竹节香附素A对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达的影响

目的:探讨竹节香附素A对缺氧条件下人肝癌细胞株(HepG2)细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)基因和蛋白表达的影响.方法:取体外低氧环境下HepG2细胞进行不同干预:特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A不同作用时间(0 h、6 h、12 h、24 h);不同浓度(0、5、10、20 μg/ml)竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化情况.结果:体外低氧环境下HepG2细胞可见HIF-1α mRNA和蛋白强表达,特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物作用0 h、6 h、12 h、24 h时HIF-1α mRNA 条带灰度值(A/A0)分别为0.73±0.08、0.44±0.12、0.24±0.09、0.07±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为2.31±0.33、1.70±0.17、1.30±0.96、0.09±0.13,差异具有统计学意义(P<0.01).不同浓度竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物浓度0、5、10、20 μg/ml处理,HIF-1α mRNA A/A0比值分别为0.65±0.07、0.43±0.08、0.19±0.03、0.08±0.02,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为0.84±0.08、0.39±0.06、0.28±0.04、0.08±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:竹节香附素A对缺氧条件下肝癌HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达具有抑制作用,并存在时间-剂量依赖性效应.     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

摘要：目的 研究竹节香附素A (Raddeanin A,RA) 对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭的活性影响,并初步探讨其作用机制。 方法 采用不同浓度的RA（0.125~50 μmol·L-1）处理?HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0 μmol·L-1)干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）作用HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA 对结肠癌细胞HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA作用后各组细胞中MMP-2、MMP-9基因及蛋白表达。 结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967 μmol·L-1和4.797 μmol·L-1,且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA 1.0,2.0,4.0?μmol·L-1浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多（P < 0.05,P < 0.01）;线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异有统计学意义（P < 0.01）;细胞内ROS含量显著增加（P < 0.01）,且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高（P < 0.01）。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组的细胞愈合率显著降低（P < 0.01）;RA 0.25,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组均能显著抑制HCT-116 细胞的迁徙能力（P < 0.01）,均能显著抑制HCT-116 细胞体外侵袭能力（P < 0.05,P < 0.01）。与空白对照组比较,RA 0.5,1.0 μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达水平显著降低（P < 0.05,P < 0.01）;RA 0.5,1.0?μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 蛋白相对表达水平显著降低（P < 0.01）。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达有关。     

近红外光谱技术快速测定醋香附中α-香附酮的含量

目的:醋香附的含量测定采用挥发油测定法,检测耗时长、操作复杂,且未规定具体有效成分及其含量评价指标。为解决此问题,探索采用先进的检测技术测定醋香附中具体有效成分的含量,结合近红外光谱技术,建立快速、准确的定量分析模型。方法:采用HPLC检测α-香附酮的含量,流动相甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~10 min,30%~73%A;10~40 min,73%~76%A;40~50 min,76%~30%A),检测波长252 nm;采用近红外光谱仪采集醋香附的近红外光谱图,以醋香附中α-香附酮的HPLC测量值为参考,建立偏最小二乘法(PLS)定量分析模型。结果:建立了α-香附酮定量模型,模型的内部交叉验证系数(R2),校正均方差(RMSEC),预测均方差(RMSEP)分别为0.987 5,0.006 2,0.007 2,交叉验证均方差(RMSECV)为0.020 4,经验证模型平均回收率101.33%。结论:该方法检测速度快、预测结果准确,可用于快速测定醋香附中α-香附酮的含量。     

应用复合磷脂脂质体人工皮肤膜表征香附四物汤活性部位生物药剂学性质

目的评价应用复合磷脂脂质体人工皮肤膜(CPLASM)测定参数表征香附四物汤(XSD)活性部位透皮吸收生物药剂学性质的可行性。方法建立HPLC方法同时测定XSD活性部位中活性成分(阿魏酸、四氢非洲防己碱、延胡索乙素、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H)的质量分数并测定其油水分配系数。制备CPLASM,用其测定XSD活性部位的体外透皮吸收参数,并与猪耳皮测得的透皮吸收参数进行比较。结果 XSD活性部位(pH 5.5)中阿魏酸、四氢非洲防己碱、延胡索乙素、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H的油水分配系数分别为1.220±0.280、0.670±0.085、0.920±0.110、1.040±0.092、1.030±0.093(n=3)。应用CPLASM和猪耳皮测得的各成分透皮吸收参数显著相关,相关系数均高于0.9。与经典的油水分配系数相比,5种活性成分透过CPLASM 6 h的累积透过率可以有效表征其透过猪耳皮的渗透系数。结论应用CPLASM测定中药活性成分体外透皮吸收参数能够有效表征中药活性部位的生物药剂学性质。     

