食品过敏原牡蛎成分PCR检测方法的初步研究

目的:建立基于PCR技术的过敏原牡蛎成分快速检测方法,结合溶解曲线及特异的Tm值与Ct值,用于不同产品的牡蛎成分检测。方法:根据NCBI上的牡蛎线粒体序列,通过DNA Star等软件设计引物,分别采用普通PCR和SYBR Green I实时荧光PCR的方法建立食品过敏原牡蛎成分的检测方法,对十种牡蛎阳性样品和二十余种阴性样品进行实验,并且对几种牡蛎相关食品进行检测。结果:研究建立的检测方法可以检测出含牡蛎成分0.1%的样品,其中荧光PCR的灵敏度达到0.01 ng/μL,特征峰的Tm温度为80.08 ℃,能够检测出牡蛎相关食品中的牡蛎成分。结论:该方法是一种操作安全方便、成本较低、特异、灵敏的实时荧光PCR方法,对于收集到的食品相关产品以及保健品中牡蛎粉的检出率为100%,该方法可广泛应用于食品中牡蛎成分的快速鉴定。     

几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

腹泻性贝类毒素DSP的磷酸酶抑制检测法研究

对腹泻性贝类毒素DSP的快速筛选方法——磷酸酶抑制法进行了研究,分析了该方法的检测原理,并提出了该方法的筛选检出限,对标准溶液、加标回收样品及市场采样样品进行了检测,并就该方法的重复性进行验证。检测结果显示,磷酸酶抑制法检测准确率高,重复性较好,提出的筛选检出限（200μg/kg）远低于我国相关标准的规定（600μg/kg）,是一种对于腹泻性贝类毒素DSP较为理想的筛选方法。     

PCR 法检测食品中大肠杆菌O157:H7

对大肠杆菌O157:H7 型菌株的各毒力基因及基因组中的特异序列进行了设计和比对,确定292bp 的检测引物。常规定性PCR 和实时定量PCR 证明该引物特异性强。模拟样品的前增菌实验结果表明本方法可以在原样品活菌浓度约2.0CFU/mL 时通过16h 增菌后检测出来,总的检测时间可以控制在24h 内。本实验建立的PCR 方法可用于食品中大肠杆菌O157:H7 的快速测定。     

微生物法测定婴幼儿乳粉中烟酸含量

目的建立微生物法测定婴幼儿乳粉中烟酸含量的分析方法。方法通过比较不同浓度标准曲线对同一标准物质样品的测定结果,确定准确最优的线性浓度范围,并在该标准范围内进行重复性及加标回收实验。结果当烟酸标曲线性浓度范围为5.0～50.0ng时,线性关系良好(r~2=0.996)。该方法的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为1.71%(n=6),平均回收率为94.4%。结论该方法稳定准确,适合用于测定婴幼儿乳粉中烟酸的含量。     

运用统计学方法对能力验证定性样品的均匀性和稳定性进行评价

目的 使用统计方法客观评价定性能力验证样品的均匀性和稳定性。方法 使用荧光PCR法分别检测每组样品中牛、羊、鸭源性成分, 对阳性结果的Ct值进行单因素方差分析, 评定样品的均匀性。采用线性回归方法, 评定样品的稳定性。结果 F＜F0.05(9,10)=3.02且P>0.05, 各组样品间无显著性差异, 样品是均匀的。线性回归分析结果直线斜率无统计学差异, 即样品在检测期间保持稳定。结论 运用统计学方法对动物成分能力验证样品的均匀性和稳定性进行定量分析, 能够更科学地对能力验证样品的均匀性和稳定性进行统计学推断。     

微生物酶制剂中转基因微生物的实时荧光PCR检测方法

针对微生物酶制剂中残留转基因微生物的检测问题,根据醇氧化酶-1(AOX1)启动子基因的序列信息设计一对引物及一条MGB探针,建立了转基因微生物的实时荧光PCR筛选检测方法.实验结果表明,该方法灵敏度达到1pg,可以准确判定生产线上不同分离阶段的微生物酶制剂中的转基因微生物残留情况.该方法准确度和灵敏度高,操作方便,可作为微生物酶制剂中转基因微生物分离状况的监测方法,也可为其他转基因微生物检测研究提供借鉴和参考.     

市售生禽类产品分离大肠埃希氏菌药物敏感分析

目的 生禽类产品中大肠埃希氏菌是细菌中最常见的传染病菌之一,耐药大肠埃希氏菌的生长和繁殖中能通过食物链将耐药性传递给人源致病菌,对人类健康的造成严重影响。方法 本文对市售生禽类产品中大肠埃希氏菌进行分离和鉴定,并通过抗生素最小抑制浓度确定分离菌株药敏谱。结果：从65份样本中分离得到55株大肠埃希氏菌,分离率高达84.46%;药敏结果显示,分离菌对亚胺培南(98.2%)、头孢西丁(92.73%)、头孢他啶(90.9%)、多粘菌素(90.9%)耐药率较高,对四环素最敏感(72.2%)。表型不同的大肠埃希氏菌分为典型菌株(45株)和非典型菌株(10株)药敏谱无显著性差异(P>0.5)。受试菌100%携带3种以上抗生素,有83.6%受试菌同时携带4种高耐药率的抗生素(亚胺培南、头孢西丁、头孢他啶、多粘菌素)。结论 市售生禽类产品中存在非常严重的多重耐药性大肠埃希氏菌污染,本文对大肠埃希氏菌的药性分析,旨在为临床预防治疗提供相应的理论参考。     

多重PCR在调味品致病菌检测中的应用前景分析

食源性疾病是最为重要的食品安全问题之一,加强食源性疾病监测和食品污染物检验是面对这一问题的迫切需要。传统分离培养加生化鉴定检测食源性致病菌的方法,往往操作步骤繁琐耗时,精确度较低、很难满足目前高通量、时间短的要求。尤其是各种调味料品种繁杂,微生物很难扩增,传统方法对致病菌的检出率低。多重PCR技术特异性强、灵敏度高、程序简便易行,自诞生以来,就迅速被广泛地应用于生命科学研究的各个领域,基于该技术的病原菌检测方法已经在国内外广泛开展。文章对近年来基于多重PCR技术的病原菌检测的研究前沿进行了综述,分析了多重PCR方法在调味品致病菌检测中应用优势。内容涉及目标基因、生物芯片技术以及色谱技术和多重PCR的结合、灵敏度提高的方法,同时文章对多重PCR技术在调味品检测中的未来应用的局限、解决方案和前景进行了分析。     

复合调味料食品安全标准现状分析和标准制定的建议

文章主要描述了国内外复合调味料产品的安全标准状况,比较和分析了国内外标准中主要技术指标设立情况,并提出了制定复合调味料食品安全标准的建议。