水飞蓟素对缺氧人肝癌HepG⁃2细胞HIF⁃1α及MDR1 表达的影响

目的 探讨水飞蓟素(SM)对缺氧条件下人肝癌HepG‐2细胞中缺氧诱导因子‐1α (HIF‐1α)和多耐药基因1(MDR1)表达 的影响。 法 不同浓度的SM（0、10、20、40 mg/L）与浓度梯度的化疗药物(多柔比星、索拉菲尼、顺铂)处理HepG‐2细胞后应用四 甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度SM对HepG‐2细胞化疗药物敏感性的影响；在缺氧条件下，分别用0、10、20、40 mg/L 的 SM处理HepG‐2细胞8 h后，应用RT-PCR检测不同浓度SM对HepG‐2细胞的HIF‐1α及MDR1 mRNA表达水平的影响，利用蛋白 质印迹法检测不同浓度SM对HepG‐2细胞的HIF‐1α及P‐糖蛋白（P‐Gp)蛋白表达水平的影响。结果 随着SM浓度的增加，HepG‐2 细胞对化疗药物多柔比星、索拉菲尼和顺铂的敏感性逐渐增强；与对照组相比，10、20、40 mg/L SM处理的HIF‐1α mRNA表达量 差异无统计学意义（P>0.05)，而MDR1 mRNA表达量呈浓度依赖性降低（P<0.05)，10、20、40 mg/L SM处理的HIF‐1α与P‐Gp蛋白 表达水平呈浓度依赖性降低（P<0.05)。结论 SM可能通过在转录后水平抑制HepG‐2细胞HIF‐1α的蛋白表达而降低MDR1的mRNA 与蛋白表达，从而降低肝癌细胞的耐药性。     

大黄素抑制人肝癌HepG2细胞血管生成作用及其机制研究

目的 大黄素可促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,然而其是否可抑制肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)血管生成及其机制罕见报道.本研究探讨大黄素对人肝癌HepG2细胞血管生成以及缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1a,HIF-1d)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,以及大黄素体内抗肝癌机制.方法 采用体内鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验,实验随机分为阴性对照组(生理盐水)、大黄素低剂量组(10 μmol/L)、大黄素高剂量(20 μmol/L)和阳性对照组(0.15 mg/mL地塞米松),每组各10只,每24 h每组追加同样等量药物,共72 h,观察大黄素对CAM血管生成的抑制作用.体外培养HepG2细胞,以氯化钴(CoCl2)模拟化学缺氧,设立缺氧未处理组[阴性对照组(生理盐水)]、缺氧大黄素低剂量组(10 μmol/L)、缺氧大黄素高剂量组(20 μmol/L)和缺氧阳性对照组[10 μmol/L 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)],每组设6个复孔,处理24 h.采用小管形成实验,观察大黄素对HepG2细胞相对小管数目的影响,免疫细胞化学分析检测HIF-1α和VEGF阳性细胞的表达,Real-Time PCR分析检测HIF-1α mRNA和VEGF mRNA的表达.采用Graphpad 5.0软件进行描述性统计,组间比较采用one-way-ANOWA和Bonferroni检验.结果 CAM实验显示,实验组新生血管数目明显减少,与阴性照组比较,差异有统计学意义,F=13.374,P=0.002.阴性对照组新生血管数目为(31.47±1.81)个.给药后CAM血管生成减少,大黄素低剂量组、高剂量组和地塞米松组分别为(19.48±0.66)、(10.33±1.04)和(9.89±0.57)个,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.041、0.004和0.003;大黄素低剂量组和高剂量组与地塞米松组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.539和1.000.小管形成实验显示,实验组相对小管数目明显减少,与阴性照组比较,差异有统计学意义,F=21.529,P＜0.001.阴性对照组相对小管数目为(100.00±0.00)％.给药后,相对小管数目明显减少,大黄素低剂量、高剂量组和阳性对照组分别为(65.85±12.67)％、(46.94±8.34)％和(41.77±7.53)％,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.049、0.001和＜0.001;大黄素低剂量组和高级剂量组与阳性对照组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.104和0.069.免疫细胞化学分析显示,大黄素低剂量组、高剂量组和阳性对照组HIF-1α和VEGF阳性细胞显著减少.Real-Time PCR分析显示,实验组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA表达降低,与阴性照组比较,差异有统计学意义(F=31.908,P＜0.001;F=25.146,P＜0.001).阴性对照组HepG2细胞HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.92±0.15和0.95±0.15;大黄素低剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.45±0.07和0.51±0.08,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.021和0.013;大黄素高剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.32±0.05和0.40±0.07,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为＜0.001和0.001;阳性对照组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.30±0.04和0.34±0.05,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值均＜0.001;大黄素低剂量组、高剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达与阳性对照组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.663、0.362、0.443和1.000.结论 大黄素可能通过抑制HIF-1d mRNA的表达,从而降低VEGF mRNA的表达来抑制HepG2细胞新生血管的形成.     

