应用复合磷脂脂质体人工皮肤膜表征香附四物汤活性部位生物药剂学性质

目的评价应用复合磷脂脂质体人工皮肤膜(CPLASM)测定参数表征香附四物汤(XSD)活性部位透皮吸收生物药剂学性质的可行性。方法建立HPLC方法同时测定XSD活性部位中活性成分(阿魏酸、四氢非洲防己碱、延胡索乙素、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H)的质量分数并测定其油水分配系数。制备CPLASM,用其测定XSD活性部位的体外透皮吸收参数,并与猪耳皮测得的透皮吸收参数进行比较。结果 XSD活性部位(pH 5.5)中阿魏酸、四氢非洲防己碱、延胡索乙素、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H的油水分配系数分别为1.220±0.280、0.670±0.085、0.920±0.110、1.040±0.092、1.030±0.093(n=3)。应用CPLASM和猪耳皮测得的各成分透皮吸收参数显著相关,相关系数均高于0.9。与经典的油水分配系数相比,5种活性成分透过CPLASM 6 h的累积透过率可以有效表征其透过猪耳皮的渗透系数。结论应用CPLASM测定中药活性成分体外透皮吸收参数能够有效表征中药活性部位的生物药剂学性质。     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

摘要：目的 研究竹节香附素A (Raddeanin A,RA) 对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭的活性影响,并初步探讨其作用机制。 方法 采用不同浓度的RA（0.125~50 μmol·L-1）处理?HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0 μmol·L-1)干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）作用HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA 对结肠癌细胞HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA作用后各组细胞中MMP-2、MMP-9基因及蛋白表达。 结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967 μmol·L-1和4.797 μmol·L-1,且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA 1.0,2.0,4.0?μmol·L-1浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多（P < 0.05,P < 0.01）;线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异有统计学意义（P < 0.01）;细胞内ROS含量显著增加（P < 0.01）,且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高（P < 0.01）。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组的细胞愈合率显著降低（P < 0.01）;RA 0.25,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组均能显著抑制HCT-116 细胞的迁徙能力（P < 0.01）,均能显著抑制HCT-116 细胞体外侵袭能力（P < 0.05,P < 0.01）。与空白对照组比较,RA 0.5,1.0 μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达水平显著降低（P < 0.05,P < 0.01）;RA 0.5,1.0?μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 蛋白相对表达水平显著降低（P < 0.01）。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达有关。     

近红外光谱技术快速测定醋香附中α-香附酮的含量

目的:醋香附的含量测定采用挥发油测定法,检测耗时长、操作复杂,且未规定具体有效成分及其含量评价指标。为解决此问题,探索采用先进的检测技术测定醋香附中具体有效成分的含量,结合近红外光谱技术,建立快速、准确的定量分析模型。方法:采用HPLC检测α-香附酮的含量,流动相甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~10 min,30%~73%A;10~40 min,73%~76%A;40~50 min,76%~30%A),检测波长252 nm;采用近红外光谱仪采集醋香附的近红外光谱图,以醋香附中α-香附酮的HPLC测量值为参考,建立偏最小二乘法(PLS)定量分析模型。结果:建立了α-香附酮定量模型,模型的内部交叉验证系数(R2),校正均方差(RMSEC),预测均方差(RMSEP)分别为0.987 5,0.006 2,0.007 2,交叉验证均方差(RMSECV)为0.020 4,经验证模型平均回收率101.33%。结论:该方法检测速度快、预测结果准确,可用于快速测定醋香附中α-香附酮的含量。     

醋蒸香附炮制工艺研究

目的 建立醋香附蒸制炮制工艺,为提高醋香附质量提供参考。方法 采用浸出物检测、挥发油定量检测分析方法,考察辅料米醋稀释倍数、闷润时间、蒸制压力、蒸制温度及蒸制时间对醋香附质量的影响。结果 通过对不同炮制工艺得到的醋香附样品外观及指标成分测定比较,表明取药物质量20%的米醋,用米醋质量20%的水进行稀释搅匀,闷润70 h,蒸制压力为0.10 MPa,蒸制温度为110 ℃,蒸制时间为4.5 h（大档）或4 h（小档）,效果最佳。结论 该炮制工艺稳定可靠,相比《中国药典》2010年版的炒制炮制工艺,能更好地控制醋香附工艺参数,为醋香附的炮制提供了科学依据。     

二神散的气质联用分析及凝血活性研究

目的:研究二神散中化学成分及其凝血活性,为临床应用提供依据.方法:气质联用(GC/MS)分析化学成分,复制血瘀证动物模型,研究其凝血活性.结果:二神散挥发油提取物中共分析出62个化合物,其中18个成分含量超过1％,二神散显著缩短血瘀模型大鼠凝血酶原酶形成时间.结论:二神散中化学成分具有增强凝血活性的作用.     

