几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

液体乳中抗生素残留量快速检测方法探究

抗生素在畜牧业中广泛应用,不可避免地造成牛奶中残留抗生素.抗生素残留不仅危害人类健康,同时也影响牛奶的品质,造成经济损失.现检测生鲜乳中抗生素残留量方法众多.对3种快速检测方法(SNAP双流向酶联免疫法、嗜热链球菌抑制法(TTC)和ECLIPSE50试剂盒微生物抑制法)进行了比较,以寻求简便、快速、准确、敏感性高的方法,以满足日趋严格的残留限量要求,保障人们饮用牛奶的卫生和安全.     

定量PCR技术检测杀菌型产品中乳酸菌

目的利用定量PCR(quantitativePCR,qPCR)技术检测杀菌型产品中乳酸菌,并与标签标示相比较,查探产品中各类菌种的异同性及数量。方法以市售的发酵乳及含乳饮料作为研究对象,设计可区分产品中常见的6种乳酸菌特异性引物及探针,利用qPCR技术对方法的特异性、灵敏度进行验证,并建立标准扩增曲线;利用模拟样品对方法进行检验,最后对市场上购买的实际样品进行检测。结果除去干酪乳杆菌,其他5种引物都能特异性扩增出其目标菌,并且对其他的乳酸菌均无扩增现象;DNA检测的灵敏度可达到2～4pg;单一标准菌种扩增曲线线性较好,相关系数r2值在0.954～0.992之间;对模拟样品的检测,与平板法差异性比较,P值均大于0.05,无显著性差异。对市售样品进行检测,产品中标记的干酪乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌与检测结果存在不匹配现象。结论本研究建立的qPCR方法可快速、准确地对产品中德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌、乳酸乳球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌的鉴定和定量的分析。     

高通量测序技术对杀菌型益生菌含乳饮料菌群结构分析

目的：探查杀菌型益生菌含乳饮料中微生物菌群组成分析，及宣称的添加益生菌真实性和合规性分析。方法：对市售11批次产品直接提取的细菌总核酸，扩增，电泳检测核酸的质量；分别对产品的16S rRNA基因V3/V4进行高通量测序技术（NGS）测序，对测序序列、稀释曲线、Alpha多样性、聚类、丰度分布曲线与菌群结构分析，获得信息与产品明示值和相关规范对比进行合规性分析。结果：共得到39231条优质序列，分布在210-518bp范围内；共注解到16个门、37个纲、71个目、129个科、265个属；从门分类水平主要为厚壁菌门( Firmicutes 91.66 %) ，从纲的分类水平主要为芽孢杆菌纲( Bacill 90.43 %)，从目的分类水平主要为为乳杆菌目(Lactobacillales 82.74 %) ；优势菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球和乳酸乳球菌；同时产品有检出携带致病性非益生菌菌群。部分产品标示菌种未被检出、部分产品检出了未标示菌种、部分产品检出益生菌与标示菌种不一致。结论：本文建立的NGS测序技术能准确、快速的对杀菌型益生菌食品微生物菌群精确筛选，市售产品益生菌种类丰富，但同质化程度较高，产品间菌群分布均匀度相差较大；同时也能深度挖掘到微量的携带致病性的菌群。     

市售生禽类产品分离大肠埃希氏菌药物敏感分析

目的 生禽类产品中大肠埃希氏菌是细菌中最常见的传染病菌之一,耐药大肠埃希氏菌的生长和繁殖中能通过食物链将耐药性传递给人源致病菌,对人类健康的造成严重影响。方法 本文对市售生禽类产品中大肠埃希氏菌进行分离和鉴定,并通过抗生素最小抑制浓度确定分离菌株药敏谱。结果：从65份样本中分离得到55株大肠埃希氏菌,分离率高达84.46%;药敏结果显示,分离菌对亚胺培南(98.2%)、头孢西丁(92.73%)、头孢他啶(90.9%)、多粘菌素(90.9%)耐药率较高,对四环素最敏感(72.2%)。表型不同的大肠埃希氏菌分为典型菌株(45株)和非典型菌株(10株)药敏谱无显著性差异(P>0.5)。受试菌100%携带3种以上抗生素,有83.6%受试菌同时携带4种高耐药率的抗生素(亚胺培南、头孢西丁、头孢他啶、多粘菌素)。结论 市售生禽类产品中存在非常严重的多重耐药性大肠埃希氏菌污染,本文对大肠埃希氏菌的药性分析,旨在为临床预防治疗提供相应的理论参考。     

