透性化细胞乳糖酶与提纯的乳糖酶酶学性质比较

通过透性化细胞处理技术和提取纯化两种方法制备乳糖酶,对两种乳糖酶的酶学性质进行了分析比较,结果表明,两种酶的最适反应温度和最适反应pH值相近,透性化细胞乳糖酶pH值稳定性和热稳定性范围大于纯乳糖酶.K 、Mn2 、Mg2 、Ca2 对两种乳糖酶都有激活作用,Cu2 有较强的抑制作用,金属离子对纯乳糖酶活性的影响大于对透性化细胞乳糖酶的影响.麦芽糖、葡萄糖等糖类对两种乳糖酶的活性有抑制作用.在完全相同的反应条件下测定的两种乳糖酶的Km和Vmax有所不同.     

乳酸克鲁维酵母乳糖酶性质的研究

采用单因素试验方法研究了乳酸克鲁维酵母乳糖酶的性质,该酶在pH值为6.0～8.4范围内比较稳定,酶作用最适pH值在6.4～6.6;最适反应温度为45℃,并具有良好的热稳定性;Mn2＋,Mg2＋,Na＋等对酶有明显的激活作用,而重金属离子如Zn2＋和Cu2＋等对酶活有抑制作用。实验测定得该酶以ONPG为底物的米氏常数为3.348mmol/L。     

Enterobactersp．SYA2乳糖酶酶学性质研究

采用硫酸铵盐析对Enterobactersp．SYA2乳糖酶进行分级沉淀,研究了该酶的最适作用温度、热稳定性、最适作用pH、pH稳定性及金属离子的影响。结果表明：选取硫酸铵的饱和度30％～85％进行分级沉淀,分级沉淀后得到乳糖酶的比活为45．85U／mg;该酶最适作用温度为40℃～45℃,在35℃和40℃处理时酶活损失不大,在45℃和50℃处理时酶活损失较大,最适作用pH为6．5,pH在6．0－8．5酶活最为稳定,Mg^2＋、Mn^2＋、Na^＋对该酶有一定激活作用,Zn^2＋,Cu^2、Fe^2＋对该酶有不同程度的抑制作用,当酶添加量为1U／mL,乳清水解率3h达50％;而添加量为2U／mL时乳清水解率1h达50％。     

乳糖酶在海藻酸钙上的固定化研究

以海藻酸钙为载体、戊二醛为交联剂,对乳糖酶进行固定化。研究了戊二醛浓度、给酶量及温度对酶固定化的影响,并对固定化酶酶促反应的最适pH、温度等进行了测定。结果表明,0.3%戊二醛,4%的海藻酸钠,在4℃条件下对30%的乳糖酶的固定化率较高。酶促反应特性测定结果表明,固定化后乳糖酶的稳定性增强,最适温度范围较非固定化乳糖酶大,最适pH不变。     

一株Kluyveromyces lactis酵母胞内乳糖酶性质的研究

源自乳酸克鲁维酵母的β-半乳糖苷酶为胞内酶,其具有乳糖水解能力和半乳糖苷的转移作用。本实验运用单因素试验方法研究乳酸克鲁维酵母乳糖酶的性质。结果表明该酶在pH值为6.0~7.0和37℃~48℃间比较稳定,酶作用最适pH值在6.5,最适反应温度为43℃,Mn2+、Mg2+等对酶有明显的激活作用,而Zn2+、Cu2+等对酶活有抑制作用。该酶以ONPG底物的米氏常数为4.186mmol/L。     

乳糖酶特性的研究

从脆壁酵母菌中提取得乳糖酶,其特性:酶最适温度45℃,最适pH值6.5,酶水解乳糖所需的最适乳糖浓度为15%。温度、pH、乳糖浓度和酶浓度对酶水解乳糖影响程度的大小顺序是;pH＞酶浓度＞温度＞乳糖浓度。K+、Na+、Mg++、Mn++对酶有明显的激活作用,Ca++有抑制作用,而微量Ca++（1.0mM）表现激活作用。40℃、0.4%和0.6%酶量水解含乳糖15%的乳清以及30℃C、0.3%酶量水解15%乳糖水溶液,在5小时之内,乳糖水解率均可达80%,达到商业要求。     

酿酒条件对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响

研究酿酒条件(氧气、pH值、温度、糖和乙醇等)对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响。结果显示:氧气促进酵母β-葡萄糖苷酶的合成,两株商业酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶最适pH值为5.0,最适温度为60℃,果糖、葡萄糖和蔗糖对两株酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶活性具有轻微抑制作用,乙醇(体积分数2%~20%)促进β-葡萄糖苷酶的酶活力。在葡萄酒发酵过程中,β-葡萄糖苷酶主要存在于完整细胞和透性化细胞中,上清液中酶较少。     

