茶叶糖蛋白调控树突状细胞对T淋巴细胞增殖和CTL活性的影响

为探讨茶叶糖蛋白(TGP)对小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)表型及功能的影响,采用细胞因子诱导法,以贴壁法获得贴壁单核细胞,添加重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白细胞介素-4(rmIL-4)进行体外诱导培养,倒置显微镜动态观察细胞形态的变化;采用流式细胞术检测DCs的表面标志CD11c和MHC Ⅱ类分子表达;采用MTT法检测TGP对DCs刺激OVA未致敏或致敏淋巴细胞增殖的影响;初步探讨TGP对DCs抗小鼠SP2/0骨髓瘤功能的影响.结果表明,经TGP作用48h后,树突状细胞形态更加典型、成熟;与阴性对照相比,TGP显著促进树突状细胞表面CD11c和MHC Ⅱ的表达;TGP可增强DCs的刺激致敏淋巴细胞增殖的能力,说明DCs诱导免疫应答及抗原提呈功能均增强;与未经抗原负载相比,TGP抗肿瘤机制与促进DCs抗原呈递能力有密切的关系,可提高机体对肿瘤细胞的特异性主动免疫功能,而TGP的干预可促进这一功能的提高.茶叶糖蛋白可以促进树突状细胞表型及功能的成熟.     

乳源酪蛋白糖巨肽对小鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的：酪蛋白糖巨肽（caseino-glycomacropeptide,CGMP）是κ-酪蛋白经凝乳酶和胃蛋白酶酶解后形成的含有64 个氨基酸的不同种类肽段,具有多种生物学活性和独特的营养特性,探讨CGMP对小鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法：以健康小鼠为实验动物,利用流式细胞仪分别检测长期和短期灌胃不同剂量的CGMP（30、60、120 μg/d）后,小鼠外周血淋巴细胞亚群的变化。结果：乳源CGMP干预后的结果表明,在短期灌胃实验中,灌胃不同剂量后CD3+淋巴细胞数比例均显著降低,12 h后恢复灌胃前水平;CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞比例在灌胃30 μg和120 μg CGMP 4 h后均显著降低,而60 μg组则无明显变化;长期灌胃实验中,在第2天和第4天,外周血中CD3+淋巴细胞和CD3+CD4+比例与对照组相比显著升高（P＜0.05）;120 μg/d剂量组的小鼠外周血中CD3+CD8+淋巴细胞比例与对照组相比显著升高（P＜0.05）,而30 μg/d剂量组在2、4、6、8 d与对照组相比无显著变化（P＞0.05）;在第2天,30 μg/d和120 μg/d剂量组外周血中CD3+CD4+/ CD3+CD8+比例与对照组相比显著升高（P＜0.05）。结论：乳源CGMP能够引起正常小鼠的外周血淋巴细胞亚群发生变化,调节机体T淋巴细胞亚群的平衡,由此提示CGMP可作为功能性食品对外周血T淋巴细胞亚群的失衡有缓解作用。     

酪蛋白糖巨肽对小鼠肠道免疫系统的影响

研究酪蛋白糖巨肽(CGMP)对正常小鼠肠相关淋巴组织的免疫应答反应的影响,对阐述CGMP 的生物学功能具有重要意义。本实验将BALB/c 雌性小鼠28 只随机分为4 组,每组7 只,分别为0.9% 生理盐水对照组(0.2mL/d),低、中、高3 种剂量组(30、120、300μg/d)。连续灌胃16d 后,取脾脏、PP 结(peyer s patches)和肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node,MLN),制备细胞悬液,进行三色荧光标记后,用流式细胞仪检测CD3+、CD3+CD4+ 和CD3+CD8+T 淋巴细胞亚群的变化。结果表明：CGMP 各剂量组均能够促进脾脏和PP 结中CD3+ 和CD3+CD4+ 细胞的显著增加(P ＜ 0.05),高剂量能引起脾脏CD3+CD8+ 淋巴细胞的显著增多(P ＜ 0.05),低剂量能引起脾脏CD3+CD4+/ CD3+CD8+ 的显著增加(P ＜ 0.05);低剂量CGMP 能使MLN 中CD3+CD8+ 淋巴细胞显著增减少(P ＜ 0.01)。研究证实长期灌胃CGMP 会诱导肠黏膜产生获得性的免疫应答,并且不会引起机体产生口服耐受。     