缺氧时肝癌HepG2细胞HIF-1α对GLUT-1表达的影响及机制探讨

目的探讨缺氧状态下肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达对GLUT-1的影响。方法 HepG2人肝癌细胞株,以DMEM培养基加胎牛血清培养,分为常氧对照组(21%O2),缺氧组(1%O2),常氧加吲哚美辛组,缺氧加吲哚美辛组。收获细胞后,分别行免疫荧光法检测细胞内HIF-1α的表达和核转位;Western blot检测各组的HIF-1α、GLUT-1蛋白表达;RT-PCR检测各组的GLUT-1mRNA含量。结果缺氧时HIF-1α(蛋白:68.25±11.72)和GLUT-1(mRNA:0.7424±0.1127;蛋白:70.33±12.83)在肝癌HepG2细胞中的表达增高(P<0.05);缺氧时以吲哚美辛抑制HIF-1α蛋白(36.34±9.50)稳定和积聚后,GLUT-1 mRNA(0.3710±0.1016)及蛋白(38.46±12.20)表达受到抑制(P<0.05)。结论缺氧可以上调HIF-1α和GLUT-1在肝癌HepG2细胞中的表达;HIF-1α可以调控其下游靶基因GLUT-1的转录和表达,影响糖酵解和细胞能量的产生。     

HIF-1α／IL-8／NF-κB轴介导缺氧诱导肝癌细胞迁移、侵袭的实验研究

目的 探讨HIF-1α在缺氧条件下诱导肝癌细胞迁移和侵袭作用及可能的分子机制。方法 缺氧和正常培养条件下培养人正常肝细胞系WRL68、人肝癌细胞系HepG2和SMMC7721,实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting检测HIF-1α mRNA和蛋白的表达;HepG2细胞分别转染NC无义核酸序列（NC组）、siHIF-1α（HIF-1α组）和siIL-8（IL-8组）,Western blotting检测HIF-1α、IL-8和NF-κB蛋白表达;缺氧条件下干扰HIF-1α和IL-8并检测HepG2的迁移和侵袭能力的改变。结果 缺氧条件下,HepG2和SMMC7721细胞系中的HIF-1α mRNA和蛋白水平显著高于人正常肝细胞系。与空白对照组的0.98±0.104和NC组的0.92±0.032比较,HIF-1α组HIF-1α蛋白表达量显著下降为0.39±0.077,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺氧条件下HIF-1α组IL-8蛋白表达量为0.31±0.043,显著低于空白对照组的0.96±0.114和NC组的0.90±0.081,差异有统计学意义（P＜0.05）。缺氧条件下NC组HepG2迁移、侵袭细胞数分别为91.2±8.2和121.1±6.7,显著高于HIF-1α组的36.3±5.9和47.7±3.3,差异有统计学意义（P＜0.05）;亦显著高于IL-8组的49.4±5.6和39.6±5.1,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 HIF-1α通过调控IL-8表达促进缺氧诱导的肝癌细胞迁移和侵袭。     

HIF-1α基因干扰对大鼠CBRH-7919肝癌细胞HIF-1α与VEGF表达影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞在缺氧状态下表达HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,构建3组特异性较强的HIF-1α siRNA表达载体,采用小分子RNA干扰技术沉默细胞HIF-1α的基因表达,分别利用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞HIF-1α和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:在不同浓度CoCl2模拟缺氧条件下,随着CoCl2浓度的增高及时间的推移,肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达(mRNA及蛋白水平)较常氧对照组(0 μmol/L CoCl2)显著增多,差异均有统计学意义,P＜0.05.应用3组不同HIF-1α和siRNA表达载体转染缺氧条件下的肝癌细胞后,细胞的HIF-1α和VEGF的基因(mRNA)表达量与未转染HIF-1α siRNA表达载体对照组相比较明显减少,同步检测两者的蛋白表达亦明显减少,与对照组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达,siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下诱导的VEGF表达.     

