转化生长因子β1对肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质成分的调节与阿魏酸钠的干预效果

背景：细胞外基质在肾间质的积聚是肾小管间质纤维化的主要特征。肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化在肾间质纤维化发病机制中起了重要作用。目的：从细胞水平观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的影响。设计：以细胞为观察对象，随机对照实验：单位：四川大学华西医院肾脏科、材料：大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E来源于American Type Culture Collection（ATCC），由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供，本实验所用细胞株为第36代。阿魏酸钠为白色晶体，可溶于水，纯度〉98．0％，由成都亨达药业有限公司提供，实验时终浓度分别125，250，500μmol／L。兔抗大鼠α平滑肌肌动蛋白多克隆抗体为武汉博士德产品；ELISA试剂盒为上海森雄公司产品；人重组转化生长因子β1为R＆D公司产品：DNA Engine Opdcon^TM实时荧光定量聚合酶链反应仪为MJ Research产品。方法：将体外培养的细胞株NRK52E分为5组；空白对照组：仅加入含血清的DMEM培养基；转化生长因子β1刺激组；培养液中加入终质量浓度为5ng/L的转化生长因子β1；阿魏酸钠低、中、高浓度组：培养液中加入终质量浓度为5ng／L转化生长因子β1和125，250，500μmol／L的阿魏酸钠。主要观察指标：应用相差显微镜、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对细胞外基质主要成分胶原Ⅰ胶原Ⅲ和纤维粘连蛋白的影响。结果：①NRK52E细胞形态：与空白对照组相比，转化生长因子β1刺激组细胞在培养3d后，细胞株NRK52E从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态。阿魏酸钠3个浓度组细胞受转化生长因子β1的刺激而出现的形态学改变得到不同程度的改善，并呈剂量依赖性。②α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达：转化生长因子β1 5ng／L诱导6h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA较空白对照组上升，在72h达高峰；经过不同剂量阿魏酸钠干预72h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA显著下调并呈剂量依赖性（P〈0．05）。③细胞外基质变化；经转化生长因子β1 5ng／L诱导72h后，细胞培养上清中Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白含量明显增加（P〈0．05）。经过不同剂量的阿魏酸钠干预后，不同程度地抑制了转化生长因子β1促Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白增多的作用，并呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：转化生长因β1可以诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化，刺激细胞外基质成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的升高。阿魏酸钠可剂量依赖性地抑制转化生长因子β1所导致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化作用。     

美国临床研究的现状及发展方向

临床研究是现代医学最基本的、不可缺乏的研究手段,是连接基础科学研究和临床应用的关键环节.临床研究使新药的研发成为现实,没有临床研究,就不会有青霉素、脊髓灰质炎疫苗以及各种肿瘤治疗药物的发明;临床研究使糖尿病变得可以控制和管理,使艾滋病患者至少多生存了20年,使数百万癌症患者的生存期大大延长[1].     

去氧孕烯炔雌醇片治疗功能性子宫出血的有效性与作用机制

目的:探讨去氧孕烯炔雌醇片治疗功能性子宫出血的有效性与作用机制。方法:将2016年2月至2017年3月98例功能性子宫出血患者根据数字表法分对照组和观察组,各49例。对照组采用安宫黄体酮和己烯雌酚治疗,观察组则给予去氧孕烯炔雌醇片治疗。比较两组功能性子宫出血治疗疗效;功能性子宫出血减少50%以上的时间、完全停止出血时间;干预前后患者月经周期、月经量、血红蛋白监测值、子宫内膜厚度。结果:观察组功能性子宫出血治疗疗效高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组功能性子宫出血减少50%以上的时间、完全停止出血时间短于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);干预前两组月经周期、月经量、血红蛋白监测值、子宫内膜厚度相近,差异均无统计学意义(P0.05);干预后观察组月经周期、月经量、血红蛋白监测值、子宫内膜厚度优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:去氧孕烯炔雌醇片治疗功能性子宫出血的有效性高,可有效促进止血,改善月经情况,改善子宫内膜增厚现象,促使血红蛋白恢复正常。     

1 638例人工流产青少年现状分析及实施流产后关爱的随访研究

目的 分析青少年女性非意愿妊娠现状,探讨实施流产后关爱服务项目对青少年女性流产后避孕的应用效果。 方法 收集2015年8月—2016年7月在宁波市妇女儿童医院计划生育门诊因非意愿妊娠自愿在门诊接受人工流产术的青少年女性,在流产前进行流产后关爱服务,分析青少年患者流产前的一般情况、人工流产次数及高危因素、流产前后的避孕方式、避孕方法立即落实率、高效避孕率及术后1、3个月避孕方法持续使用率等。 结果 青少年患者共1 638例,平均年龄为(21.83±3.67)岁,15岁3例(0.18%),16~19岁的有183例(11.17%),20~24岁的有1 452例(88.65%),青少年意外妊娠原因归结为未避孕和避孕失败,所有接受人工流产后关爱(PAC)的青少年患者流产后避孕立即落实率为100.00%,高效避孕率由流产前1.70%增加到67.33%,高效避孕方法主要为复方短效口服避孕药及宫内节育器。随访第1、3个月高效避孕方法使用率呈下降趋势,其中口服避孕药使用率下降明显。随访期间失访461例,坚持随访人员1 177例中有10例(0.85%)再次妊娠。 结论 青少年意外妊娠原因归结为未避孕和避孕失败。科学系统的优质人工流产后关爱(post abortion care,PAC)能有效指导青少年落实合适的避孕方法,保证避孕效率,防范青少年重复流产的发生,保障青少年女性的生殖健康。      

插管困难行双管法气管插管一例

1 病例简介 患者,女,58岁,体质量62 kg,因右肺上叶癌入院.两年前因结节性甲状腺肿行甲状腺大部切除术.无其他慢性病史,美国麻醉师协会(ASA)Ⅰ级.术前BP:120/75 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),HR:86次/min,血氧饱和度(SPO2)98%.     