卵转铁蛋白对树突状细胞成熟的影响

为考察卵转铁蛋白(OVT)对髓源性树突状细胞(BMDCs)成熟的影响。采用不同浓度OVT单独刺激和脂多糖(LPS)+不同浓度OVT共刺激第6 d小鼠BMDCs 48 h,通过倒置显微镜观察细胞形态,并用流式细胞仪测定各组CD11c+细胞比例以及DCs表面MHC-II,CD80和CD40分子表达量。结果表明,不同浓度OVT组刺激的DCs周围毛刺状突起增加,呈现典型的树突状细胞形态,且上调CD11c+细胞比例以及DCs表面MHC-II、CD80和CD40分子表达量。LPS+不同浓度OVT组中,低浓度(≤25μg/m L)组可提高CD11c+细胞比例,上调MHC-II、CD80和CD40表达量;高浓度(25μg/m L)组则能下调CD11c+细胞比例和DCs表面MHC-II、CD80和CD40表达量。因此,不同浓度OVT均能刺激DCs的成熟;LPS+不同浓度OVT共刺激DCs,能显著提高DCs的成熟度,但呈现剂量依赖型,即低浓度时,两者表现出协同作用,高浓度时两者表现出拮抗作用。     

紫薯花色苷对小鼠淋巴细胞免疫功能的调节作用

为探讨紫薯花色苷(PSPA)免疫调节作用,制备小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测不同浓度PSPA对淋巴细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测不同浓度PSPA对淋巴细胞膜表面标志和细胞周期的影响。结果:PSPA各浓度组淋巴细胞刺激指数均极显著(p<0.01)高于空白对照组;PSPA 20 mg/mL浓度组淋巴细胞刺激指数极显著(p<0.01)高于阳性对照组。PSPA 2.5 mg/mL浓度组淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值显著(p<0.05)高于空白对照组,PSPA 5、10和20 mg/mL浓度组淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值均极显著(p<0.01)高于空白对照组;PSPA 2.0浓度组淋巴细胞亚群CD4+CD8+百分率均极显著(p<0.01)高于阳性对照组。PSPA各浓度组处于S期的淋巴细胞的百分率均极显著(p<0.01)高于空白对照组。PSPA 20 mg/mL浓度组处于S期的淋巴细胞的百分率均极显著(p<0.01)高于阳性对照组。表明PSPA通过促进淋巴细胞增殖、提高CD4+/CD8+亚群比值、增加进入S期细胞的百分率,从而调节淋巴细胞的免疫功能。结论:PSPA具有明显的免疫调节活性。     

茶树菇凝集素检测醋酸格拉替雷诱导小鼠的CD8~+T淋巴细胞表面糖基化研究

醋酸格拉替雷是治疗多发性硬化症的一线药物,可通过诱导调节性CD8+T细胞发挥免疫调节作用。为研究GA诱导的CD8+T淋巴细胞,我们将茶树菇分离的两种凝集素AAL(Agrocybe aegerita lectin)和AAL2(Agrocybe aegerita lectin 2),通过生物素标记结合流式细胞仪,分别分析GA诱导的免疫耐受小鼠模型中脾脏、腹股沟淋巴结CD8+T淋巴细胞的糖基化水平,及细胞因子的表达。发现脾脏AAL+CD8+,AAL2+CD8+T淋巴细胞的比例(%)分别为8.46±3.1和9.08±2.8,淋巴结AAL+CD8+,AAL2+CD8+T淋巴细胞的比例(%)分别为10.65±4.6和8.25±5.9,且脾脏、淋巴结CD8+T淋巴细胞中AAL+细胞的百分比均显著高于CD8-T淋巴细胞(p0.05)。淋巴结中AAL+CD8+T细胞表达IFN-γ的细胞比例显著高于AAL-CD8+T细胞,AAL2+CD8+T细胞表达IFN-γ和perforin细胞比例均显著高于AAL2-CD8+T细胞。该结果为CD8+T淋巴细胞表面糖基化研究提供了初步数据,并暗示糖基化水平与细胞因子分泌有关。     