水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞mTOR磷酸化及HIF-1α表达

目的:探讨水飞蓟宾对胃癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其可能的分子机制.方法:低氧条件下体外培养胃癌细胞系MGC803,用不同浓度水飞蓟宾处理后,分别采用Real-time PCR和Western blotting法检测HIF-1αmRNA、蛋白的表达以及mTOR和Akt的磷酸化水平,MTT法检测水飞蓟宾对MGC803细胞增殖的影响.结果:细胞低氧状态下生长4h后,与正常氧浓度组相比,细胞内HIF-1 α蛋白表达水平显著增高[(0.94 ±0.16)vs(0.015±0.03),P＜0.01)];经250 μmol/L水飞蓟宾处理后,与处理前相比,HIF-1α蛋白表达水平明显减少[(0.24±0.09)vs (0.94±0.16),P＜0.01].与正常氧浓度组相比,低氧并不能增加HIF-1α mRNA的表达[(0.074±0.011) vs (0.07±0.02),P＞0.05],即便加入250μmol/L水飞蓟宾处理对HIF-1αmRNA的表达也无明显影响[(0.081 ±0.011) vs (0.07±0.02),P＞0.05],但水飞蓟宾能显著增加泛素化HIF-1α蛋白的表达[(0.94 ±0.16)vs(0.24 ±0.09),P＜0.01];水飞蓟宾处理后能明显抑制mTOR磷酸化水平[(0.17±0.06) vs (0.53±0.14),P＜0.05)],并能明显抑制MGC803细胞的增殖[(52.94 ±6.15) vs (100±3.22),P＜0.05)].与处理前相比,50和100μmol/L水飞蓟宾处理对Akt磷酸化无明显影响[(0.16 ±0.09)、(0.17±0.06) vs(0.11±0.04),P＞0.05],但250 μmol/L水飞蓟宾处理后,细胞内Akt磷酸化水平明显增强[(0.33 ±0.06) vs(0.11±0.04),P＜0.05].结论:水飞蓟宾可能通过影响mTOR和HIF-1α的表达水平而发挥抗肿瘤活性.     

低氧刺激对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响及其机制的探讨

目的:探讨模拟低氧环境对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)、基质衍生因子-1(SDF-1)和趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响。方法:常规复苏、传代培养MCF-7细胞,待细胞对数期生长后分别用50、100、150和200μmol/L CoCl2处理细胞,并于12、24和48h收集细胞进行以下指标检测。MTT比色法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和CXCR4在蛋白水平的表达;免疫荧光法测定150μmol/L CoCl2经不同时间处理后MCF-7细胞中SDF-1的表达。结果:低氧模拟微环境中,应用CoCl2处理MCF-7细胞后有较明显抑制作用,实验中以CoCl2(50、100、150和200μmol/L)处理MCF-7细胞24h后抑制率分别为(54.62±0.07)%、(65.21±0.03)%、(80.15±0.01)%和(94.51±0.01)%;以CoCl2150μmol/L浓度处理细胞12、24和48h后,抑制率分别为(70.83±0.03)%、(80.15±0.01)%和(89.27±0.03)%;RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA的表达及HIF-1α和CXCR4蛋白的表达与低氧时间和CoCl2浓度有关,以低氧处理细胞24h及CoCl2浓度150μmol/L时最明显;免疫荧光结果表明CoCl2150μmol/L时MCF-7细胞SDF-1蛋白的表达随时间延长有增加。结论:CoCl2模拟低氧后,细胞生长受抑制呈时间和浓度依赖性;CoCl2浓度在50～150μmol/L时,HIF-1α、SDF-1和CXCR4在mRNA和蛋白水平表达上调并呈现时间和浓度依赖性。     