香附5种方法提取液对兔离体肠平滑肌的影响

目的 比较香附经二氧化碳超临界流体萃取(SFE-CO_2)后药渣的5种方法提取液(SBE液、WE液、AE液、SBAE液 、WAE液)对兔离体肠平滑肌的影响.方法 以兔离体肠平滑肌收缩频率、幅度和张力为指标,采用BL-420E+生物机能实验系统,比较香附SFE-CO_2后药渣的5种方法提取液对正常及乙酰胆碱作用下的兔离体肠平滑肌的作用.结果 香附SFE-CO_2后药渣的5种方法提取液均能显著降低正常兔离体肠运动的频率和张力 (P<0.05);降低乙酰胆碱作用下离体肠管的幅度及张力(P<0.01);其中SBE提取液与其他提取液相比,表现出更强的抑制作用(P<0.05).结论 香附SFE-CO_2后药渣的5种方法提取液对兔离体肠平滑肌均具有抑制作用,其中SBE提取液的作用最强.     

香附炮制工艺探讨

香附子为莎草科多年生草本植物香附的干燥根茎。以山东产者称“东香附”，浙江产者称“南香附”，品质较佳。其性辛燥，味微苦。功能舒经活络，疏肝理气，常用于气血郁滞，胸胁院腹疼痛，月经不调等症，故有“气病之总司”，“妇科之主帅”之称。用香附子在市场销售分“光香附”和“毛香附”两种。本人通过在实际工作中的体会认为，以往的用石臼捣杵去毛方法有许多弊病，现将改进后的炮制方法简介如下。１ 方法 取原药材分为两档，以净细砂置锅内加热，达适宜温度，投入分档后的香附子。炒至表面微黑色，内为淡黄色时取出，筛去砂，待冷却后…     

通任种子汤加味治疗输卵管阻塞性不孕症71例

1977-1998年10月，我院行保留卵巢的子宫切除术3948例，发生残留卵巢综合征30例，占0．735％，现将其发病机理及防治探讨如下。     

加减香附旋覆花汤治疗肋骨骨折伴少量气血胸32例

香附旋覆花汤出自《温病条辨》，笔者在此基础上加减，用于治疗肋骨骨折伴少量气血胸，近3年来治疗32例，总结如下。 本组32例中，男23例，女9例；最大年龄63岁，最小19岁，病程最长10天，最短1天。均予加减香附旋覆花汤，方药组成：香附、旋覆花、炙苏子、半夏、郁李仁、桔梗、桃仁、红花、当归、赤芍、柴胡各10g，茯苓、延胡索各15g，薏苡仁30g。     

香附药材HPLC指纹图谱研究及相似度评价

目的：研究香附药材的HPLC色谱，并对其进行相似度评价。方法：采用梯度洗脱法测定12批香附药材的HPLC色谱，流动相为甲醇一水线性梯度洗脱，检测波长为254nm；记录时间为70min。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”进行评价。结果：12批香附高效液相色谱与对照HPLC指纹图谱比较，中位数相关系数在0．901～0．993之间，均值相关系数在0．913～0．996之间。结论：香附药材指纹图谱相似度较高。表明该方法准确、重复性好。     

香附的炮制及临床应用浅析

目的:浅析香附的炮制及临床应用。方法:对中药香附炮制的历史沿革、炮制方法及其炮制品生香附、炒香附、醋香附、酒香附、姜香附和四制香附的临床应用进行论述。结论:香附经过不同方法的炮制后所得中药饮片其功效各有侧重,香附生用上行胸膈,外达肌肤,多入解表剂;炒香附理气止痛;醋香附长于疏肝理气,去积,调经止痛;酒香附偏于行气通络;姜香附行气化痰;四制香附调气血,疏肝止痛。香附入药应根据不同的病症特点,合理选用相应的炮制品,以保证其临床应用的安全、有效。