃周期为2 周。于灌胃后第0、3、5、7、9、11、15天及停止灌胃后1 周（第21天）采集的小鼠新鲜粪便,并进行粪便菌体基因组DNA抽提。依据双歧杆菌的16S rRNA基因序列设计5 对种属特异性引物,以两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）CICC6071的基因组DNA作为标准品,进行梯度稀释制作标准曲线;分析样品PCR扩增产物的熔解曲线,评价反应的特异性。结果表明：Real-time PCR可准确定量小鼠肠道内双歧杆菌数量;且灌胃中剂量乳源CGMP可以促进小鼠肠道内双歧杆菌的增殖,在灌胃第11天时小鼠肠道内双歧杆菌数量达到最高值,即乳源CGMP对小鼠肠道双歧杆菌的增殖作用存在剂量选择性。     

流式细胞术快速检测直投式发酵剂菌体活力

利用荧光染料标记直投式发酵剂菌体细胞并结合流式细胞术快速检测和分析菌体细胞的活力以及生存状态,对科学地评价各种微生物发酵剂的品质具有现实意义。研究选用保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）和嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）两种直投式发酵剂以及制备的新鲜菌体细胞和热处理菌体细胞作为分析检测对象,利用流式细胞术结合羧基荧光素双乙酸酯（5-（6）-carboxyfluoresceindiacetate,5（6）-cFDA）和碘化丙啶（两种荧光染料检测了这些菌体的细胞活力。研究结果表明,5（6）-cFDA和PI双染色方法适合检测L. bulgaricus直投式发酵剂中菌体的存活力,该发酵剂中菌体存活率仅为4.7%,活力较低;而利用5（6）-cFDA单染色方法检测S. thermophilus直投式发酵剂中菌体存活力的效果较好,其菌体存活力接近于90%,活力较强;同时,发酵活力验证也得到了相同的结果;另外,研究证实了PI不能很好地区分S. thermophilus的死活细胞。因此,流式细胞术可作为直投式发酵剂生产行业快速检测评价产品质量的可靠方法。