人参皂甙Rb1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞p47phox的表达及细胞外基质的影响

目的探讨人参皂甙Rb1（G-Rb1）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞（NRK52E）氧化应激的作用及对细胞外基质（ECM）的影响。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）分为空白对照组,10ng／mLTGF-β1刺激组,不同剂量的G-Rb1干预组（在10ng／mL TGF-β1基础上分别加入10ng／mL、20ng／mL、40ng／mLG-Rb1）,40ng／mLG-Rb1组,100nmol／L NADPH氧化酶抑制剂DPI组。采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平;应用免疫组化技术、Western blot检测NADPH氧化酶亚单位p47phox的表达;实时荧光定量PCR（RT-PCR）、酶联免疫吸附法观察细胞外基质主要成分胶原Ⅰ（Col-Ⅰ）和纤维粘连蛋白（FN）的变化。结果与正常对照组相比,TGF-β1可显著增强NRK52E细胞内ROS水平和p47phox的表达,Col-Ⅰ和FN的含量也显著增加（P〈0．05）。G-Rb1和DPI明显抑制了TGF-β1诱导的细胞内ROS的产生和p47phox的表达,同时降低了Col-Ⅰ和FN的水平（P〈0．05）。结论TGF-β1可以诱导NRK52E细胞ROS和p47phox水平的升高,刺激细胞外基质成分Col-Ⅰ和FN的形成。G-Rb1呈剂量依赖性地抑制了TGF-β1刺激的NRK52E细胞内的ROS水平的升高和细胞外基质的增加。其作用机制可能与降低p47phox的表达有关。     

药物雾化吸入治疗小儿呼吸道感染的临床疗效及其对血清 C-反应蛋白、中性粒细胞、白细胞水平的影响

目的：探讨药物雾化吸入治疗小儿呼吸道感染的临床疗效及共对血清C-反应蛋白（ CRP）、中性粒细胞、白细胞水平的影响。方法将204例呼吸道感染患儿随机分为试验组和对照组各102例。试验组给予盐酸氨溴索雾化吸入治疗,对照组给予盐酸氨溴索静脉注射治疗。2组患者均给予相同对症治疗,抗生素抗感染和营养支持,检测2组患者治疗前后CRP、中性粒细胞及白细胞水平,观察2组患者治疗效果,比较其差异。结果治疗前2组CRP、中性粒细胞和白细胞差异均无统计学意义（P＞0．05）。治疗后2组CRP、中性粒细胞、白细胞水平均低于治疗前,且试验组低于对照组,差异均具有统计学意义（P＞0．05）。试验组患者咳嗽消失时间、啰音消失时间和住院时间均短于对照组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。试验组患者治疗总有效率为91．18％远高于对照组的74．51％,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论药物雾化吸入治疗小儿呼吸道感染可显著降低患者血清CRP、中性粒细胞、白细胞水平,缩短患者治疗所需时间,提高治疗效果。     

灯台叶颗粒治疗类百日咳综合征临床研究

目的探究灯台叶颗粒治疗类百日咳综合征患儿的临床疗效。方法选取94例类百日咳综合征患儿,按随机数字表法将其分为对照组和研究组,每组47例。对照组给予常规抗病毒、止咳、抗感染治疗,研究组在常规治疗基础上联合灯台叶颗粒治疗。2组均治疗2周。比较2组临床总有效率、临床症状/体征缓解时间、Th17/Treg及其相关因子水平。结果治疗后,研究组临床总有效率显著高于对照组(P<0.05)。研究组咳嗽、憋喘、气促、肺部啰音等症状/体征缓解时间均短于对照组(P<0.05);Treg、TGF-β水平均高于对照组(P<0.05),Th17/Treg、IL-17水平均低于对照组(P<0.05)。2组不良反应总发生率组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论灯台叶颗粒可有效改善类百日咳综合征患儿临床症状,并纠正Th17/Treg细胞失衡,疗效安全可靠。     

人畸胎瘤细胞株PA-1胚胎干细胞生物学特性的鉴定

目的鉴定人畸胎瘤细胞株PA-1的胚胎干细胞生物学特性。方法用碱性磷酸酶染色法鉴定体外培养PA-1细胞的分化水平,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PA-1细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达情况。通过悬滴培养法使PA-1细胞形成拟胚体,用RT-PCR法检测拟胚体分化的三胚层特异性基因的表达。通过SCID小鼠体内成瘤实验,用HE染色和免疫组化鉴定PA-1细胞体内接种后三胚层组织的分化。结果体外贴壁培养PA-1细胞碱性磷酸酶染色呈深紫色,PA-1细胞能表达多能性基因Nanog,Oct4和Sox2。悬滴培养PA-1细胞可形成拟胚体(EB),且能够表达三胚层特异性基因(内胚层:Sox17,AFP;中胚层:C-actin,Brachyury;外胚层:Sox1,Pax6)。PA-1细胞接种至SCID小鼠皮下可以形成畸胎瘤,HE染色可见神经外胚层组织,免疫组化可见三胚层细胞表面标志抗原:GFAP(外胚层)、Vimentin(中胚层)及Desmin(内胚层)均呈阳性表达。结论 PA-1细胞在贴壁培养过程中能够保持未分化/低分化状态,并表达多能性基因; PA-1细胞在体内及体外分化实验中均能分化出三胚层的细胞或组织;证明PA-1细胞具有一定的胚胎干细胞生物学特性。