低氧条件下血红素加氧酶1过表达对人肝癌细胞的保护作用

目的 探讨低氧条件下人肝癌细胞(HepG2)中血红素加氧酶1(HO-1)过表达对细胞的保护作用,及其与低氧诱导因子1α(HIF-1α)的关系.方法 应用低氧气体(0.5%O2、94.5%N2、5%CO2)和化学模拟低氧(250 μmol/L CoCl2)方法 刺激HepG2细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,从mRNA水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达.采用Western bolt方法 ,从蛋白水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达及其相关性.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法 ,分析低氧刺激后细胞的存活率,以及低氧刺激同时抑制HO-1蛋白表达后细胞的存活率.采用超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒,检测低氧刺激细胞后总SOD的活性,以及抑制HO-1蛋白表达后细胞中总SOD的活性.结果 低氧诱导的HepG2细胞中,HO-1 mRNA和蛋白过表达.用锌原卟啉IX(ZnPPIX)抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达,可导致HepG2细胞在低氧应激条件下存活率明显降低(P<0.01).低氧条件下,HepG2细胞中总SOD的活性显著升高(P<0.05);而在抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达后,HepG2细胞中总SOD活性明显降低(P<0.01).低氧条件下,HIF-1α蛋白表达显著升高,抑制HIF-1α蛋白表达后,HO-1蛋白表达明显降低;而抑制低氧条件下HO-1的过表达后,HIF-1α蛋白表达没有明显改变.结论 低氧诱导HepG2细胞中HO-1蛋白的过表达依赖或部分依赖HIF-1α;HO-1的过表达对HepG2细胞抵抗低氧应激发挥保护作用;HO-1的过表达对处于低氧应激条件下细胞的保护作用可能源于SOD.     

辐射对人鼻咽鳞癌CNE1细胞系HIF-1α及MDR1表达影响的研究

目的:建立辐射诱导的人鼻咽鳞癌CNE1/R细胞系,检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和多药耐药基因(MDR1)及P-糖蛋白(P-gp)的表达.方法:采用直线加速器对体外培养进入指数增长期的CNE1细胞进行外照射,输出剂量率2Gy/min,2 Gy/次,隔日1次,3次/周,累积总剂量50 Gy,取照射完成后培养21 d的细胞进行检测;以来照射CNE1细胞作为对照.利用RT-PCR检测照射前后HIF-1α及MDR1 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测照射前后细胞HIF-1α及P-gp蛋白的表达.结果:RT-PCR法检测结果显示,未照射组与照射组鼻咽鳞癌细胞系CNE1中HIF-1α mRNA的半定量值分别为0.23±0.02和0.37±0.04 (t=5.42,P=0.01),MDR1 mRNA的半定量值分别为0.17±0.01和0.54±0.04(t=15.54,P=0.00),照射组较未照射组明显增高,P＜0.05;蛋白印迹法检测结果显示,未照射组与照射组鼻咽鳞癌细胞系CNE1中HIF-1α蛋白的半定量值分别为0.05±0.01和0.08±0.01(t=3.67,P=0.02),P-gp蛋白分别为0.01±0.01和0.04±0.01(t=3.67,P=0.02),照射组较未照射组明显增高,P＜0.05.结论:照射组人鼻咽鳞癌CNE1细胞系中HIF-1α和MDR1基因/P-gp蛋白表达均增高,提示核转录因子HIF-1α可能促进细胞内MDR1/P-gp的表达.     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的:研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响.方法:AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下(CoCl2 200μmol/L)48h后Western blot法测定A549细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组、AG490 50μmol/L、AG490 100μmol/L、CoCl2、CoCl2+AG49050μmol/L和CoCl2+AG490 100μmol/L组).IL-6 (3.85nmol/L)处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组,IL-6组).结果:JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显.缺氧条件下(CoCl2200μmol/L)能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著.IL-6能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.结论:在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达.JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用.     