香附油滴丸抗炎镇痛作用及其物质基础研究

目的: 探讨香附油滴丸抗炎镇痛作用及其物质基础,为香附油滴丸运用于防治妇科痛经疾病提供依据。方法: 采用角叉菜胶致小鼠足跖肿胀、二甲苯致小鼠耳廓肿胀及醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性升高模型,考察香附油滴丸的抗炎作用;运用醋酸致小鼠扭体、热刺激致小鼠疼痛模型,考察香附油滴丸的镇痛作用,并与阿司匹林和四制香附丸比较。采用高效液相色谱法检测香附油滴丸灌胃给药后在大鼠血清中的移行成分,考察其抗炎镇痛作用的可能物质基础。结果: 香附油滴丸连续5 d ig给药,100, 200 mg·kg^-1组均可显著减轻小鼠足跖及耳廓肿胀,降低小鼠腹腔毛细血管通透性,提高小鼠扭体法、热板法致疼痛的痛阈,香附油滴丸在血清中的移行成分主要为α-香附酮。结论: 香附油滴丸具有明显的抗炎镇痛作用,其物质基础可能主要是α-香附酮。     

香附醋制前后对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的:通过研究香附醋制前后对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,初步阐明“香附醋制增效”理论的机制.方法:采用Caco-2细胞模型,细胞以2×105/mL的密度接种于Trenswell 6孔板,加入体积分数分别为5％,10％,20％的香附生品及醋制品含药血清培养24 h,流式细胞仪检测香附醋制前后对Caco-2细胞Pgp功能的影响;免疫组化法检测P-糖蛋白的表达.结果:香附生品低、中、高浓度可使细胞内地高辛累积增加8.25％,9.57％,16.84％,醋制品低、中、高浓度可使细胞内地高辛累积增加22.44％,29.12％,33.09％.二者均可使细胞内地高辛累积增加,并使P-gp表达的阳性率降低,对P-gp功能和表达均呈现出抑制作用,且醋制品作用更加明显.结论:香附醋制后可增加其抑制Caco-2细胞P-gp功能和表达的作用,从而促进P-gp底物的吸收.     

坤复康胶囊质量控制方法的改进

目的完善坤复康胶囊的质量标准。方法采用TLC法鉴别制剂中的苦参和乌药,HPLC法测定制剂中的α-香附酮含量。结果方法的专属性、重复性和稳定性良好,α-香附酮对照品在8．876ng-221．9ng范围内呈线性关系,γ=0．9999,平均回收率为98．9％,RSD为0．71％（n=7）。结论完善后的质量标准可行,能有效控制坤复康胶囊的质量。     

星点设计-效应面法优化香附挥发油的β-环糊精包合物制备工艺

目的:优化香附挥发油的β-环糊精包合物制备工艺.方法:以饱和水溶液法包合挥发油,以包合率为评价指标,采用三因素五水平的星点设计考察β-环糊精一香附挥发油投料比例(m/v)、包合温度和包合时间对制备工艺的影响,对结果进行多元线性和二项式拟合,效应面法筛选出最佳工艺条件进行预测分析.结果:优化得到最佳包合工艺条件:β-CD:挥发油(w/v)为6,包合温度为42.5℃,包合时间为2.5小时.结论:通过星点设计-效应面法适用于香附挥发油β-环糊精包合物制备工艺优化,所建立的数学模型预测性良好.     

α-香附酮的分离及其解热镇痛作用研究

目的研究香附有效成分α-香附酮的解热镇痛作用。方法通过乙醇提取、硅胶柱层析分离、核磁共振等手段进行结构解析,确定中药香附中具有解热镇痛作用的有效成分为α-香附酮。再采用内毒素致家兔发热模型、小鼠醋酸扭体法、热板法实验,考察α-香附酮的药效作用。结果与模型组比较,α-香附酮能降低内毒素致家兔发热的体温(P<0.05),对醋酸所致的小鼠扭体反应有抑制作用(P<0.05),但是对热板法所致的小鼠痛阈反应时间无明显作用(P>0.05)。结论α-香附酮是香附发挥解热镇痛作用的有效成分之一,α-香附酮可能通过外周机制发挥镇痛作用。