实时定量PCR在干细胞及肿瘤研究中的应用

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域。而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,国内外文献报道较少,本文就其中方法原理、研究进展及其在干细胞和肿瘤研究方面的应用作一简要综述。     

重复序列片段基因扩增用于阴沟肠杆菌的分型研究

目的 用重复序列片段基因扩增方法对阴沟肠杆菌进行分型研究。方法 选用肠杆菌科基因间的重复序列(ERIC)进行扩增,对阴沟肠杆菌进行分型研究,并与其抗生素耐药特征进行比较。结果 阴沟肠杆菌分成6种不同基因型,不同基因型有不同的耐药特征。结论 本法简便易行,重复性好,适合于临床分离的病原菌的分型及医院感染的分子流行病学研究。     

自身猝灭探针定量PCR检测HCV方法的建立

目的 建立自身猝灭荧光探针定量PCR技术检测HCV方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-HCV5'NCR作为标准品,并通过Sigma在线软件设计自身猝灭探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价.结果 建立了自身猝灭荧光探针的定量PCR方法,线性为101～1010copies/μl;灵敏度达50 copies/μl;批内CV为6.1%,批间CV为6.5%,日间CV为6.8%;特异性为100%,与其他肝炎病毒无交叉反应.与紫外定量方法比较,结果差异无显著性,且高度相关.结论 以自身猝灭荧光探针建立的HCV荧光定量PCR检测方法,灵敏度高、特异性强,为新型试剂盒的开发奠定了基础.     

种植体周角化龈扩增与牙槽嵴增量改良技术的临床前瞻性研究：一年的研究结果

目的：本研究的目的是评估一种改良外科技术1年后的有效性及术后组织的稳定性。这种手术是在增量的下颌骨中植入种植体并对其周围角化龈进行扩增。材料和方法：结合牙槽嵴增量术,在下颌骨中植入种植体,通过游离龈移植术{FGGs）扩展不足的颊侧角化龈（BKT）．局部角化龈（KLG）转至向舌侧方向。第一组,种植体植入与牙槽嵴增高术同时进行．游离龈移植术是在二期暴露种植体时进行。第二组．先行牙槽嵴增量术,在种植体植入时同期完成FGGs。KLG和FGG以及BKT和LKT（舌侧角化龈）宽度测量在软组织移植以后4周、3个月、1年后进行。结果：70个种植体（第一组46个,第二组24个）被植入29名患者,其平均年龄54．4岁。KLG的术前平均宽度为2．90mm（第一组是3．00mm,第二组是2．75mm）．FGG的平均宽度第一组为460mm,第二组为470mm。第一组BKT的平均宽度在1年后为3．70mm。相比之下,二号组BKT在1年以后的平均宽度为330mm。全部结果显示在1年后BKT的长度为3．50mm。LKT术后1年时在第一组（0．35mm）的萎缩量明显多于第二组（005mm）。结论：采用与牙槽嵴增量术相结合的本改良外科手术可以使种植体周扩增的角化龈在1年保持稳定。     

干血纸片直接进行DNA扩增

本实验探讨了干血纸片直接用于ＰＣＲ扩增方法的建立及其反应条件的优化，使其在临床及实验研究中具有更广泛的应用前景。１材料与方法１．１材料１．１．１干血纸片的制备取耳垂血、手指血或直接抽取的静脉血滴于国产新华滤纸上，室温下自然晾干后，－２０℃可保存一月以上。１．１．２主要试剂ＴａｑＤＮＡ聚合酶购自加拿大Ｂｉｏｓｔａｒ公司，ｄＮＴＰ购自Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司，ＤＮＡ分子质量标准ＰＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）ＨａｅⅢ购自华美生物工程公司。１． １． ３ ＰＣＲ引物根据文献［１］，设计人胰岛素受体基因第 １７外显子引…     

组织工程技术修复下颌骨骨缺损的研究进展

随着组织工程技术的发展,构建组织工程骨修复下颌骨缺损是近年来国内外研究的热点,此方法仅需从自体获取少量种子细胞,通过体外扩增并与适当的支架材料整合后,移植入骨缺损区或经体外培养后再移植入受区,产生新的自体骨组织并与周围正常骨愈合,达到修复目的。本文拟就组织工程下颌骨支架材料、种子细胞、生长因子、临床前研究及临床应用等研究进展作一综述。     

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??Abstract?? Objective To investigate the expression of PTTG1 and its promoting effect for epithelial mesenchymal transition ??EMT?? in oral squamous cell carcinoma?? OSCC. Methods Quantitative RT-PCR ??qRT-PCR?? was carried out to detect the mRNA expression level of PTTG1 for 58 pairs of OSCC and normal control tissues. RNAi was used to knockdown PTTG1 expression in SCC9 cell line. E-cadherin level was detected before and after RNAi?? using western blot. Results The relative expression of PTTG1 in OSCC tissues??3.046±1.137??was significantly higher than that of normal tissues ??0.975±0.434????P < 0.05??. Overexpression was closely related to the lymph node metastasis and clinical stage ??P < 0.05??. E-cadherin level decreased remarkably after the knockdown of PTTG1 in SCC9 cell ??P < 0.05??. Conclusion The overexpression of PTTG1 in OSCC patients is closely related to OSCC clinical stage and lymph node metastasis?? which promotes EMT progress.     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.     

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。     

上海地区3所医院MRSA的随机扩增多态DNA分型

目的分析上海3所医院分离的MRSA分布现状,以确定在这些医院内是否存在MRSA流行。方法用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、mecA基因扩增等方法检测MRSA,用随机扩增多态DNA(RAPD)法对所分离的112株MRSA进行同源性分析。结果RAPD法将检测菌株分为4个型别(A～D型),其中RAPDC型是上述2所医院的惟一流行菌株,B型和C型存在于另1所医院。结论在上述3所医院内存在相对单一的MRSA流行株。