姜黄素对人黑色素瘤细胞凋亡机制探讨

目的：观察姜黄素对人恶性黑色素瘤细胞系A375凋亡的影响作用,探讨姜黄素抗癌的作用机制。方法：将人恶性黑色素瘤细胞系A375等分为4组,分别用0、5、10和20μmol/L的不同浓度姜黄素对该细胞株作用48h后,通过MTT法测定细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用RT-PCR方法检测细胞BIRC mRNA的表达;蛋白质印迹法检测细胞BIRC7蛋白及Caspase-3蛋白的表达。结果：5μmol/L姜黄素对A375细胞增殖抑制率为（13.28±5.28）%,10μmol/L为（19.24±4.15）%,20μmol/L为（36.93±4.78）%,各组间差异有统计学意义,F=65.68,P〈0.01。5μmol/L姜黄素作用于A375细胞48h后凋亡率为（15.88±7.21）%,10μmol/L为（22.31±5.63）%,20μmol/L为（31.61±4.82）%,对照组为（3.36±1.54）%,各组间差异有统计学意义,F=25.78,P〈0.01。0μmol/L姜黄素作用A375细胞48h后BIRC7基因mRNA表达相对倍率为6.15±1.11,5μmol/L为4.54±1.23,10μmol/L为3.36±0.66,20μmol/L为2.54±0.65,各组间差异有统计学意义,F=4.743,P=0.015。0μmol/L姜黄素分别作用A375细胞48h后细胞BIRC7蛋白表达相对比值为0.88±0.36,5μmol/L为0.71±0.28,10μmol/L为0.56±0.14,20μmol/L为0.43±0.15,各组之间差异均有统计学意义,F=3.36,P=0.037。伴随姜黄素作用浓度的升高,A375细胞的生长呈显著抑制状态,呈剂量依赖性。肿瘤细胞生长、BIRC7mRNA和BIRC7蛋白表达水平均显著下调,呈剂量依赖性。结论：姜黄素可以抑制人恶性黑色素瘤细胞系A375的增殖,也可以促进其凋亡,具有抗癌作用,其作用机制之一可能通过下调BIRC7基因的表达促使黑色素瘤细胞凋亡。     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌HepG2细胞生长的影响并初探其机制。方法取对数生长期HepG2细胞设空白对照组、LP(5 μg/mL)组、LP(10 μg/mL)组、LP(20 μg/mL)组和顺铂(40 μg/mL)组,每组设10个复孔;各组分别给药干预48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经LP(10 μg/mL、20 μg/mL)或顺铂40 μg/mL干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G₀/G₁期而缩短G₂/M期,提高细胞凋亡率,上调促凋亡Bax mRNA表达并下调抑凋亡Bcl-2 mRNA表达,提高Bax/Bcl-2比值,上调Caspase-3蛋白表达,LP上述作用具有一定的剂量依赖性。结论 LP具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP干预细胞周期分布和调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

顺铂诱导肝癌细胞凋亡过程中的Survivin表达变化及意义

目的:研究顺铂体外对肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响。方法:培养人肝癌细胞株HepG2,加入2μg/ml的顺铂,对照组和加药后24h、48h分别以PT-PCR和免疫印迹技术检测Survivin mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。结果:顺铂体外对肝癌HepG2细胞作用后,对照组和加药后24h和48h的细胞凋亡率分别是(1.74±0.36)%,(9.38±1.10)%,(16.87±2.26)%;其Survivin mRNA则分别比对照组提高了1.3倍和2.8倍;蛋白分别提高了1.2倍和3.5倍。结论:顺铂可促使肝癌细胞内Survivin的表达上调,抵抗其诱导的细胞凋亡。     

β-榄香烯联合X线照射对肺腺癌A549细胞DNA损伤及修复影响

目的 探讨β-榄香烯联合放射对肺腺癌A549细胞DNA损伤及修复影响.方法 10、20 μg/mlβ-榄香烯作用于肺腺癌A549细胞24 h后进行X线照射.通过克隆形成实验观察β-榄香烯对A549细胞放射敏感性影响,采用彗星分析法探讨损伤修复的机制.结果 克隆形成实验结果显示β-榄香烯能增加A549细胞放射敏感性,10 μg/ml和20 μg/mlβ-榄香烯联合照射组的放射增敏比分别为1.55和1.64(D0值比)及1.43和1.75(Dq值比).20 μg/mlβ-榄香烯联合X线照射组与单独照射组和单独药物组0、2、6、24 h的彗星尾力矩相比有所增加,分别为7.16±2.61与0.95±0.65和1.81±1.23(F=231.24,P<0.01)、3.65±2.06与0.11±0.07和1.58±1.40(F=90.22,P<0.01)、2.09±0.83与0.1±0.05和0.45±0.25(F=238.44,P<0.01)、1.45±1.37与0.11±0.08和0.60±0.40(F=38.94,P<0.01),表明β-榄香烯与放射线联合对A549细胞DNA损伤增加和修复的抑制作用.结论 β-榄香烯对A549细胞放射敏感性的影响可能与其对DNA放射损伤及修复作用有关.