腹泻性贝类毒素(DSP)的两种快速检测方法比较

为了满足当前对于食品安全实时监控的需要,对腹泻性贝类毒素DSP的两种快速筛选方法——蛋白磷酸酶抑制法和酶联免疫法开展了研究,首先根据国内外相关标准的规定制定了这两种方法的筛选检出限,再对标准溶液及模拟阳性样品进行了检测,并进行了重复性验证,最后分析了这两种方法的检测原理并进行了优势比较.检测结果显示这两种筛选方法均具有准确率高,重复性较好的优点,本文提出的筛选检出限(200 μg/kg)远低于我国相关标准的规定(600 μg/kg),都不失为检测腹泻性贝类毒素的理想筛选方法.     

乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

目的：为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法。方法：根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果：该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11 份样品进行检测,其中6 份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×102～3.68×104 CFU/mL之间。结论：建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。     

荧光定量PCR方法检测杀菌型乳酸菌产品中的耐药基因

目的利用荧光定量PCR方法快速检测杀菌型乳酸菌产品中的耐药基因,并快速筛选此类产品中多种益生菌菌株耐药性。方法以杀菌型乳酸菌产品及9种耐药基因为研究对象,将样品中DNA进行提取及纯化后,利用荧光定量PCR方法,进行耐药基因检测。结果共测试14种样品,其中12种产品检测出6种不同耐药基因,检出率达85.7%,四环素耐药基因tet(K)及万古霉素耐药基因van(X)的检出率较高;有9种产品携带2种或2种以上耐药基因。结论基于荧光定量PCR方法可以实现快速的对杀菌型乳酸菌产品中多种菌株耐药性的筛选。     

维生素B_(12)生物合成及检测技术研究进展

维生素B_(12)是一种含钴维生素,自然界中的维生素B_(12)都是由微生物合成的,高等动植物不能制造维生素B_(12),而它又具有重要生物学功能,维生素B_(12)除了常见的预防贫血外,还和人的长寿有一定关系。工业上发酵生产维生素B_(12)的菌株主要是费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)、谢氏丙酸杆菌(Propionibacterium shermanii)和脱氮假单胞菌(Pseudomonas denitrificans),乳酸菌具有合成维生素B_(12)能力,为寻找新的发酵菌株提供策略。同时对维生素B_(12)的研究热度提高,其相关检测技术也不断进步。根据维生素B_(12)的生理功能、生物合成,结合实际工作经验,对维生素B_(12)的检测进行论述。     

API-ZYM系统分析动物双歧杆菌胞外酶活性

目的利用API-ZYM系统分析动物双歧杆菌胞外酶活性。方法采用培养法分离菌株,经提取DNA后采用16 S rRNA测序,采用高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting,HRM)方法以及SNP(single nucleotide polymorphism)位点组合鉴定菌株;利用API-ZYM系统分析分离菌株的胞外酶活性共性和差异性,研究产业化前后菌株酶活性的变化。结果分离出动物双歧杆菌Bb-12、乳双歧杆菌Bi-07和HN019。能检测到14种胞外酶,有4种胞外酶未检出。酶谱的分泌共性及稳定性基本保持一致,其中糖苷酶类活性最高;HN019和Bb-12的酶谱具有高相似性,Bi07更显现出胞外酶特异性;工业化前后糖苷酶类仍然保持高活性,而水解酶类失活程度高。结论糖苷酶的高表达量普遍存在于动物双歧杆菌中;酶谱差异性可作为划分菌株特征的重要鉴定技术手段;工业化前后酶谱的变化为商业化益生菌体外预筛选评价提供理论参考。