酿酒条件对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响

研究酿酒条件（氧气、pH值、温度、糖和乙醇等）对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响。结果显示：氧气促进酵母β-葡萄糖苷酶的合成,两株商业酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶最适pH值为5.0,最适温度为60 ℃,果糖、葡萄糖和蔗糖对两株酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶活性具有轻微抑制作用,乙醇（体积分数2%～20%）促进β-葡萄糖苷酶的酶活力。在葡萄酒发酵过程中,β-葡萄糖苷酶主要存在于完整细胞和透性化细胞中,上清液中酶较少。     

乳酸菌产乳糖酶的培养条件研究

本文从初始pH、培养基成分及培养方式等不同的方面对产乳糖酶的乳酸菌发酵条件进行研究,找出最适发酵条件为L-MRS培养基,pH5.0,实验表明胆盐对乳酸菌的生长和乳糖酶的产生有明显的抑制作用。     

恶臭假单胞菌透性化细胞海藻糖合酶的酶反应工艺及其特性研究

用甲苯对恶臭假单胞菌细胞进行透性处理,研究了透性化细胞海藻糖合酶的酶反应工艺及其特性。研究结果表明,该细胞酶的最适反应条件为pH7.8,转速180 r/min,温度为40℃,反应时间为8 h。透性化细胞海藻糖合酶具有极强的底物特异性,激活离子有Na+、K+,重金属离子强烈抑制菌体生长和酶活。     

改性磁性壳聚糖微球固定化乳糖酶

通过反相悬浮聚合法,以甲基丙烯酸2-羟乙酯(HE-MA)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,过硫酸铵为引发剂制备得到改性磁性壳聚糖微球。进一步以改性磁性壳聚糖微球为载体,通过吸附、共价结合以及戊二醛交联反应三方协同作用固定乳糖酶。对影响固定化的各种因素进行优化,确定固定化乳糖酶最适条件为:载体在0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸缓冲液中充分溶胀后,按2.0 U/mg载体的添加量加入乳糖酶,4℃吸附3 h,再添加0.1%戊二醛交联4 h;最终所得的固定化乳糖酶活为685 U/g载体,酶活回收率为34.3%。固定化后的乳糖酶的pH稳定性和热稳定性都较游离酶有明显提高;连续操作10次后,固定化酶活仍保持在70%以上,具有良好的操作稳定性。     

米黑毛霉凝乳酶酶学性质研究

研究了米黑毛霉凝乳酶的最适温度、最适pH、热稳定性,探讨了金属离子对酶活力的影响,加酶量对酶反应的影响,测定了酶的蛋白水解活力和酶的K^m与V^m值。结果显示：酶的最适温度为70℃;最适pH6;酶液在65℃保温10min,酶活损失达96％;Na^＋和K^＋对酶稍有抑制作用,Fe^2＋对酶有促进作用,Cu^2＋对酶有强烈的抑制作用;减少酶的添加量,在规定时间内凝乳会导致凝乳酶酶活测定结果偏大;凝乳酶蛋白水解活力为1048U／g;Km为190．84g／L,Vmax=7．8678g／s。     

木聚糖酶酶活影响因素的研究

研究了两种耐温耐碱的商业木聚糖酶酶活的影响因素:木聚糖酶A和木聚糖酶B酶反应的最适pH值为7.0,酶反应的最适温度分别为65℃和70℃.Fe3 在低浓时对这两种酶有激活作用,Fe3 在高浓时则有抑制作用.Al3 对木聚糖酶A有抑制作用,对木聚糖酶B有激活作用.Cu2 对木聚糖酶A和木聚糖酶B都表现为抑制作用.Mn2 对木聚糖酶A有激活作用,对木聚糖酶B有抑制作用.     

海参体壁粗蛋白酶的提取及酶学性质研究

研究了海参体壁粗蛋白酶的提取方法和酶学性质，最佳提取条件为紫外线下照射30min，硫酸铵饱和度梯度为40％～60％。粗蛋白酶的最适pH值为5．0，最适反应温度为50℃，酶在50℃以下稳定性良好。在pH1．0-7．0范围内，Ca^2＋对酶有激活作用，Mn^2＋、Cu^2＋对酶有抑制作用。提取的海参体壁蛋白酶是一种含有巯基的，类似胰蛋白酶的酶类。     

乳糖酶的固定化及其特性的研究

本文研究了用卡拉胶包埋法制备固定化脆壁酵母乳糖酶的方法以及影响制备的因素。此法具有包埋酶活力回收率高,方法简便等优点。比较研究了固定化乳糖酶和非固定化乳糖酶的一些生物化学特性。其中固定化酶的最适pH、最适温度和最适水解乳糖浓度与非固定化酶相比无显著性改变。对此固定化酶水解乳清、脱脂乳和全乳中乳糖的研究表明,它能有效地水解这些溶液中的乳糖;在45℃下,它水解这些溶液中乳糖的半衰期均在169～200h之间。     