Abstract：

Objective To study if β-elemene can increase radiation-induced deoxyribonucleic acid (DNA) damage and decrease the damage repair.Methods Exponentially growing human lung adenocarcinoma cells (A549) were exposed to 10 or 20 μg/ml β-elemene for 24 h before irradiation.The effect of β-elemene on the in vitro radiosensitivity of A549 cells was evaluated using clonogenic assay.DNA damage and repair were evaluated using comet assay.Results Exposure to β-elemene before irradiation increased the radiosensitivity of A549 cells.The SERD0 for 10 μg/ml and 20 μg/ml β-elemene was 1.55 and 1.64, respectively.The SERDq for 10 μg/ml and 20 μg/ml β-elemene was 1.43 and 1.75, respectively.Combined treatment, comparing to irradiation or β-elemene treatment alone, induced higher levels of DNA damage and slower rate of damage repair.A549 cells exposed to 20 μg/ml β-elemene followed by irradiation showed a higher levels of tail moment (TM) than those exposed to irradiation or β-elemene alone at 0 h,2 h,6 h and 24 h after irradiation.The TM of the three groups at 0 h,2 h,6 h and 24 h after irradiation was 7.16±2.61,0.95±0.65 and 1.81±1.23(F=231.24,P<0.01), 3.65±2.06,0.11±0.07 and 1.58±1.40(F=90.22,P<0.01), 2.09±0.83,0.1±0.05 and 0.45±0.25(F=238.44,P<0.01), 1.45±1.37,0.11±0.08 and 0.60±0.40(F=38.94,P<0.01), respectively. Conclusions β-elemene can enhance the radiosensitivity of A549 cells through the enhancement of DNA damage and the inhibition of DNA damage repair.     

顺铂诱导肝癌细胞凋亡过程中的Survivin表达变化及意义

目的：研究顺铂体外对肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响。方法：培养人肝癌细胞株HepG2,加入2μg/ml的顺铂,对照组和加药后24h、48h分别以PT-PCR和免疫印迹技术检测Survivin mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。结果：顺铂体外对肝癌HepG2细胞作用后,对照组和加药后24h和48h的细胞凋亡率分别是（1.74±0.36）%,（9.38±1.10）%,（16.87±2.26）%;其Survivin mRNA则分别比对照组提高了1.3倍和2.8倍;蛋白分别提高了1.2倍和3.5倍。结论：顺铂可促使肝癌细胞内Survivin的表达上调,抵抗其诱导的细胞凋亡。     

Involvement of hypoxia-inducible factor-1-alpha in multidrug resistance induced by hypoxia in HepG2 cells

Aim of the study was to explore the influence of hypoxia on multidrug resistance related genes and the potential role of hypoxia-inducible factor-1-alpha (HIF-1alpha) in formation of multidrug resistance in HepG2 human hepatocellular carcinoma cell line. HepG2 cells were subjected to hypoxia in a cohort of exposed time. A cell model stably expressing HIF-1alpha was established by liposome-mediated transfection of plasmid pcDNA3/HIF-1alpha into HepG2 cells. Apoptosis of HepG2 cells exposed to hypoxia or transfected by plasmid pcDNA3/HIF-1alpha was detected by Flow Cytometry after administration of chemotherapeutic drug (5-Fu). Real-time fluorescent quantitative PCR and Western-blot technique were used to analyze the expressions of multidrug resistance related genes mdr1, MRP1 and LRP at mRNA and protein level, respectively. Apoptosis Index of HepG2 cells exposed to hypoxia stepped down as exposed time extended after administration of 5-Fu. The expression of mdr1, MRP1 and LRP gene and protein revealed a hypoxic time-dependent induction and was synchronous with the alterations of HIF-1alpha in HepG2 cells exposed to hypoxia. The expressions of these multidrug resistance related genes were remarkably increased in HIF-1alpha transfected HepG2 cells as compared to empty vector transfected cells. Apoptosis index of HIF-1alpha transfected cells was obviously less than that of control cells when they were simultaneously exposed to 5-Fu for 24hrs. In conclusion, ambient hypoxia might be one of the causes for the formation of multidrug resistance in HepG2 human hepatocellular carcinoma cell line. Hypoxia-elicited multidrug resistance related protein expression might be a pathway for resistance of HepG2 cells to chemotherapeutics and HIF-1alpha might be involved in this process.     

