通用模板信号扩增技术

PCR是最常见的分子生物学诊断技术，但目前常用的PCR都存在种种不足，制约了其在临床的应用，我们在Taqman荧光PCR的基础上开发了通用模板信号扩增技术（UT－PCR）比较好的解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因／多位点同时检测两大难题，UT－PCR具有灵敏度高，特异性强，假阴性低，并能实现高通量检测，在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间。     

基因芯片分型中荧光标记引物的多重扩增及试验优化

基因芯片技术以其平行高效多位点多态性分型的优势，在基础和临床研究中被广泛应用。然而，随着位点增多，扩增目的片段更繁琐，为了提高效率和降低成本，就需要在同一反应体系内进行多重扩增。而多重扩增的关键问题是，同一体系内引物对的最大化，并有效减少非特异扩增。目前，此环节可通过计算机辅助设计和尝试不同引物对组合解决。由于芯片分型以杂交信号强弱为检测指标，扩增片段要载有荧光剂，因此多重扩增必须考虑到荧光标记物——青色素（Cy3）的大分子位阻效应。但是，Cy3的存在不可避免地降低了PCR的效率，为此本研究对相关试验条件进行优化。     

建立检测产气肠杆菌的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR方法

目的 建立敏感、特异的普通聚合酶链反应(PCR)方法和TaqMan 荧光定量PCR方法对产气肠杆菌进行快速检测。方法 以产气肠杆菌组氨酸脱氢酶基因(hdc)为靶基因设计引物以及TaqMan FAM探针,建立对产气肠杆菌进行检测的普通PCR方法和TaqMan 荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性。结果 普通PCR和TaqMan 荧光定量PCR方法均能对产气肠杆菌进行特异检测;普通PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为 100 copies/l和1.0105 cfu/g,TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为33 copies/l和1.0104 cfu/g;TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;在稳定性评价试验中,普通PCR方法的重复性良好,TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品检测Ct值的组内差异为0.15%~0.98%,组间差异为0.55%~1.63%。结论 本研究建立的检测产气肠杆菌的普通PCR方法和TaqMan 荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于产气肠杆菌的快速检测。     

PCR-RFLP法检测肿瘤坏死因子受体基因多态性

目的：建立聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）检测肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNF R2）第6外显子基因多态性的方法。方法：用碘化钾法从外周血白细胞中提取基因组DNA，PCR扩增其TNF R2包括编码196位氨基酸残基在内的第6外显子基因，扩增产物用限制性内切酶NIa Ⅲ酶切后干含溴化乙锭的35g/L琼脂糖凝胶中电泳，紫外灯下直接观察TNF R2的基因型。结果：通过观察电泳条带可确定TNF R2的三种基因型，196R／R纯合子、196M／M纯合子、196M／R杂合子分别出现一、二、三条条带；江苏地区健康汉族人TNF R2第6外显子各基因型的频率为：196M／M61．6％，196R／R5．6％，196M／R32．8％；等位基因的频率为196M77．9％，196R22．1％。结论：RCR－RFLP是一种高效敏感、简单快速、准确可靠的分析TNFR2基因多态性的方法，适于普通实验室开展。     

16S～23SrDNA内转录间隔区序列聚合酶链技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌

目的采用分子生物学技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)。方法用16S-23SrDNA内转录间隔区序列PcR(ITS-PCR)技术，对6株质控菌和171株已通过AutoScan-4微生物分析仪鉴定过的CNS临床分离株进行分型鉴定。结果质控菌株及经APIStaph系统确证的11种CNS得到各自不同的ITS-PCR电泳类型，建立了该技术在本实验室的CNS初级数据库，包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、华纳葡萄球菌、头部葡萄球菌、孔氏葡萄球菌解脲亚种、松鼠葡萄球菌、耳葡萄球菌和模仿葡萄球菌。只有松鼠葡萄球菌表现了多态性。该ITS-PCR数据库对所研究的临床株的识别率为93．57％(160／171)，准确率达93．75％(150／160)。API Staph系统证明，ITS-PCR法鉴定结果较为准确，AutoScan-4微生物分析仪检测CNS至少有9．36％(16／171)是不确切的。结论ITS-PCR证明是一项有价值，对CNS可选用的简便、快速、可靠，廉价的分子生物学鉴定技术。     

荧光定量PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体

随着社会的发展,不孕不育症患者不断增多,使之不仅是一个医学问题,同时也成为一个社会问题。研究表明,衣原体、支原体的泌尿生殖系感染是造成男女不孕不育的因素之一。为了解我国不孕不育患者泌尿生殖道解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)的感染情况,我们采用荧光定量PCR(FQ—PCR)     

黏质沙雷菌随机扩增DNA多态性DNA分型

目的明确同一时间段先后分离自同一病房2例患者的两株黏质沙雷菌是否属于同源菌。方法应用随机扩增DNA多态性（RAPD）技术对同一时间段先后自同一病房2例患者痰液标本中分离得的2株黏质沙雷菌进行RAPD基因多态性分析。结果2株黏质沙雷菌扩增出2条不同的电泳带谱。结论2株黏质沙雷菌为不同的RAPD基因型，非同源菌。     

分子诊断技术在新型冠状病毒核酸检测中的应用及发展

新冠肺炎疫情是百年来全球发生的最严重的公共卫生事件,其持续爆发凸显了快速准确的诊断分析是大流行得到控制的密钥。该文结合新型冠状病毒核酸检测现状和当前最新标准指南,对不同分子诊断技术进行评述,并对这些技术在未来传染病暴发中的应用和发展提出建议。     

两种用于人乳头瘤病毒检测方法的比较分析

目的通过对核酸快速导流杂交基因芯片技术与荧光PCR技术检测人乳头瘤病毒的结果进行比较,为临床人乳头瘤病毒的诊断提供恰当的检测方法。方法采用人乳头瘤病毒分型基因芯片检测系统和荧光PCR技术对78例子宫颈癌患者的宫颈脱落细胞进行人乳头瘤病毒检测。结果基因芯片分型检测总阳性率为91.03%(71/78),且均为高危型。单一感染52例,其中HPV16型阳性率为61.54%,HPV18阳性率为11.54%,其他类型感染阳性率26.92%。荧光PCR法检测总阳性率为93.59%(73/78),其中HPV16阳性检出率45.21%,HPV18阳性检出率9.59%。两种检测方法的符合率为97.4%。结论 HPV导流杂交基因芯片技术和荧光PCR技术两者具有良好的符合性,两者都适用于临床检测,荧光PCR技术更适用与宫颈癌的大范围筛查。     

TT病毒的分子生物学特性及研究进展

自 1 997年日本学者Nishizawa等首先从未知病原学的输血后肝炎患者血清中分离得到一种被称为TTV单链DNA病毒以来 ,几年来先后有诸多国内外学者的研究报道。本文综合近期国内外文献概要就TTV的流行特点 ,该病毒的结构基因表达及其临床检查方法与致病关系作一介绍