酰肼载体固定化乳糖酶的特性及其操作稳定性研究

以酰肼颗粒为载体、戊二醛为交联剂,通过共价结合制得固定化乳糖酶,对它的特性进行了研究.结果表明,固定化乳糖酶的最适反应温度为38～41℃.最适反应pH值为6.5～7.0,动力学常数Km=304.87 mmol/L,Vmax=0.10 mmol/(g·min),固定化酶在较低温度下的使用稳定性好,在10℃下反应65个批次后活性仅降低15.8%,而在室温下(24～26℃)经过65批的反应活性下降将近50%.     

透性化细胞海藻糖合酶特性的研究

海藻糖是一种新型食品添加剂，目前多以微生物酶法生产。海藻糖合酶是近年来新发现的一种海藻糖合成酶。本文研究了经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合酶的酶学特性。结果表明，该细胞酶的反应最适温度为35℃，最适pH7.4,Mg^2 及K^ 对该细胞酶有明显激活作用，Zn^2 ,Mn^2 及Cu^2 则可强烈地抑制酶活力。该酶对底物特异性极强，能特异性地将麦芽糖转化为海藻糖。     

草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

从草鱼肝胰腺中提取胰蛋白酶,经匀浆、硫酸铵分级沉淀、透析得到胰蛋白酶粗酶液,通过BTI-Sepharose亲和层析一步纯化得到电泳纯的草鱼胰蛋白酶,并进一步研究该胰蛋白酶的酶学性质。结果表明：草鱼胰蛋白酶的分子质量约为27 kDa,米氏常数Km为3.4×10－5 mol/L;最适反应温度为60 ℃,在低于60 ℃条件下稳定;最适pH值为9.5,酸碱耐受范围为pH 6.0～12.0;Ba2＋、Mg2＋、Fe2＋在0～10 mmol/L范围内对该酶具有一定激活作用,而乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）、K＋在0～10 mmol/L范围内对该酶有一定抑制作用,EDTA较K＋对酶的抑制作用更明显。     

利用固定化乳糖酶连续生产低乳糖乳的研究

利用离子交换树脂D151固定黑曲霉来源乳糖酶,研究固定化酶的酶学特性,优化水解牛乳的工艺条件,以期改善乳糖酶的性质,达到连续生产低乳糖乳的目的.结果表明:固定化酶的最适作用温度和热稳定性与游离酶相比均有所降低.固定化酶最适pH与游离酶相比稍向碱性移动;两者酸碱稳定性有较大差异.金属离子对游离酶和固定化酶水解的抑制或激活作用有较大差异.固定化酶与游离酶相比,对乳糖的Km值稍有升高;低温贮存稳定性稍有增强;在牛奶的天然pH(约为6.5)条件下使用更为适宜.在填充床反应器中,固定化酶连续生产低乳糖乳的最佳条件为:温度为50℃,底物空间流速为1.5h-1,可获得79.7%的乳糖水解率.每隔20h清洗反应柱,固定化酶在10d内生产的乳糖水解乳符合低乳糖乳的要求.固定化乳糖酶连续使用半衰期约为22d.该研究为工业化利用固定化酶连续生产低乳糖乳提供了技术依据.     

杂优-2平菇漆酶的分离纯化及酶学性质

将杂优-2平菇菌丝进行液体培养,发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE（diethylaminoethyl）-Sepharose fastflow层析和Superdex-200 prep grade层析等方法纯化,获得了电泳纯的杂优-2平菇漆酶,并对纯化的漆酶进行了部分酶学性质研究。结果显示,杂优-2平菇漆酶比活力为115 U/mg,分子质量约为244.0 kD,亚基分子质量约为85.6 kD。最适反应pH值和最适反应温度分别为5.0和55 ℃,在pH 6.0～8.0及40～55 ℃范围内稳定性较好;最适条件下,以2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）为底物的Km值为2.1 mmol/L,最大反应速率（vmax）为0.117 μmol/（min·L）。Fe2＋、抗坏血酸对该酶活性具有完全抑制作用,乙二胺四乙酸、Ag＋、Mg2＋、Li＋对该酶活性影响较小;草酸、甲醇、正丁醇、K＋、Ca2＋、Ba2＋、Zn2＋、Cd2＋、Pb2＋、Mn2＋、Co2＋对该酶活性有不同程度的抑制作用;Cu2＋激活作用不明显;尿素、乙醇、异丙醇对该酶活性具有激活作用。