低氧模拟剂氯化钴诱导人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF表达的研究

目的在细胞水平探讨氯化钴（COCl2）诱导的缺氧状态下人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况及其相关性。方法ELISA技术和免疫组织化学技术检测不同浓度CoCl2组（200、150、100、50μmol／L,不加药组为对照组）、缺氧不同时间段（6、12、24、48h）对QBC939细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的影响。结果CoCl2可上调胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达,并且体现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系。ELISA检测：不同浓度组（200、150、100、50μmol／L、对照组）VEGF蛋白的浓度分别为（1215．8±8．1）、（1030．8±11．1）、（710．9±3．2）、（414-3±2．5）、（102．1±5．6）pg／ml,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧不同时间段（6、12、24、48h）VEGF蛋白的浓度分别为（397．8±3．5）、（701．9±7．2）、（1038．8±8．2）、（1229．8±19．8）pg／ml,任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测：不同浓度组（200、150、100、50μmol／L、对照组）VEGF蛋白的平均灰度分别为（123．1±5．9）、（146．9±4.3）、（154．6±4．9）、（162．7±4．5）、（172．7±1．8）,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,HIF-1α蛋白的平均灰度分别为（109．5±5．3）、（137．5±4．4）、（151．7±2．9）、（161．3±4．9）、（172．0±5．4）,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧不同时间段（6、12、24、48h）VEGF蛋白的平均灰度分别为（154．8±3．8）、（142．9±2．7）、（136．6±4．7）、（110．3±4．9）任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,HIF-1α蛋白的平均灰度分别为（155．3±6．4）、（142．9±2．7）、（137．4±4．4）、（105．4±6．2）,任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。分析不同浓度?     

肝癌缺氧诱导因子-lα异常表达与靶向干预的临床价值研究

分析肝癌组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达特征及沉默HIF-1α对癌细胞增殖的影响。方法:以免疫组化法分析自身配对的肝癌及癌周组织中HIF-1α表达。HepG2细胞转染靶向HIF-1α的miRNA干扰质粒,RT-PCR、Western blot检测HIF-1α基因及蛋白水平变化;酶联免疫吸附法检测培养液血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（ANG）-2表达;阿霉素预处理后,以Annexin V-FLUOS/PI双染法分析HepG2细胞凋亡率,并检测细胞周期改变。结果:肝癌及周围组织HIF-1α呈棕黄色颗粒状表达,定位于胞浆和胞核,其特征是癌旁组织全数表达高于癌灶组织（80.0%,χ2=22.35,P<0.001）,癌灶组织HIF-1α表达与肿瘤大小相关。HepG2细胞转染靶向HIF-1α miRNA干扰质粒后72 h,HIF-1α在转录水平下降87%,蛋白水平下降56%;培养液中VEGF和ANG-2表达水平分别减少54%和36%;HepG2细胞凋亡率为（22.46±0.61）%,G1期和S期比率分别为（61.49±1.12）%和（22.40±0.58）%;联合阿霉素后HepG2细胞凋亡率为（36.99±0.88）%,G1期和S期比率分别为（65.68±0.91）%和（19.47±1.34）%。结论:肝癌组织HIF-1α过表达与肝癌发展相关,沉默HIF-1α可有效调控下游血管生成相关基因表达,抑制癌细胞增殖,改善化疗药物敏感性。      

邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白和微管蛋白表达的影响

背景与目的： 探讨邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)和苯并[a]芘[benzo(a)pyrene,BaP]单独或联合染毒对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白和α-微管蛋白表达的影响。 材料与方法： 分离纯化大鼠睾丸支持细胞,以1、10、100 μg/ml DBP和0.1、1、10 μg/ml BaP单独或依次联合染毒12、24、48 h后,用免疫荧光方法检测细胞中波形蛋白和α-微管蛋白的表达。 结果： 与DMSO组比较,染毒24 h后,10 μg/ml DBP与1 μg/ml BaP均可诱导波形蛋白表达水平下降(P<0.05),100 μg/ml DBP组和10 μg/ml BaP组的波形蛋白下降更为显著(P<0.01),100 μg/ml DBP＋10 μg/ml BaP联合染毒组波形蛋白的表达显著降低(P<0.01)。染毒48 h后,DBP和BaP单独染毒中、高剂量组波形蛋白的表达显著降低(分别为P<0.05和P<0.01);联合染毒各组的波形蛋白表达与DMSO组相比均显著减少(P<0.05或P<0.01),但与DBP和BaP各对应剂量单独作用组并无显著差异(P>0.05)。染毒24 h后,10 μg/ml BaP组α-微管蛋白表达明显增加(P<0.05);48 h后,100 μg/ml DBP组α-微管蛋白表达显著上升(P<0.05), BaP各组α-微管蛋白表达均显著增加。 结论： 一定剂量的DBP和/或BaP可诱导大鼠支持细胞内波形蛋白表达降低,微管蛋白表达增加,二者联合作用呈现拮抗效应。