白藜芦醇对小鼠脾淋巴细胞免疫调节活性的影响

研究了白藜芦醇(Res)对小鼠脾淋巴细胞免疫调节活性的影响。无菌分离小鼠脾,制备淋巴细胞,并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入刀豆蛋白A(Con A)、脂多糖(LPS)以及5、10、20、40μg/m L不同浓度的Res,经过不同时间培养后,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖,ELISA法检测淋巴细胞分泌IL-4和IL-12的水平,流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期和细胞膜表面标志。结果表明:Res能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,能与Con A协同促进小鼠脾淋巴细胞增殖,不能与LPS协同促进小鼠脾淋巴细胞增殖;能增强IL-4和IL-12的分泌;能提高小鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+的比值;能提高脾淋巴细胞周期中细胞进入S期细胞的百分率。综上,Res能增强小鼠脾淋巴细胞的免疫调节活性。     

茶树菇凝集素AAL、AAL-2检测小鼠CD8~+T淋巴细胞表面糖基化研究

本研究使用两种大型真菌茶树菇新型凝集素AAL(Agrocybe aegerita lectin)和AAL2(Agrocybe aegerita lectin 2),以检测小鼠CD8~+T淋巴细胞表面糖基化。用生物素标记的AAL和AAL2结合流式细胞仪,分别分析从C57BL/6小鼠脾脏和腹股沟淋巴结分离出来的CD8~+T淋巴细胞表面的糖基化水平,及其细胞因子表达水平。结果发现脾脏中AAL~+CD8~+,AAL2~+CD8~+T淋巴细胞所占的比例(%)分别为6.72±3.00和12.18±5.28,而腹股沟淋巴结的AAL~+CD8~+,AAL2~+CD8~+T淋巴细胞所占的比例(%)分别为12.18±5.28和10.15±3.46。细胞因子表达水平结果发现小鼠脾脏AAL2~+CD8~+T细胞表达perforin的细胞比例低于AAL2-CD8~+T细胞(p0.05,有统计学意义),腹股沟淋巴结中AAL~+CD8~+T细胞表达perforin的细胞比例则高于AAL-CD8~+T细胞(p0.05,有统计学意义)。该数据为研究小鼠脾脏和腹股沟淋巴结CD8~+T细胞表面糖基化提供了新的数据,也为两种新型凝集素AAL和AAL2的应用提供理论依据。     

干酪乳杆菌胞外多糖诱导小鼠骨髓来源树突细胞成熟以及分泌IL-6、TGF-β和IL-23

为研究干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）促进体外培养的小鼠未成熟骨髓来源树突细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）成熟的作用,分析不同剂量的EPS对BMDCs分泌细胞因子白细胞介素（interleukin,IL）-6、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）和IL-23的影响,并检测EPS对BMDCs抗原提呈能力的影响。首先从干酪乳杆菌中分离纯化出EPS,并检测EPS的纯度;把从BALB/c小鼠体内分离出的骨髓细胞分化为BMDCs,未成熟BMDCs分别与磷酸盐缓冲液、不同剂量EPS和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）体外培养,采用流式细胞法检测了BMDCs成熟表面标记物MHC II和CD86的表达,酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法分析了IL-6、TGF-β和IL-23的表达量,CCK-8法检测了BMDCs与小鼠脾淋巴细胞的混合培养体系中淋巴细胞的增殖率。结果表明：分离出EPS的纯度约为95%;EPS能够上调BMDCs表面MHC II和CD86的表达量;EPS可以显著促进BMDCs分泌IL-6、TGF-β和IL-23（P＜0.05）,但促进水平低于LPS;EPS可以明显促进BMDCs刺激异基因淋巴细胞的增殖。综上所述,在体外实验中,干酪乳杆菌EPS能够促进BALB/c小鼠BMDCs的成熟,诱导BMDCs分泌与辅助性T17细胞分化和增殖相关的细胞因子IL-6、TGF-β和IL-23,并且可以增强BMDCs的抗原提呈能力。     

麒麟菜多糖体内抗肿瘤机理研究

本文对麒麟菜多糖抑制小鼠体内H22肝癌细胞增殖的作用机理进行了研究。构建动物肿瘤模型,观察实验期内各组小鼠肿瘤体积及脏器指数的变化,并通过Elisa实验确定各组小鼠血清中肿瘤特异性抗体含量,流式细胞术检测小鼠胸腺、脾脏、外周血及实体肿瘤内T细胞亚群比例,HE染色和PI单染分析小鼠实体肿瘤内细胞状态。结果表明,灌喂600 mg/(kg?d)麒麟菜多糖可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,有效保护其胸腺和脾脏,并可显著增强胸腺发育分化CD4~+T细胞的能力(p0.05),提高小鼠血液中肿瘤特异性抗体的含量(p0.05)和T细胞亚群比例(p0.05);模型组和多糖组小鼠实体肿瘤浸润淋巴细胞中均主要是CD8~+T细胞,但多糖组小鼠实体瘤内细胞凋亡率显著升高(p0.05)。因此初步断定麒麟菜多糖可显著提高荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫水平,使CD8~+T细胞在CD4~+T细胞和肿瘤特异性抗体的辅助下有效抑制H22细胞体内增殖。     

山楂黄酮对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用

为研究山楂黄酮对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用,将小鼠分为空白组、左旋咪唑组和不同浓度山楂黄酮处理组(100、200、400和800 μg/mL)。利用MTT法检测山楂黄酮对淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测山楂黄酮对淋巴细胞白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的影响,流式细胞术检测山楂黄酮对淋巴细胞膜表面标志物(CD4+和CD8+)的影响。结果表明,山楂黄酮在100~400 μg/mL对淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子的分泌具有浓度依赖性,IL-6和IFN-γ的分泌极显著高于空白组(P<0.01),IL-4的分泌极显著低于空白组(P<0.01),且400 μg/mL处理组与左旋咪唑组无统计学意义(P>0.05);对淋巴细胞亚群CD4+CD8-、CD4-CD8+具有浓度依赖性的促进作用,且极显著高于空白组、左旋咪唑组(P<0.01);对淋巴细胞亚群CD4+/CD8+百分比极显著高于空白组、左旋咪唑组(P<0.01),200 μg/mL浓度组CD4+/CD8+的比值极显著高于其它浓度组(P<0.01)。100~400 μg/mL山楂黄酮通过诱导淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子IL-6、IL-4和IFN-γ的分泌,提高淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值,从而发挥免疫调节作用。     

Regulation of maturation and function of dendritic cells by tea glycoprotein

Tea glycoprotein (TGP) is a glycoconjugate purified from the leaves of green tea (Camellia sinensis). The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory effects of TGP on dendritic cells. Murine bone marrow cells were cultured with recombinant mouse (rm)GM-CSF and rmIL-4 for 6?days followed by another 2?days in the presence of TGP or lipopolysaccharide (LPS). The results showed that TGP did not have significant inhibition on cell proliferation and apoptosis. Compared with untreated cells, dendritic cells treated with TGP (50?μg/ml) expressed higher levels of MHC class II molecules and major co-stimulatory molecules such as CD 86, CD 80 and CD 40. However, the endocytic activity was impaired markedly. TGP could enhance the secretion of IL-12p70, but inhibit IL-10 and NO secretion. The activation of antigen-presenting ability and the lymphocyte proliferation of mixed lymphocyte reaction by dendritic cells was also enhanced after treatment with TGP. In addition, an enhanced expression of CCR7 mRNA of dendritic cells treated with TGP was similar to dendritic cells treated with LPS. Taken together, TGP was capable of promoting both phenotypic and functional maturation of murine bone marrow-derived dendritic cells in vitro, which promises the potential clinical application of TGP.     

银杏多糖对小鼠淋巴细胞免疫调节作用的研究

为研究银杏多糖对小鼠淋巴细胞的免疫调节作用,无菌分离小鼠脾淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液,实验设空白组、阳性组（终浓度为5 μg/mL的左旋咪唑）、银杏多糖处理组（终浓度为25、50、100、200、400 μg/mL）。采用MTT法检测银杏多糖对淋巴细胞增殖的影响,流式细胞术检测银杏多糖对淋巴细胞周期的影响,ELISA法检测银杏多糖对淋巴细胞白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）分泌量的影响,qRT-PCR法检测银杏多糖对淋巴细胞IL-4、IFN-γ mRNA表达的影响。结果显示,与空白组相比,银杏多糖处理组和阳性组的淋巴细胞增殖指数均极显著高于空白组（P<0.01）;与阳性组相比,200 μg/mL银杏多糖处理组的淋巴细胞增殖指数低于阳性组,但无统计学意义（P>0.05）。与空白组相比,25~400 μg/mL银杏多糖处理组G₀/G₁期占比极显著降低、S期和G₂/M期细胞总占比极显著增加（P<0.01）;与阳性组相比,200 μg/mL时G₀/G₁期占比降低、S期和G₂/M期细胞总占比极显著升高（P<0.01）。与空白组相比,阳性组、25、100、200 μg/mL银杏多糖处理组的IFN-γ/IL-4比值均极显著低于空白组（P<0.01）,400 μg/mL银杏多糖处理组的IFN-γ/IL-4比值极显著高于空白组（P<0.01）;与阳性组相比,100、200 μg/mL银杏多糖处理组IFN-γ/IL-4比值低于阳性组,但无统计学意义（P>0.05）。与空白组相比,银杏多糖处理组和阳性组的细胞因子IFN-γ、IL-4分泌量及其mRNA相对表达量均极显著高于空白组（P<0.01）;与阳性组相比,200 μg/mL银杏多糖处理组的细胞因子IFN-γ、IL-4分泌量及其mRNA相对表达量低于阳性组,但无统计学意义（P>0.05）。由此可见,银杏多糖可以通过增加小鼠脾淋巴细胞增殖、减少G₀/G₁期细胞的阻滞、促进DNA合成、促进细胞因子IFN-γ、IL-4的分泌及其mRNA的表达、维持IFN-γ/IL-4（Th1/Th2）动态平衡,来提高机体免疫功能。     

白术多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响

目的：研究白术多糖对人外周血来源的树突状细胞（dendritic cells,DC）表型和功能的影响。方法：应用流式细胞术检测DC表面标志分子HLA-DR、CD86、CD83和CD80的表达及吞噬FITC-dextran的情况,酶联免疫吸附实验检测DC分泌白细胞介素-12（interleukin-12,IL-12）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）情况,Western blotting检测DC表面Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）。结果：白术多糖能够促进TLR4的表达,促进DC表面分子HLA-DR、CD86、CD83和CD80的表达,并且呈剂量依赖性,同时还使DC吞噬能力下降;白术多糖能够促进DC分泌IL-12和TNF-α。此外,TLR4抗体可以减少IL-12和TNF-α的产生。结论：白术多糖可以促进人外周血来源的DC表型及功能的成熟。     

茶树油调控树突状细胞的表型和功能

本文主要探讨了茶树油对树突状细胞表型和功能的影响。采用茶树油(0.005μL/mL)干预未成熟的树突状细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞表型,MTT法检测刺激淋巴细胞增殖能力。结果发现经茶树油干预后,以CD11c设门,树突状细胞高表达H-2Db(48.20%),I-Ab(6.60%)和CD86(41.00%),和空白对照组比较分别达到1.28倍,3.40倍和1.28倍的增长。混合淋巴培养实验发现茶树油能够增强DC刺激淋巴细胞增殖的能力,降低树突状细胞的吞噬功能。初步表明茶树油可以促进树突状细胞的表型和功能成熟。     

乳源酪蛋白糖巨肽对结肠癌HT-29细胞中COX-2、iNOS、GST-π表达的影响

目的:研究乳源酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)对人结肠癌HT-29细胞增殖及细胞中环氧合酶-2(cyclooxyenase-2,COX-2)、诱导性一氧化氮合酶(induc ible nitric oxide synthase,iNOS)及谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione-S-transferaseπ,GST-π)表达的影响,为探讨CGMP作为功能性食品提供可靠的依据。方法:采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验测定不同剂量CGMP作用12、24、48 h对结肠癌HT-29细胞增殖的抑制情况;在不同剂量CGMP作用HT-29细胞24 h后,通过逆转录聚合酶链反应扩增细胞中提取的COX-2 mRNA、iNOS mRNA、GST-πmRNA,用凝胶成像自动分析系统检测各扩增带COX-2 mRNA、iNOS mRNA、GST-πmRNA水平。结果:1)CGMP组对细胞的增殖均有抑制作用,其中10-4 mg/mL抑制效果最强,且呈现时间依赖性。2)低剂量的CGMP(10-5、10-4、10-3 mg/mL)可显著降低3种基因的表达。结论:CGMP可在一定程度上抑制HT-29细胞的增殖,并呈时间依赖性,同时CGMP能在mRNA水平上抑制COX-2、iNOS、GST-π的表达,进而降低3种基因蛋白的表达,从而进一步改善结直肠癌。